三维可视化技术在急诊创伤及医患沟通教学中的应用分析

目的:探讨三维可视化技术在急诊创伤教学和医患沟通中的应用及效果。方法:选取60名实习医生为研究对象,随机分为观察组(30名)和对照组(30名),分别采用三维可视化及传统模式进行教学,依据客观成绩和主观评分评估教学效果。将同期创伤患者家属30人随机分为观察组(15人)和对照组(15人),分别借助三维立体图像及二维图像进行医患沟通教学,依据主观问卷调查的方式评估沟通效果。结果:在教学方面,观察组学生考核成绩及问卷调查评分均高于对照组,而医患沟通方面,观察组问卷调查评分高于对照组。结论:三维可视化技术应用到创伤教学及医患沟通中,不仅能够显著提高教学质量,同时提升医患沟通效果,值得临床应用。

Circ_0032821/miR-936/CEP55调控轴在胃癌组织中的表达及与临床特征之间的关系

目的通过生物信息学技术构建胃癌相关circRNA的内源竞争性RNA(ceRNA)调控网络并探讨其临床意义。方法挖掘基因表达图谱(GEO)数据库中差异表达的环状RNA(circRNA)、微小RNA(miRNA)、信使RNA(mRNA),Cytoscpe软件构建circRNA、miRNA、mRNA之间的ceRNA调控网络,并对差异表达的mRNA进行基因本体论和京都基因与基因组百科全书数据库通路富集分析,最后利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库的343个胃癌组织标本和30个正常组织标本的临床资料对ceRNA网络中的mRNA进行生存分析和表达验证,筛选其中重要的circRNA-miRNA-mRNA调控网络。在胃癌组织中对ceRNA的表达进行初步验证,并分析其与临床特征之间的关系。结果构建的circRNA-miRNA-mRNA调控网络中包含6个circRNA、4个miRNA和21个mRNA。根据TCGA数据库中胃癌患者临床资料分析和表达验证,ceRNA网络中CEP55和CCDC80与患者生存预后相关,CEP55在胃癌肿瘤标本中的表达显著高于正常组织标本中的表达,差异有统计学意义(P<0.05),最终筛选出circ_0032821-miR936-CEP55是胃癌的关键调控网络。经临床验证发现circ_0032821、miR-936及CEP55均在胃癌组织中差异表达,且circ_0032821的表达量与临床分期、淋巴结转移及浸润深度密切相关。结论circ_0032821-miR-936-CEP55调控轴在胃癌组织中差异表达,且circ_0032821表达与胃癌的进展相关。

真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法

目的真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F),并完成蛋白纯化及纯度测定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,PCR方法扩增出3′端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,72h后再用Western blot检测目的蛋白的表达。Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度。结果核酸序列分析证实获得带His标签的RSVF基因序列,没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上。结论初步建立了真核表达RSVF蛋白的纯化方法,为进一步优化RSVF蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础。

实质性正当程序在美国的实践——以艾比盖尔联盟诉冯埃森巴赫案为例

实质性正当程序有两个主要内容,分别是正当程序所保护的宪法基本权利和正当程序的审查标准。在结合了事实、政策、实质性正当程序的案件中,还要平衡并尊重行政权。由于正当程序条款的用语抽象,具有很强的包容性,因而在给法官留有较大解释空间的同时,也常常成为审理实质性正当程序案件的焦点。

