增强基因治疗特异性的有效途径

基因治疗的特异性 (或靶向性 )是指针对某种与疾病相关的特定类型的细胞进行基因治疗而不影响其它细胞 ,是决定基因治疗可行性的重要因素之一。本文从基因导入水平、基因表达水平和基因作用水平总结了近年来在这一领域所作的尝试和进展。

肿瘤特异性报告基因载体的构建

目的 :构建一种能在肿瘤组织中进行肿瘤特异性表达的逆转录病毒载体 ,增强肿瘤基因治疗的靶向性。方法 :PCR法获得HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体PLXSN中 ,再将突变型绿色荧光蛋白(mtGFP)基因克隆至该启动子下游。结果 :质粒PLHSN经EcoRI和BamHI酶切后可切出 5 10bp和 5 .8kb两条片段 ;质粒PLHGSN经BamHI酶切可切出 5 2 0bp和 6 .7kb两条片段。 结论 :成功构建了携带HER2基因启动子和mt

重度特发性弱精子症患者精子鞭毛超微结构的研究(附22例报告)

目的:探讨重度特发性弱精子症患者精子鞭毛超微结构特点。方法:对22例重度特发性弱精子症患者的精子鞭毛结构进行透射电镜检查,观察其超微结构特点。结果:22例均存在鞭毛超微结构异常,6例表现为特征性的内外动力臂部分或完全缺失,符合原发性纤毛运动障碍;1例表现为纤维鞘过度增生、肥厚,组织结构紊乱,符合纤维鞘发育不良;15例表现为非特异性鞭毛结构异常,表现为微管结构的随机性、非均一性数量异常。结论:重度特发性弱精子症患者进行鞭毛超微结构检查具有重要意义,可区分先天性及后天获得性鞭毛结构异常,对后续治疗有指导价值。

血液免疫学现状及发展趋势

鉴于血液免疫学学科的快速发展,研究领域的不断扩大,研究内容的逐步深入,《中国免疫学杂志》作为中国免疫学会的会刊,有责任有义务推动此学科的进步,在中国免疫学会血液免疫学分会的大力协助下,本期开始推出"血液免疫学"这一栏目,希望通过杂志专栏的形式报道血液免疫学研究的新进展、新发现、新成果,为血液免疫学教学、科研及临床工作提供丰富和有价值的资料。本期中编辑部共向三位专家约稿,分别就血液免疫学现状及发展趋势、造血干细胞移植的临床免疫现状与进展及免疫相关性血细胞减少症三个方面进行阐述,以期从中为血液免疫学工作者提供一些有益的启发和借鉴。

维持性血液透析患者带涤纶套隧道导管肝素盐水封管效果的观察分析

目的评价维持性血液透析患者带涤纶套隧道导管应用肝素或肝素盐水封管的效果。方法维持性血液透析患者,由于各种原因(除外导管功能不良)拔除右颈内静脉带涤纶套隧道中心静脉导管,通过肉眼、扫描电镜对拔除导管不同部位导管内壁进行观察。结果肉眼观察,41.7%导管存在双腔完全堵塞性血栓形成,部位为自导管侧孔至导管顶端出口处,25.0%导管双侧管腔无明显血栓形成,33.3%存在单侧管腔堵塞性血栓;电镜观察,100.0%导管存在尖端及侧孔部位血栓形成,尤其侧孔、顶端切割边缘部位更明显。二分类Spearman相关分析显示导管尖端及侧孔部位血栓形成与血红蛋白水平相关(r=0.488,P=0.047),而与性别(r=0.236,P=0.362)、年龄(r=-0.113,P=0.667)、封管液是否稀释(r=0.436,P=0.080)、国际标准化比值(r=-0.339,P=0.183)、血小板(r=-0.187,P=0.473)、总胆固醇(r=0.037,P=0.887)、血钙(r=-0.188,P=0.470)、吸烟(r=0.169,P=0.517)、抗血小板药物(r=0.169,P=0.517)、糖皮质激素(r=0.169,P=0.517)、导管留置时间(r=-0.305,P=0.234)无关。将血红蛋白带入Logistic方程显著性不明显(OR=1.075,95%CI0.980~1.179,P=0.125),考虑与病例数少有关;导管其他部位电镜扫描检查,未见明显异常。16.7%发现导管内壁生物膜形成。结论导管顶端是血栓容易形成的部位,此处血栓形成与患者血红蛋白水平可能相关。

