猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like株的分离鉴定及基因组分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地区某猪场疑似患有PRRS的肺脏,接种至猪骨髓源巨噬细胞,分离获得1株PRRSV毒株,命名为XJYQ-2021。通过测序得到全基因组序列,对该毒株NSP2氨基酸序列缺失、ORF5及全基因组序列进行同源性、遗传进化及重组分析;利用间接免疫荧光试验进行鉴定,同时对第10、15、20代病毒液绘制生长曲线。结果显示,诱导分化的猪骨髓源巨噬细胞纯度高达90%以上,XJYQ-2021分离株在该细胞生长良好,可见明显细胞病变;通过生长曲线可观察到病毒含量随代次增加而递增,感染48 h左右病毒滴度达到峰值;该分离株基因组全长15030 nt,与美洲型NADC30同源性为90%;XJYQ-2021分离株与VR2332相比,NSP2氨基酸序列与美洲型NADC30具有相同不连续缺失(111+1+19);全基因重组分析结果表明,XJYQ-2021分离株是重组病毒,有一个重组片段,其中NADC30是亲本毒株,与JXA1之间发生重组获得。研究结果可为PRRSV的病毒分离提供优选细胞种类,同时掌握了新疆地区PRRSV流行毒株的遗传进化现状。

当前世界民族问题对我国的影响及对策

纵观世界，随着冷战时代的结束，一度被掩盖和弱化的民族问题又开始活跃起来，民族国家间的互动、民族意识的消长导致民族分裂主义日益抬头，泛民族主义死灰复燃，地区性民族冲突频频出现，严重危及了人们的生命财产安全，对国家的安全稳定甚至世界和平构成了严重威胁。……

鸭源禽副黏病毒4型对鸡的致病性分析

为了探究鸭源禽副黏病毒4型(APMV-4)对鸡是否存在潜在致病性,本实验以鸭源APMV-4新疆分离株通过尾胸气囊途径感染一周龄SPF鸡12只,24 h后取12只同日龄SPF鸡同居饲养,作为模拟自然感染组,同时以PBS接种的雏鸡做为阴性对照。感染后每天观察各组鸡的临床症状及发病情况,并采用临床症状评分统计各组鸡临床症状得分;于感染后2 d、5 d、9 d、14 d采集各组鸡的血清、咽拭子和泄殖腔拭子,利用血凝抑制试验检测其血清HI抗体,采用荧光定量PCR方法检测各组鸡的排毒情况。感染后第5 d、9 d、14 d每组分别迫杀4只鸡,采集脑、气管、肺脏、脾和小肠组织,通过荧光定量PCR方法检测各组织中的病毒载量;选择病变较严重的气管和肺脏制作病理切片。结果显示,两种方式感染组鸡均于感染后3 d~4 d出现喷嚏、腹泻等症状,且气囊感染组鸡的临床症状评分较自然感染组鸡稍高;HI抗体检测结果显示,气囊感染组鸡的HI抗体效价在感染后各时间点均显著高于自然感染组(P<0.05),两组鸡的平均HI抗体效价均在感染后第14 d达到峰值,分别为6.75log2和3.75log2;荧光定量PCR结果显示,两组鸡自感染病毒后第2 d开始排毒,且咽排毒量显著高于泄殖腔排毒量(P<0.05),其中气囊感染组鸡的排毒量显著高于自然感染组(P<0.05),并在感染后第5 d排毒达到峰值后逐渐降低;病毒载量结果显示,两组感染鸡的气管及肺脏中的病毒载量均高于其他组织,脑组织中未检测到病毒;且两组鸡的气管和肺脏均出现明显的病理变化,与病毒载量的检测结果基本一致。阴性对照组鸡均无明显临床症状、抗体效价、病毒排毒,各组织病毒载量均为阴性且各组织均无明显病变。以上结果表明,鸭源APMV-4感染鸡后可产生一定的HI抗体,并可在鸡的气管及肺脏中低水平复制,且具有传染性。本研究首次揭示了模拟自然感染与气囊接种两种方式感染鸭源APMV-4对鸡致病性的差异,为APMV感染的防控提供了参考依据。

