斑马鱼幼鱼在中药单体毒性检测的研究进展

中药是多成分、多靶点的复杂体系,是我国几千年文明积累下来的宝贵资源,但由于中药的毒性研究缺乏,导致其使用安全范围不明确,限制了其广泛使用和推广,故对每种中药单体的毒性评价尤为重要。斑马鱼是一种重要的脊椎动物模型,用于低成本的体内全生物中通量药物筛选和毒理研究。综述了利用斑马鱼检测多种中药单体的心脏毒性、肝毒性、神经毒性和发育毒性的研究进展,指出了其在中药单体毒性研究中存在的问题。斑马鱼是中药单体毒性及安全性评价的理想模式生物,未来,需建立标准规范和高通量测定方法对上千种中药单体进行安全性评价。

斑马鱼幼鱼生物钟节律行为方法的建立

所有生物体均受到生物钟的调控而产生行为和生理的节律变化,运动行为节律是反应生物节律的最可靠标志。斑马鱼是研究行为学的良好模式动物。为了探讨斑马鱼幼鱼在持续黑暗或者持续光照条件下的行为节律方法,选择发育至5 dpf (受精后天数)的幼鱼,放置于诺达思行为分析仪中,分别采取持续弱光(DD, 30 lux)、持续光照(LL, 300 lux)以及正常光照黑暗(LD, 14小时光:10小时暗)三个光照条件,检测斑马鱼幼鱼连续三天的运动行为变化。结果显示斑马鱼幼鱼在正常光暗条件下显示出明显的昼夜节律,即光照时运动多,黑暗时运动少。而在两个持续条件下均表现出明显的生物钟节律,并且统计算出的周期均在24小时左右。但是持续光照条件(LL)下的平均运动距离要明显高于持续弱光条件(DD)。因此,通过本实验建立起可靠的斑马鱼幼鱼行为节律分析方法,为今后以斑马鱼为模型研究不同光暗条件下生物钟行为提供了良好的实验基础。

FHL2通过MGMT影响胶质母细胞瘤U87细胞对替莫唑胺的耐药性

目的:探讨干扰四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)的表达对胶质母细胞瘤U87细胞中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)表达的影响,以及对U87细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法:利用慢病毒感染技术分别将携带不同FHL2干扰序列的慢病毒(shFHL2-1#、shFHL2-4#)及其阴性对照(shN)感染U87细胞,分别命名为shFHL2-1#、shFHL2-4#和shN组;采用siRNA转染技术将siMGMT-1#、siMGMT-4#和siN转染至U87细胞,为siMGMT-1#、siMGMT-4#和siN组,qPCR和WB法验证FHL2或MGMT的敲低效果。用TMZ处理上述各组细胞(以DMSO处理组为对照),随后以CCK-8法和细胞克隆形成实验检测TMZ处理前后FHL2或MGMT敲低组细胞的增殖情况,FCM检测TMZ处理前后FHL2敲低组细胞的凋亡情况,WB法和免疫荧光法检测敲低FHL2对U87细胞中MGMT表达的影响,WB法检测TMZ处理对各组细胞中FHL2和MGMT表达水平的影响。结果:成功构建敲低FHL2或MGMT表达的U87细胞。与shN组相比,shFHL2-1#、shFHL2-4#组U87细胞的增殖能力减弱、凋亡水平升高(均P<0.01),MGMT表达水平明显降低(均P<0.01)。经TMZ处理后,与相应的DMSO处理组相比,shN组细胞中FHL2和MGMT的表达水平显著升高(均P<0.05),而细胞的增殖和凋亡均无显著变化(均P>0.05);shFHL2-1#、shFHL2-4#组细胞中FHL2和MGMT的表达水平无显著改变(均P>0.05),但细胞增殖能力进一步显著降低、凋亡水平进一步显著升高(均P<0.01)。敲低MGMT使U87细胞增殖减慢(P<0.01),而siMGMT-1#、siMGMT-4#组细胞经TMZ处理后增殖能力进一步降低(均P<0.01)。结论:干扰FHL2表达使得U87细胞增殖减慢而凋亡加剧、MGMT表达下调,提示FHL2可能通过影响MGMT的表达调控U87细胞对TMZ的耐药性。

射频微系统集成技术

射频系统在电子战及5G通讯等方面具有广阔的应用前景,在电子设备小型化趋势推动下,射频系统在不断提升性能的同时逐步缩减体积、降低成本。射频系统与三维集成技术相结合在研制高性能、微型化及低成本射频微系统方面具有巨大潜力。综述了射频微系统集成技术,包括多芯片集成技术、SoC集成技术、单片异质异构集成技术及基于Chiplet的集成技术,并对各类集成技术进行了对比与讨论。最后进行了总结和展望,并给出了基于Chiplet的射频微系统优势。

