多糖抗病毒活性的研究进展

病毒感染性疾病严重危害人类健康,在寻找有效抗病毒药物的过程中,人们发现多糖具有良好的抗病毒活性。多糖作为有效、低毒的抗病毒成分具有广阔的药用前景,值得进一步研究。从多糖的抑制病毒吸附、干扰病毒复制和提高机体免疫力方面简要介绍了多糖抗病毒活性的可能机制。

仙鹤草多糖的分离纯化及理化性质研究

目的从中药仙鹤草中提取仙鹤草多糖,并对其理化性质进行研究。方法利用水提醇沉法得粗多糖,并依次经纤维素DE-52柱和Superdex-200凝胶柱色谱进行纯化。采用光谱法和色谱法对其总糖含量、单糖组成、相对分子质量等理化性质进行研究。结果分离纯化的仙鹤草多糖HAPⅢ总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量分别为81%,3.4%,45%,由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、岩藻糖、木糖组成,摩尔比为5.65∶2.67∶2.61∶1.86∶1.12∶1.09∶1。其平均相对分子质量为1.90×105。结论仙鹤草多糖HAPⅢ是一水溶性酸性杂多糖。

人TANK结合激酶1的基因克隆、表达及生物活性鉴定

目的:克隆人TANK结合激酶1(TBK1)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:应用RT-PCR方法,以HeLa细胞RNA为模板,扩增获得TBK1基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中,以LipofectAMINE2000转染试剂转染pcDNA-Flag-TBK1至293细胞中进行瞬时表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,从人HeLa细胞总RNA中克隆到正确的TBK1基因全长编码序列,利用Western印迹检测其在293细胞中获得有效表达,利用萤光素酶报告基因实验检测TBK1可以诱导IFN-β转录激活。结论:真核表达的人TBK1具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。

TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的构建、表达及生物活性鉴定

目的:构建TANK结合激酶1(TBK1)相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,检测该基因相关突变体在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:根据文献报道的突变序列及QuickChange Site-Directed Mutagenesis实验设计手册,设计合成2条针对TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的引物,以实验室之前构建的TBK1野生型真核表达载体为模板,构建TBK1激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,分别命名为pcDNA3-Flag-TBK1(KD)、pcDNA3-Flag-TBK1(ΔULD)。以LipofactAMINE2000转染试剂转染至293细胞中进行瞬时表达,利用萤光素酶实验检测2种TBK1突变体诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体真核表达载体构建成功,Western印迹检测表明其在293细胞中获得有效表达;用萤光素酶报告基因实验检测,与野生型TBK1相比,其相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体诱导IFN-β转录激活的作用明显降低。结论:真核表达的TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。

人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选

目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1。用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰TBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台。

小鼠GP73敲低质粒的构建

目的:用p SUPER-NEO空载体构建可以敲低小鼠高尔基蛋白73(m GP73)表达的重组质粒p SUPER-m GP73-si RNA,并鉴定其功能。方法:合成靶向m GP73基因区的3条小干扰RNA(si RNA)m GP73-si RNA1、m GP73-si RNA2和m GP73-si RNA3,通过细胞实验挑选干扰效率大于60%的si RNA,用于合成能够敲低m GP73的重组质粒;重组载体经双酶切和测序鉴定正确后转染4T1细胞,检测转染质粒后细胞内m GP73的m RNA水平;将重组质粒p SUPER-m GP73-si RNA经尾部静脉注射小鼠体内,测定小鼠胃组织中m GP73的m RNA水平。结果:构建了p SUPER-m GP73-si RNA重组质粒;在转染该载体后,小鼠乳腺癌4T1细胞m GP73的m RNA表达下调43%;小鼠体内注射该载体后,胃组织中m GP73的m RNA表达受抑制率为33%。结论:构建了针对m GP73敲低的p SUPER-m GP73-si RNA质粒,可以较明显地下调鼠细胞系和小鼠胃组织m GP73的表达。