马MHC-I-B_(2)蛋白对马疱疹病毒1型胞内复制影响的研究

为探明马MHC-I-B_(2)蛋白对马疱疹病毒1型(EHV-1)胞内复制的影响,本研究合成马MHC-I-B_(2)基因,并将其克隆至慢病毒表达载体,构建重组质粒pLVML-HA-MHC-IRES-Puro。利用慢病毒载体系统将pSPAX2、pMAD.2G、pLVML-HA-MHC-IRES-Puro共转染HEK-293T细胞,同时共转染pLenti-GFP-N2,pSPAX2和pMAD.2G质粒作为对照组,待对照组细胞出现绿色荧光时收获各组感染后的BHK-21细胞获得相应慢病毒。将上述慢病毒感染BHK-21细胞并经嘌呤霉素筛选后将获得表达马MHC-I-B_(2)的细胞并传20代,分别取第5、10、15、20代细胞,通过PCR检测马MHC-I-B_(2)的重链基因序列,分析构建细胞系的遗传稳定性,并利用western blot检测第20代细胞中马MHC-I-B_(2)重链基因的表达。结果显示,正确构建了稳定过表达马MHC-I-B_(2)蛋白的BHK-21细胞系(BHK-21-Equus MHC-I-B_(2))。采用EHV-1(MOI 0.1)感染BHK-21-Equus MHC-I-B2与其亲本细胞BHK-21,检测病毒滴度,结果显示BHK-21-Equus MHC-I-B_(2)细胞病变效应(CPE)更明显,病毒滴度比其亲本细胞提高了3.2~4.4倍,可见马MHC-I-B_(2)蛋白可显著提高EHV-1的增殖水平。本研究建立了稳定过表达马MHC-I-B_(2)蛋白的BHK-21细胞系,并首次证实马MHC-I-B_(2)蛋白对EHV-1的增殖具有促进作用,为今后EHV-1的感染机制研究奠定物质基础。

新疆乌鲁木齐地区马疱疹病毒1型、马动脉炎病毒、马流感病毒感染的血清学调查

为了解新疆乌鲁木齐地区马疱疹病毒1型(EHV-1)、马动脉炎病毒(EAV)、马流感病毒(EIV)的感染现状和特点,本研究采集该地区676份马血清样品,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和血凝抑制试验(HI)进行上述病毒的血清抗体的检测,采用统计学方法分析不同地区、年龄、性别及品种马的EHV-1、EAV、EIV的抗体阳性率。结果显示,新疆乌鲁木齐地区马群EHV-1、EAV、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率分别为39.35%(266/676)、0(0/676)、40.53%(274/676)、24.85%(168/676)。其中,南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区马群感染EHV-1的抗体阳性率分别为44.44%(72/162)、57.89%(88/152)、66.67%(52/78),显著高于新市区16.00%(32/200)和米东区26.19%(22/84)(p<0.05);米东区、南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区马群感染EIV的抗体阳性率分别为58.00%(58/84)、57.00%(57/162)、47.37%(95/152)、41.03%(32/78),显著高于新市区16.00%(32/200)(p<0.05);1岁以内马驹EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率最高,分别为50.00%(20/40)、77.50%(31/40)、32.50%(13/40),显著高于其它年龄的马(p<0.05)。10岁以上马EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率最低,分别为26.05%(31/119)、33.61%(40/119)、14.29%(17/119);母马感染EHV-1、EIV的抗体阳性率分别为54.21%(58/107)、67.29%(72/107),显著高于公马36.56%(208/569)、35.50%(202/569)(p<0.05);本地品种哈萨克马EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率最高,分别为54.95%(200/364)、54.67%(199/364)、35.71%(130/364),显著高于其他品种的马(p<0.05)。除混血马外,其它品种的马均存在不同程度的EIV感染;伊犁马EIV和EHV-1+EIV抗体阳性率最低,均为9.09%(2/22),显著低于其它品种的马(p<0.05);不同地区、年龄、性别及品种的马EHV-1、EIV感染率差异显著(p<0.05)。本研究为该地区这3种马传染病的研究和防控提供数据参考。