由递推式求数列通项

求数列的通项是数列教学中的难点,学生望而生畏,束手无策。本人经几年探索、实践,现浅谈体会如下: 一、变定型把已给递推式变形,得到等差或等比数列。

自动开伞器综合测试台设计

通过对自动开伞器测试项目的分析,提出测试台的总体设计思路;综合各测试项目的要求,通过对总体结构、上锁拉力测试机构、高度环境模拟、开锁延时时间测试等分项目的设计,搭建出测试开伞器从上锁到开伞的全过程各项目的硬件基础;再根据各项目测试规程的要求,应用PLC构建控制系统。验证测试与使用表明,测试台可实现不同型号开伞器的兼容测试,具有自动化程度高、检测精度高、可操作性好、使用简单方便等优点。

有效提问成就精彩——初中数学教学中有效提问的实践与研究

初中阶段是学生成长的重要时期,数学教师在开展具体教学活动时,需要对学生进行有效的提问,确保学生可以对其相关问题进行深入思考,保障学生数学素养,确保数学教学可以和学生现实生活建立更为紧密的联系,本文综合探究初中数学教学过程中进行有效提问的具体方式,分别从教学准备,提问范围,教学情境,提问内容和提问技巧五个角度进行具体分析。

广东省立文理学院学生运动史概述

广东省立文理学院的学生运动,在党的领导下,积极开展救亡运动,对国民党专制统治、法西斯教育、发动内战等进行了英勇的斗争,发展了党组织,壮大了进步力量.随着形势的发展,大批党员和进步群众参加了抗日游击战和解放战争,为民族革命的胜利献出了自己的力量.从发挥青年学生在中国革命运动中的桥梁作用来看,党领导的文理学院的学生运动是成功的.本文贯彻以史实为依据.从具体到抽象,历史与逻辑相统一的方法,总结文理学院学生运动的历史进程和历史经验,继承和发扬党领导学生运动革命精神,是对青年学生进行革命传统教育的好教材.

肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离BMSCs,进行表面抗原表达及分化鉴定。使用Dunn chamber装置研究BMSCs的定向迁移。并且研究PI3K抑制剂LY294002对HGF诱导BMSCs迁移的影响。结果分离培养的BMSCs呈CD29、CD90、CD106阳性表达,CD34、CD45阴性表达,BMSCs可诱导分化为成骨细胞及脂肪细胞。Dunn chamber迁移实验显示,外槽加入不同浓度的HGF,BMSCs迁移速率没有变化,迁移效率随着HGF浓度的增加而增加,50ng/ml与100ng/mlHGF均显著提高了细胞迁移效率;内外槽同时加入50ng/mlHGF,迁移速率与迁移效率均没有变化;经30μmol/LLY294002预处理1h后,HGF诱导的BMSCs的定向迁移受到抑制。结论 HGF能够趋化BMSCs的定向迁移,PI3K信号通路参与介导这一过程。

丝素蛋白纳米纤维排列走向对星形胶质细胞生长发育的影响

目的探讨家蚕丝素纳米纤维的排列走向对星形胶质细胞生长发育的影响。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,并通过反复传代对星形胶质细胞进行纯化。将纯化的星形胶质细胞以2.5×105/ml的密度接种至直径为800nm不同走向(平行、乱序)的丝素纳米纤维上,对细胞的存活、铺展以及迁移进行检测。设立多聚赖氨酸(PLL)包被组作为对照。结果成功地建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系;传至第4代时,星形胶质细胞得到纯化,GFAP阳性率达到92%以上;接种到材料上之后,细胞和家蚕丝素纳米纤维之间表现出很高的亲和力,细胞的胞体和突起按照纤维的走向排列。家蚕丝素纳米材料上的星形胶质细胞的存活率和铺展面积与PLL对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。平行材料上细胞的突起长度比乱序材料上的要长(P<0.05),3种材料(平行、乱序、PLL)上的细胞迁移效率差异具有统计学意义(P<0.05),其中平行材料上的细胞迁移效率最高。结论家蚕丝素纳米纤维能支持星形胶质细胞的存活和生长,表现出良好的生物相容性;丝素纳米材料的走向影响了细胞的排布以及迁移。

血小板衍生生长因子对骨髓间充质干细胞向成神经细胞分化趋化性迁移的影响

目的初步探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对成神经细胞分化不同阶段骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化性迁移的影响。方法密度梯度离心和贴壁培养法分离培养BMSCs,并予以传代。用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和丁羟基茴香醚(BHA)相结合的方法诱导BMSCs向成神经细胞分化,并用特异性标志物进行鉴定,利用Dunn chamber建立体外迁移模型,评估PDGF对不同分化阶段BMSCs定向迁移的影响。结果通过密度梯度离心和贴壁培养法获得了纯化的大鼠BMSCs。诱导组BMSCs变为神经元样细胞,而对照组的BMSCs形态无变化。Dunn chamber分析显示,分化不同阶段的BMSCs对PDGF的趋化程度不同:和对照组相比较,未诱导的BMSCs、预诱导24h和诱导5h的分化细胞的迁移速率得到明显提高(P<0.05);而未诱导的BMSCs、维持18h和维持48h的分化细胞的迁移效率明显升高(P<0.05)。结论 BMSCs可以被诱导分化为神经样细胞;分化不同时期的细胞有不同的迁移能力。