基于波特竞争优势理论的“柳州螺蛳粉模式”研究

系统梳理柳州螺蛳粉产业的发展脉络之后,可以从市场规模、技术创新、产业链延伸与政府引导等维度,将其发展划分为产品初创期、平稳发展期、全国开拓期和全面爆发期等四个阶段。根据其产业腾飞的成功经验和波特竞争优势理论,以及饮食人类学和产业经济学理论,可以构建出民族地区特色产业升级的“柳州螺蛳粉模式”,这个模式包含生产要素、需求条件、企业战略、相关产业、政府作为和机会把握等六个要素。通过对这些问题的研究,可以为数字时代民族地区特色产业的升级发展提供管理启示。

c-abl通过与雌激素受体β相互作用上调其转录活性

雌激素受体β(ERβ)在心血管疾病发生发展中起着重要的作用,但是其在心血管病中发挥作用的机制还不清楚.因此寻找与ERβ相互作用的共调节因子对阐明ERβ信号通路具有重要价值.应用GST沉淀、免疫共沉淀技术,发现ERβ可以与c-abl相互作用,并可被c-abl磷酸化.通过荧光素酶报告基因方法发现,c-abl可以上调ERβ转录激活的活性,并且上调作用可以被c-abl的抑制剂STI571抑制.上述结果提示c-abl是新的ERβ共刺激因子,为进一步研究ERβ通路在心血管疾病中发挥作用的机制打下基础.

As2O3联合FuDR、CAP、THP介入治疗中晚期肝癌的疗效对比及意义

目的分析在中晚期肝癌患者采用三氧化二砷(As_2O_3)联合脱氧氟脲苷(FuDR)、卡铂(CAP)、吡柔比星(THP)介入治疗的临床疗效。方法选取我院2014年10月至2015年10月收治的115例中晚期肝癌患者为研究对象。按随机数字表法分为对照组和观察组,对照组57例行常规肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗,观察组58例行As_2O_3联合FuDR、CAP、THP介入治疗。治疗4个月后比较两组患者临床疗效、肝功能及不良反应。结果观察组治疗有效率、获益率分别为48.3%、87.9%,明显高于对照组的29.8%、68.4%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后肝功能情况明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应主要为恶心呕吐、肝功能损伤、骨髓抑制、疼痛、发热,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用As_2O_3联合FuDR、CAP、THP介入治疗中晚期肝癌,可有效提高临床疗效,无严重不良反应,且治疗后的肝功能情况明显优于单纯使用TACE治疗,是一种治疗中晚期肝癌的较佳选择。

餐饮创新促进高星级酒店可持续发展的路径研究

随着社会经济的快速发展和人民生活水平的日益提高,食客们对餐饮需求有了全新的认知和想法,追求一种心神愉悦的体验。而高星级酒店的餐饮作为高端餐饮的象征,面临着巨大的机遇和挑战。当前,受全球新型冠状病毒疫情影响,酒店餐饮行业的竞争是愈发激烈。在高星级酒店餐饮板块中,面对人力资源、设施设备、管理成本不断上涨,需要从品牌、资源、主题文化等方面深入挖掘其核心竞争优势,提升其餐饮综合运营和收益水平。藉由此,创新经营管理理念、定位精准、取长补短、打造酒店之高品质餐饮是高星级酒店可持续发展的基本路径。

紫杉醇联合TLR7/8激动剂3M-052诱导小鼠结肠癌CT26细胞凋亡的研究

目的:探讨紫杉醇联合Toll样受体7/8激动剂3M-052诱导小鼠结肠癌CT26细胞凋亡的作用及其机制。方法:使用不同浓度的3M-052和PTX联合处理CT26细胞,24 h后检测细胞活力,分析PTX与3M-052协同作用的浓度;并采用Western blot法检测CT26细胞中的Bax、Bcl-2、active-Caspase3以及cleaved-PARP I的表达情况。结果:3M-052可以明显上调小鼠PBMC分泌的TNF-α;3M-052与PTX单药或联用时均可上调Bax/Bcl-2比例,促进Caspase3活化,增强PARP I蛋白剪切,最终导致细胞凋亡。结论:3M-052或PTX单独使用均可促进CT26细胞凋亡,抑制其增殖,联用时效果更佳。