重组人红细胞生成素治疗脊髓冲击性损伤的实验研究

[目的]研究重组人红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)对脊髓冲击性损伤的治疗效果。[方法]24只新西兰白兔采用重物坠落的方法造成脊髓冲击性损伤。损伤12 h后,对照组静脉给予生理盐水;小剂量组、中等剂量组和大剂量组分别静脉给予rh-EPO 100、500、1000 IU/kg。损伤后24 h、48 h、1周评估下肢神经功能。损伤后1周时处死动物,脊髓标本进行HE和Caspase-3组化染色,电子显微镜评估超微结构损伤。[结果]EPO治疗组的神经功能评分明显高于对照组,HE染色和电子显微镜显示组织和超微结构损伤明显轻于对照组,Caspase-3阳性细胞数明显少于对照组。中等剂量组和大剂量组的治疗效果无显著性差异。[结论]脊髓冲击性损伤后12 h给予人红细胞生成素可减轻脊髓的组织和超微结构继发性损伤,并可对抗神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复。中等剂量EPO是治疗脊髓损伤的适当选择。

腺病毒介导神经生长因子对遗传性视网膜变性RCS大鼠视细胞的营救

目的 :探讨先天性视网膜变性病因以及对其进行基因治疗的可行性。方法 :TUNEL法对RCS大鼠视细胞的丧失进行研究 ;构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒 pAdE1CMV NGF ,经与 pJM17在 2 93细胞中同源重组 ,获得复制缺陷型重组腺病毒AdE1CMV NGF。琼脂糖覆盖法测定滴度。AdE1CMV NGF和AdE1CMV LacZ转导培养视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞。将AdE1CMV LacZ转导组进行x gal染色估计转导效率 ,取AdE1CMV NGF转导组RPE细胞及其条件培养液 ,用RT PCR和WesternBlot进行表达检测 ,用条件培养液刺激PC12细胞 ,证实表达活性。直接进行RCS大鼠视网膜下腔转导 ,一眼注射AdE1CMV NGF ,则另一眼注射AdE1CMV LacZ ,左右眼随机进行。光镜下观察视细胞存活情况。结果 :TUNEL法显示 2 5、35、45、5 5及 6 5dRCS大鼠视网膜视细胞层存在广泛凋亡 ;AdE1CMV NGF的滴度可达 5× 10 10 pfu/ml;4.6× 10 6pfu/ml滴度AdE1CMV LacZ可使RPE细胞发生 10 0 %转导 ;PC12细胞受AdE1CMV NGF转导RPE细胞条件培养液刺激长出突触 ;AdE1CMV NGF视网膜下腔注射使RCS鼠视细胞存活时间明显延长 ,达 15d以上。结论 :视网膜变性模型RCS大鼠视细胞的丧失是以凋亡方式进行 。