干细胞因子诱导神经干细胞定向迁移

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)能够定向追踪胶质瘤,然而其内在作用机制及影响因素尚不明了。本实验运用Boyden chamber及Dunn chamber来研究干细胞因子(stem cell factor,SCF)诱导C17.2神经干细胞的趋化性迁移。Boyden chamber结果显示,下室加入SCF后迁移至膜下方的C17.2细胞数显著多于对照组;Dunn chamber结果显示,仅在外槽加入SCF的C17.2细胞迁移速率及迁移效率显著高于内外槽均加入SCF的细胞,单个细胞迁移轨迹分析表明仅在外槽加入SCF后细胞朝着浓度梯度方向迁移而内外槽均加入SCF后细胞的迁移则无规律。这些结果表明,SCF能够诱导C17.2细胞的定向迁移,为进一步了解神经干细胞定向追踪胶质瘤提供了理论依据。

海参崴核协议是掩盖苏美争夺核霸权的烟幕弹——学习列宁关于帝国主义理论的一点体会

当前,苏美两个超级大国争夺势力范围和世界霸权的斗争愈演愈烈,涉及到了各个领域,而发展核武器,争夺核优势的斗争,则是它们争霸的一个突出特点。一九七四年十一月下旬,苏美两国首脑在海参崴举行“会晤”炮制的所谓“限制进攻性战略武器”问题的《苏美联合声明》(即海参崴核协议),就是苏美在争夺核霸权道路上迈出的新的一步。苏美两家把这个“声明”

不同直径家蚕丝素纳米纤维对星形胶质细胞生长与迁移的作用

目的通过研究3种不同直径的家蚕丝素纳米纤维对纯化的星形胶质细胞生长发育的影响,寻找理想的家蚕丝素纳米纤维的物理参数,为后期使用再生丝素纤维改变神经损伤后形成的物理屏障和化学屏障提供参考和借鉴。方法将混合培养纯化的星形胶质细胞接种在3种不同直径的家蚕丝素纳米纤维材料上,分别选取各时间段的细胞进行星形胶质酸性蛋白(GFAP)特异性免疫荧光染色和活细胞拍摄,并统计不同时间段星形胶质细胞的增殖、铺展和迁移状况。结果第6d时400nm材料上星形胶质细胞的增殖和铺展面积与1200nm相比差异有统计学意义(P<0.05),但是3种直径的材料对星形胶质细胞铺展的最大长度没有显著作用。800nm和1200nm的材料在细胞增殖、铺展面积和最大长度上的差异都不大。结论家蚕丝素纳米材料的直径能影响星形胶质细胞的增殖和铺展,尤其是直径为400nm的材料。

不同分化状态下间充质干细胞向血管内皮生长因子的迁移

目的:探讨间充质干细胞(MSCs)对趋化因子VEGF的定向迁移能力与其分化状态之间的关系。方法:本实验运用采用Percoll分离法在体外培养并扩增大鼠骨髓来源MSCs,应用抗氧化剂诱导方案诱导MSCs向神经样细胞分化,运用Boyden chamber及Dunn chamber趋化性迁移装置研究了在趋化因子VEGF诱导下不同分化状态的间充质干细胞定向迁移,比较了各分化状态下细胞的迁移速度和迁移效率。结果:Boyden chamber实验结果显示下室加入不同浓度VEGF后,不同状态细胞向同一浓度VEGF迁移的数量不同,不同浓度VEGF诱导同一状态细胞的迁移数量也不同;Dunn chamber的实验结果显示在某一分化阶段(预诱导24小时)的MSCs具有更高的迁移效率。结论:MSCs的分化影响了其向VEGF的定向迁移,也就是说,不同分化状态的MSCs显示出不同的迁移行为。

成神经细胞分化的骨髓间充质干细胞向干细胞因子的趋化性迁移

目的研究成神经细胞分化不同阶段的骨髓间充质干细胞(BMSCs)向干细胞因子(SCF)的趋化性迁移。方法 Percoll密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,体外传代并扩增纯化,通过免疫荧光染色及多向分化对其进行鉴定。采用碱性成纤维生长因子(bFGF)、丁羟基茴香醚(BHA)联合诱导剂对BMSCs进行成神经细胞诱导,观察分化各时期的细胞形态变化。利用Dunn chamber研究SCF对不同分化阶段BMSCs趋化性迁移的影响。结果 Dunn chamber迁移实验显示,SCF诱导实验组细胞的迁移速率和迁移效率明显高于对照组(P<0.05),表明SCF对BMSCs具有趋化作用。此外,分化不同状态的BMSCs向SCF的趋化迁移程度也不同。结论 BMSCs可以分化为神经样细胞,其对SCF的趋化性迁移与分化状态密切相关。