肝素诱导的血小板减少症一例

患者,男性,24岁,汉族,未婚。主因左下肢肿胀、疼痛3d,于2016年5月1日10：15经门诊入院。患者于入院前3d,午休后发现左下肢肿胀伴疼痛,皮肤潮红,未予以诊治,症状逐渐加重,无发热,无心悸、气短,无咳嗽,未经治疗来我院门诊就诊,左下肢静脉超声示：左侧髂外静脉、股总静脉、股深静脉、股浅静脉血栓,左侧腘静脉、小隐静脉、胫后静脉内径增宽,血流速度减慢。门诊以＂左股髂静脉血栓＂收入院。

新时期企业社会保险信访工作浅析

新时期,无论是党和国家的各项事业,还是企业自身的改革发展,都更加需要一个安定团结、和谐稳定的社会环境。目前,企业社会保险信访工作的形势并不乐观,“期待型”问题日益凸显、“施压型”问题比重增大、“闹访型”问题积压增多。做好新时期企业社会保险信访工作,一要明确企业参保人员上访的根源,减少非正常信访现象;二要建立企业“特色”社会保险信访机制,提高对信访工作的重视程度;三要积极宣传企业社会保险相关政策,增强广大群众对于政策的理解;四要坚决制止“闹访”行为,保障企业社会保险工作正常顺利开展。

酵母双杂交技术筛选与RIG-Ⅰ相互作用蛋白

目的:筛选人脾细胞cDNA文库中与维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)所编码蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法:通过聚合酶链反应(PCR),以HEK293T细胞RNA为模板扩增RIG-Ⅰ基因的2CARD结构域部分,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒pGBKT7-RIG-Ⅰ2CARD,转化到酵母细胞AH109感受态中,得到阳性克隆AH109[RIG-Ⅰ2CARD]。然后将人脾细胞cDNA文库转化进AH109[RIG-Ⅰ2CARD],在含有X-α-半乳糖(X-α-Ga1)四缺营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选,挑取单克隆菌落抽提质粒,并进行测序,再进行生物信息学分析。结果:成功构建酵母诱饵蛋白表达质粒pG-BKT7-RIG-Ⅰ2CARD,并能在酵母中表达。筛选出阳性菌落59个,经生物信息学分析,最后从脾细胞cDNA文库中筛选出12个与RIG-Ⅰ2CARD有相互作用的蛋白基因。结论:成功克隆出RIG-Ⅰ2CARD基因,并从脾细胞cDNA文库中筛选出12种能与RIG-Ⅰ2CARD具有相互作用的蛋白基因。

前半胱天冬酶-1及活性位点突变真核表达载体的构建、表达及生物活性鉴定

目的构建和表达前半胱天冬酶(procaspase)-1及其活性位点C285A突变真核表达载体,并检测其生物学活性。方法从人胚肾细胞系HEK293中提取总RNA,逆转录后,PCR获得前半胱天冬酶-1全长DNA,并通过重组PCR获得其酶活性位点突变片段,酶切连接到载体pcDNA3-Flag中,经鉴定将阳性克隆测序;脂质体转染两种载体到HEK293中表达,用免疫印迹检测目的蛋白的表达,并用酶联免疫吸附方法检测在病原菌毒力蛋白刺激下,前半胱天冬酶-1及C285A对IL-1β分泌的影响。结果构建的2种真核表达载体能够在HEK293中很好表达,当前半胱天冬酶-1过表达时,病原菌毒力蛋白可以刺激IL-1β的分泌,而C285A酶活性位点突变之后,IL-1β的分泌明显降低。结论构建重组的pcDNA3-Flag-procaspase-1具有生物学活性,而C285A突变导致前半胱天冬酶1丧失切割底物的功能,且使IL-1β的分泌明显降低。

人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选

目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。

线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达

目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。

保脾手术治疗脾破裂45例临床体会

目的总结脾损伤后的保脾手术治疗体会。方法对实施各种保脾手术45例患者的临床资料进行回顾性分析。结果45例均经保脾手术治愈。结论保脾手术是一种治疗多种因素造成脾破裂的方法。