内涤纶套感染致腹膜透析导管相关性腹膜炎1例

1临床资料患者,女,57岁,因“腹膜透析10个月,腹膜透析液浑浊2天”于2019年2月12日入住北京大学国际医院肾内科。10个月前因呕吐、乏力就诊外院,诊断慢性肾脏病5期,于当月腹膜透析置管,手术切口处皮肤感染,给以局部换药和全身抗生素治疗1月后开始腹透析(peritoneal dialysis,PD)。方案为1800ml,4次/日,夜间干腹,超滤量±200ml/日,尿量约100ml/日。6个月和3个月前先后发生2次腹膜透析相关性腹膜炎(peritoneal dialysis associated peritonitis,PDAP),但腹膜透析液细菌培养均阴性,经抗炎治疗好转。入院前2天无诱因腹膜透析液浑浊,伴腹痛,低热,腹膜透析液常规检查:浑浊,白细胞3243/μl,多核细胞79%。血常规示白细胞7.59×109/L,中性粒细胞百分比82.3%,血红蛋白102g/L,C-反应蛋白48.27mg/L。既往史:膜性肾病4年,2年来血肌酐逐渐增高至810μmol/L,尿量减少至600ml/日。2型糖尿病,高血压,高脂血症及甲状腺功能减低病史。入院查体:体温37.5℃,血压158/85mmHg(1mmHg=0.133kPa),慢性肾病面容,心肺检查无异常。腹膜透析管在位通畅,导管出口见少量肉芽组织,无红肿,未见异常分泌物,挤压出口及皮下隧道压痛不明显,无溢脓。腹部触诊无异常。入院诊断PDAP。

复制缺陷型腺病毒AdE1CMV-NGF的制备

通过DNA重组技术 ,经亚克隆和克隆过程构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒pAdE1CMV NGF ;制备完整高纯度辅助病毒 pJM1 7。将 pAdE1CMV NGF和 pJM1 7在 2 93细胞中同源重组 ,获得复制缺陷型腺病毒重组体AdE1CMV NGF。梯度系列稀释测得滴度为 4 .6× 1 0 10 PFU/mL。

HER2启动子在卵巢癌细胞系中控制报告基因特异性表达

目的 构建一种能在卵巢癌肿瘤组织中进行肿瘤特异性表达的逆转录病毒载体 ,增强肿瘤基因治疗的靶向性。方法 PCR法获得 HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体 PL XSN中 ,再将突变型绿色荧光蛋白 (mt GFP)基因克隆至该启动子下游 ,将此载体转染 SK- OV3细胞和 MCF- 7细胞。结果 转染 3天后可见部分 SK- OV3细胞呈现绿色荧光 ,而 MCF- 7中无此现象。结论 HER- 2基因启动子可控制报告基因在卵巢癌细胞系中进行高效特异性表达 。

FHIT基因在喉癌中的缺失

ＦＨＩＴ基因缺失是人类多种肿瘤细胞中常见的遗传学改变之一。为了探讨ＦＨＩＴ基因与喉癌发生的关系，采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法，对１１例喉癌患者的癌组织及癌旁正常组织的ＦＨＩＴ基因进行了检测，结果：检出缺失８例，占７２．７％，首次发现了喉癌ＦＨＩＴ基因转录本的异常，经过测序证实了两例缺失。对ＦＨＩＴ基因的深入研究有助于揭开喉癌的发病机制，开辟喉癌基因诊治的新途径。

原发性不动纤毛综合征四例并文献复习

目的提高对原发性不动纤毛综合征的认识和诊断水平。方法对2007年1月至2009年8月北京协和医院经电镜证实存在纤毛超微结构异常的4例原发性不动纤毛综合征（PCD）的临床资料进行分析，并进行相关的文献复习。结果4例PCD中男性1例，女性3例；发病年龄0—10岁，确诊年龄15～53岁。临床表现：4例均有咳嗽、咳痰，鼻窦炎、喘息各3例，内脏反位2例，不育和不孕、中耳炎各1例；实验室检查：4例中低氧血症3例，阻塞性通气功能障碍伴有弥散功能减低2例，肺功能正常2例；胸部高分辨率CT示支气管扩张4例，双肺弥漫分布的微结节影3例，肺部斑片状影2例；电镜下可见动力臂缺失4例，纤毛稀少2例，微管排列异常或中央微管移位2例。结论不合并内脏反位的PCD易被漏诊。对幼年发病，胸部影像学表现为弥漫支气管扩张或弥漫树枝出芽征样微结节的患者，需要鉴别PCD。可通过电镜观察纤毛超微结构以明确诊断。