马疱疹病毒1型感染马疾病模型的建立及评价

试验旨在建立马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus type1,EHV-1)人工发病模型,确定EHV-1感染马的半数感染量(ID_(50))及感染发病的判定标准,为该病的预防与治疗药物的研发奠定基础。以新疆伊犁地区某发病马场流产胎儿中分离的EHV-1 XJ2015株为研究对象,设立4组不同病毒剂量感染组及对照组,经鼻内喷雾感染马,5 mL/匹,每天观察试验马的临床症状和发病情况,14 d后进行剖检,观察各组织脏器病理变化并应用实时荧光定量PCR方法检测鼻腔排毒及病毒分布情况。结果显示,EHV-1 XJ2015株感染马的ID_(50)为10^(-6.67)/5 mL,其病毒含量为104.33 TCID_(50)/mL。与对照组相比,1×10^(6)和1×10^(5)TCID_(50)/mL感染组马临床评分显著升高,主要表现为体温升高(高达39.5℃,一般持续2~6 d)、食欲不振、流浆液性鼻液和下颌淋巴结肿大;且1×10^(6)和1×10^(5)TCID_(50)/mL感染组试验马均表现出不同程度的排毒,肺脏及脑组织中可检测出大量病毒,与对照组相比极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05);病理学检查发现,患马脑组织出现非化脓性脑炎及神经元水肿,肺脏组织出现间质性肺炎、嗜中性粒细胞、炎性细胞浸润、出血和肺泡间隔增厚。以上结果表明,EHV-1 XJ2015株对马具有较强的致病性,患病马临床症状典型,病毒主要随鼻液排出,并富集在肺脏及脑组织,通过上述指标确定EHV-1感染马发病的判定标准,本试验成功建立EHV-1感染本体动物疾病模型。

马疱疹病毒1型gG蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)的流行情况,需要建立一种检测抗体的间接ELISA方法。采用纯化后EHV-1 XJ2015株的gG蛋白作为检测抗原,优化反应条件后建立检测EHV-1血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验及商品化试剂盒的应用效果对比。结果表明,该方法仅与EHV-1阳性血清发生反应,不与马疱疹病毒4型、马流感病毒和马动脉炎病毒阳性血清发生反应,血清稀释1∶1600后,仍可以检测到阳性,组内及组间变异系数均小于5%。与试剂盒进行检测结果比较,符合率为93.35%。建立了EHV-1 gG蛋白间接ELISA检测方法,可为EHV-1的快速诊断、流行病学调查及防控工作提供技术支撑。

固守坚强信念 确保军魂永驻

在社会思想多元多变，各种杂音噪音不断扰乱视听的情况下，一个人一旦理想信念不够坚定。政治鉴别力不够敏锐，就很容易精神迷失、信仰迷茫，甚至在政治风浪颠簸中坠人深渊。因此，各级必须以高度的政治自觉，引领官兵进一步坚定政治信仰、保持政治定力、站稳政治立场。

2007年中国邮政贺卡的收集与研究

印刷厂有北京邮票厂（以厂花内标志性字母B表示，下同），四川省邮电印刷厂（C），山东省邮电印刷厂（D），中国人民解放军1206厂（E），福建省邮电印刷厂（F），广东信源彩色印务有限公司（G），河南省邮电印刷厂（H），江苏省邮电印刷厂（J），甘肃瑞通邮政印刷公司（L），内蒙古邮电印刷厂（M），上海鸿吉印刷有限公司（S），陕西信德圆方安全印务有限公司（X），

浅议高中英语阅读教学中文化意识培养策略

在高中英语阅读教学中,加强学生文化意识的培养能丰富学生的文化底蕴,提升学生的交际能力。所以,高中英语教师应结合教学实际,合理选择文化意识培养途径,从而将文化渗透在阅读教学中,达到培养学生文化意识的目标。从三个方面分析其具体实施策略。

马疱疹病毒1型XJ2015株的增殖、纯化及鉴定

目的评价蔗糖密度梯度离心法对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的纯化效果。方法病毒增殖后,收获病毒液,经硫酸铵浓缩、蔗糖密度梯度离心法纯化EHV-1,电镜下观察病毒形态,SDS-PAGE、Western blot、BCA及马体致病性试验鉴定病毒纯化效果。结果纯化后的EHV-1电镜下可见完整的病毒颗粒且形态典型,直径约120 nm,效价可达10^(10.02) TCID_(50)/0.1 mL,回收率为61.7%;SDS-PAGE及Western blot分析显示,纯化病毒杂蛋白显著减少且具有良好的反应原性;纯化后病毒感染马匹出现原发性感染临床症状并出现排毒现象。结论利用蔗糖密度梯度离心法可获得高纯度的纯化病毒株EHV-1-XJ-2015,为进一步研究EHV-1的致病机理及减毒、灭活疫苗的研发提供了参考。