红细胞分布宽度、平均血小板体积对急性胰腺炎患者诊治的意义

目的探讨红细胞分布宽度(red cell distribution width,RDW)、平均血小板体积(mean platelet volume,MPV)与急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者病情相关性。方法选取我院2019年1月~9月出院的65例AP患者为研究对象,根据Ranson评分或改良Balthazar CT评分将AP患者分为轻型AP组和重症AP组,回顾性分析2组患者临床资料,比较2组患者血液学指标、严重度评分之间的差异,应用Logistic回归分析患者严重性的独立危险因素,应用Pearson相关系数分析血液学指标与严重度评分之间的相关性,计算出RDW、MPV预估AP严重性的灵敏度、特异度,并绘制相应的ROC曲线。结果2组患者在RDW、MPV、血钙、血糖、严重度评分之间差异显著。多因素logistic回归分析显示RDW、MPV、Ranson评分是AP患者严重性的独立危险因素,RDW、MPV与严重度评分成明显正相关,预测AP严重性的特异度分别为45%、87.%,灵敏度分别为96%、48%,其ROC下面积分别为0.724、0.694。结论RDW、MPV对AP患者的严重性有很好的预测价值,尤其是联合时可对重型AP患者早期预警。

问题导向下初中数学“综合与实践”教学实践

初中数学课程教学过程中,实践活动的开展是教学训练的关键环节,同时也是课程内容的重要组成部分,基于问题情境发展的初中数学综合实践活动能够强化数学教学任务的情景化和任务化的开展,尤其是结合问题情境能够强化学生们自我反思意识的培养,进而提升其学习能力.同时问题导向的教学活动也能够充分激发学生们的学习兴趣,促进学生们在活动中提升解决问题的能力,本文结合上述要点展开教学策略的探析,为横向的一线教学提供参考和借鉴.

多芯片联合筛选小肠克罗恩病相关致病基因及诊断效能分析

目的联合多个芯片筛选小肠克罗恩病相关致病基因,并分析其诊断效能,以便从分子水平探索疾病的调控机制。方法通过GEO数据库检索并下载相关芯片数据集。利用GEO在线分析工具筛选差异表达的miRNA、R语言筛选差异表达的mRNA,构建miRNA-mRNA调控网络。差异表达的mRNA通过R语言进行GO富集和KEGG通路富集分析,运用String数据库构建蛋白互作网络(PPI)、Cytoscape软件筛选关键基因,应用ROC曲线进行诊断效能分析。结果GSE102127数据集中共筛选出15个差异表达的miRNA,GSE20881、GSE75214、GSE102133数据集融合后筛选出273个差异mRNA,构建38个miRNA-mRNA调控关系对。差异mRNA GO富集在白细胞迁移、中性粒细胞迁移等生物过程;KEGG富集注释表明差异基因主要参与IL-17、肿瘤坏死因子等信号通路。Cytoscape软件的cytoHubba模块下基于“Degree”、“MCC”、“Betweenness”算法筛选排名前10的关键基因,取交集后得到IL-6、IL-1β、MMP9及ICAM14个关键基因。ROC曲线分析发现仅MMP9可用于诊断小肠克罗恩病,其P值为0.025,AUC为0.361,敏感性100%,特异性31%。结论多芯片联合成功筛选出小肠克罗恩病致病基因,并构建了miRNA-mRNA调控网络,致病基因尚无法作为小肠克罗恩病早期诊断的分子标志物。

辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率

构建可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012颗粒数(Virus particle,vp)/mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体(First generation adenoviral vector,FGAd)FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2000vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。

呼吸道合胞病毒感染滴度测定方法的建立与比较

目的建立稳定的呼吸道合胞病毒（RSV）感染滴度测定的实时荧光定量PCR（Realtime Quantitative PCR，Q-PCR）检测方法和酶免疫斑点法（Enzyme Immunospots，EIS），并与半数定量方法（50％tissue culture infectious doses，TCID50）进行比较。方法分别采用Q-PCR、EIS和TCID50分析RSV感染的细胞和RSV攻毒后小鼠肺脏标本中的病毒滴度。结果RSV感染细胞的上清中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为：Q—PCR和EIS（pfu）的比约为10：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为10：1；RSV攻毒后小鼠肺脏标本中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为，Q—PCR和EIS（pfu）比约为1000：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为5：1。结论成功建立了RSV感染滴度测定的Q-PCR和EIS分析方法，通过与TCID50方法的比较分析，我们认为EIS法分析RSV滴度具有成本低和较高的灵敏度，有较好的应用前景。