支气管肺泡灌洗液中纤毛柱状细胞与蠊缨滴虫甄别的临床研究

目的探讨我国现有文献中报道的蠊缨滴虫肺部感染是否被误判，蠊缨滴虫是否为引起肺部感染的致病原。方法对2012年6月至2013年5月北京大学人民医院诊治的6例肺部疾病患者BALF中发现的顶端带有纤毛的活细胞的活动状态、光镜特点及电镜下的超微结构进行研究，鉴定其来源和性质，确定是否为蠊缨滴虫，同时进行文献检索。以“蠊缨滴虫”和“Lophomonasblattarum”为关键词，在万方数据库、中国知识资源总库和PubMed数据库中检索相关文献，复习文献中提供的细胞图片及诊断方法，确定文献中肺蠊缨滴虫感染的诊断是否正确。结果6例患者BALF中发现的活细胞，在光镜及电镜下观察均表现为气道纤毛上皮细胞的特点，细胞核位于细胞的基底部，且不具有蠊缨滴虫特有的结构（萼器、核周小管、轴丝）。文献报道的蠊缨滴虫感染病例均依据细胞的活动性及具有纤毛的特点进行诊断，未对照文献报道的“蠊缨滴虫”的形态和结构进行超微结构研究。所有发表文献中的细胞染色图片与本研究发现的上皮细胞形态基本一致。结论在过去的20年中，我国报道的有关“蠊缨滴虫”肺部感染的病例均为误诊，目前尚不能确定蠊缨滴虫为引起肺部感染的致病原。

母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤一例

患者女，19岁，左下肢暗红色斑丘疹1年余，右腹股沟可触及一樱桃大小淋巴结。皮肤肿物组织病理检查：皮肤正常结构消失，可见淋巴样肿瘤细胞弥漫浸润，细胞中等大小，核仁不清楚；免疫组化：CD4（＋＋）、CD56（＋＋）、CD123（＋＋＋），TdT部分阳性。骨髓穿刺行流式细胞检查：异常细胞占59．9％，表达CD123st（IL-3Ra）、HLA—DRst、CD56、CD304（BDCA-4）、CD7、CD11b、CD33、CD36、CXCR4和CD13dim，部分细胞表达CD4和CD117。透射电镜观察骨髓细胞：可见大量形态大小均一的淋巴样细胞，细胞表面可见粗大突起，胞核胞质比例高，胞核圆形居中，有呈脑回样深切迹，异染色质块状边集，核仁多见，少量胞质，其中可见内质网、线粒体等细胞器，内质网均呈浆细胞样同心圆状排列。骨髓细胞表现兼具树突细胞及浆细胞特征。诊断：母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤。

研究生分子生物学基础理论课程中融入网络生物信息资源的探索与实践

网络生物信息资源不仅是科研的信息宝库,也为教学提供了种类繁多的数据资源和真实图片.在人类疾病的分子基础课程中融入一些必要的网络生物信息资源,利用生物网站真实的数据和图片帮助学生理解抽象的词汇和理论,使学生在掌握分子生物学以及疾病相关分子基础知识的同时,还能够在特定的问题情景中了解网络生物信息资源的内容和用途,以及生僻的生物信息符号,这样做有助于学生日后的课题研究.

鼻窦炎-中耳炎-双肺弥漫支气管扩张

原发性纤毛运动障碍(PCD)是一种罕见的常染色体隐性或X连锁相关的双等位基因变异遗传病,以纤毛运动障碍为特征。典型表现包括支气管扩张、分泌性中耳炎、鼻窦炎、内脏反位和不孕不育等,常因临床表现相似需与囊性纤维化(CF)鉴别。本文介绍1例幼年起反复咳嗽、咳痰伴发热的青少年女性,有分泌性中耳炎、鼻窦炎病史,曾考虑诊断CF。后经基因测序发现PCD相关致病基因复合杂合变异,结合临床表现、影像学特点,最终诊断为PCD。