增强型绿色荧光蛋白的真核表达和纯化

根据编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的开放读码框(open reading frame,ORF)设计引物,PCR方法扩增出5'端带His标签的EGF PORF,利用杆状病毒表达系统构建表达EGFP基因的重组杆状病毒DNA分子,转染sf9细胞。取细胞培养上清进一步感染sf9细胞,荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达,Ni柱亲和层析纯化表达的EGFP蛋白,并将纯化后的EGFP用于EGFP特异性体液分析。结果显示成功克隆了EGF PORF,荧光显微镜观察到重组杆状病毒表达的EGFP,Ni柱亲和层析可获得纯度达90%的EGFP蛋白,纯化后的EGFP蛋白仍然具有良好的免疫原性,能作为包被抗原分析体液免疫效果。利用杆状病毒表达系统制备EGFP,具有产量高、纯化方便及生物活性好的特点。

抗呼吸道合胞病毒融合蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定

目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法:以RSV F蛋白为靶抗原,通过"吸附-洗涤-洗脱-扩增"过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coliHB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western blot及Dot blot分析。结果:经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western blot及Dot blot分析表明为单链抗体。结论:利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。

呼吸道合胞病毒分泌型融合蛋白的真核表达和纯化

目的研究人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial viruse，RSV）分泌型融合蛋白（secreted fusion protein，sV）基因在杆状病毒中的表达及纯化。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物，以PCR方法将F蛋白基因的跨膜区和胞质区核酸序列替换为6×His核酸序列，获得COOH’端带有His标签的重组SF-His蛋白编码基因，利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，构建可表达sF蛋白的重组杆状病毒，用脂质体Cellfeetine reagent转染sf9细胞，实现sF在sf9细胞中的表达，Ni柱亲和层析纯化sF蛋白。结果成功获得了sF-His编码基因，构建的重组杆状病毒可高效表达sF，Ni-柱纯化后sF的浓度为1．084mg／ml，纯度达90％以上。结论杆状病毒系统是制备sF的有效方法，纯化的sF蛋白为RSV新型疫苗及单克隆抗体和诊断试剂等研究奠定了基础。

人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建

【目的】构建RSV微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。【方法】构建含RSV病毒前导序列(Leader,genomic promoter,Le)、转录起始信号(gene start,GS)、多克隆酶切位点、转录终止信号(gene end,GE)和尾随序列(Trailer,antigenomic promoter,Tr)的基因片段GSGE,通过引入T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase,T7RNP)启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)等多步操作,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。同时构建可表达大蛋白(large protein,L)的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子(M2ORF1protein,M2-1)的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7RNP的BSRT7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。【结果】成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达。【结论】构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,将有助于进一步开展以RSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研发及药物筛选。

基于光动力的透明质酸纳米凝胶的研究

目的 制备载酞菁锌透明质酸纳米凝胶,并考察其产生自由基的能力。方法 以透明质酸为亲水大分子、胆固醇为疏水小分子、己二酸二酰肼为连接基团,制备两亲性透明质酸衍生物。以所制透明质酸衍生物为载体材料,制备载光敏剂酞菁锌的纳米凝胶,并测定其包封率、载药量及产生自由基的能力。结果 成功合成了透明质酸衍生物,并制得粒径约205 nm的载酞菁锌透明质酸纳米凝胶。所制载药纳米凝胶的包封率为81.78%,载药量为3.22%。载酞菁锌纳米凝胶经激光照射后自由基的产量明显高于未经激光照射的载药纳米凝胶。结论 制备的两亲性透明质酸衍生物可通过物理自组装形成纳米凝胶,红外激光照射可促进负载酞菁锌的纳米凝胶产生自由基,具有用于光动力治疗的潜力。