微系统集成技术发展与展望

微系统已成为推动国民经济发展和保障国家安全的基础性、战略性、先导性支撑产业,军民领域电子信息系统多功能、高性能、小型化的发展趋势对微系统集成技术提出了更高要求。综述了硅基、玻璃基、陶瓷基、柔性基等多种微系统集成技术,介绍了各类集成技术的典型应用领域、存在的技术挑战以及解决方法,并对各类微系统的特点进行了对比与讨论。最后,对各类微系统集成技术进行了总结、对比,并展望了微系统集成技术的发展方向。

髓源性抑制细胞在鸟苷酸结合蛋白1促进胶质瘤U87细胞增殖中的作用及其机制

目的:探讨髓源性抑制细胞(MDSC)在鸟苷酸结合蛋白1(GBP1)促进胶质瘤U87细胞增殖中的作用及其相关机制。方法:选择过表达GBP1的胶质瘤U87细胞(U87-GBP1细胞)和转染空载体的对照U87-Lacz细胞进行实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种U87细胞GBP1和CC趋化因子配体2(CCL2)mRNA相对表达量或蛋白表达水平,采用CCK-8法检测两种细胞增殖变化。利用免疫磁珠从健康人外周血中分选出CD14 +单核细胞和CD3 + T淋巴细胞。用U87-Lacz或U87-GBP1细胞培养液处理CD14 +单核细胞,分别为U87-Lacz培养液组和U87-GBP1培养液组;采用流式细胞术检测CD14 +单核细胞中MDSC比例,用两培养液组作用的CD14 +单核细胞与活化的CD3 + T淋巴细胞共培养,流式细胞术检测活化的CD3 + T细胞增殖情况,分别以未经U87细胞培养液处理的单核细胞或活化CD3 + T淋巴细胞作为对照组。用加入抗人CCL2抗体U87-Lacz或U87-GBP1细胞培养液处理CD14 +单核细胞,分别为U87-Lacz+抗CCL2培养液组和U87-GBP1+抗CCL2培养液组,采用流式细胞术分析CD14 +单核细胞中MDSC比例。分别将U87-GBP1细胞和U87-Lacz细胞原位接种至BALB/c裸鼠颅内致瘤,1周后各分为CC趋化因子受体2(CCR2)抑制剂RS504393治疗组(U87-Lacz+RS裸鼠组和U87-GBP1+RS裸鼠组)和未经治疗的对照组(U87-Lacz裸鼠组和U87-GBP1裸鼠组);30 d后处死裸鼠,分离全脑、脾脏和骨髓组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察裸鼠脑中移植瘤,计算移植瘤体积,采用流式细胞术检测各组织MDSC比例。 结果:U87-GBP1细胞中GBP1蛋白表达水平高于U87-Lacz细胞,但两组细胞体外增殖水平差异无统计学意义( P>0.05)。U87-GBP1培养液组MDSC比例高于U87-Lacz培养液组[(7.75±0.80)%比(4.50±0.08)%, P=0.003],两组均高于对照组[(2.55±0.31)%)]( F=18.27, P=0.002);U87-GBP1培养液组作用的活化CD3 + T淋巴细胞增殖率低于U87-Lacz培养液组[(47.38±0.08)%比(61.70±5.05)%, P=0.040]。U87-GBP1细胞中CCL2 mRNA相对表达量及其培养液中CCL2蛋白表达水平[30.66±0.17和(1 005.00±12.23)ng/L]高于U87-Lacz细胞[1.29±0.15和(111.60±11.44)ng/L](均 P<0.01),U87-Lacz+抗CCL2培养液组和U87-GBP1+抗CCL2培养液组MDSC比例分别低于U87-Lacz培养液组和U87-GBP1培养液组(均 P<0.05)。U87-GBP1裸鼠组脑移植瘤体积大于U87-Lacz裸鼠组,U87-GBP1+RS裸鼠组和U87-Lacz+RS裸鼠组脑移植瘤体积较未经治疗的相应裸鼠组增长减慢,差异均有统计学意义(均 P<0.05);U87-GBP1裸鼠组脑移植瘤、脾脏和骨髓中MDSC比例高于U87-Lacz裸鼠组,U87-GBP1+RS裸鼠组和U87-Lacz+RS裸鼠组各组织MDSC比例均较未经RS504393治疗相应裸鼠组低,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:GBP1可能通过促进胶质瘤U87细胞中CCL2表达,招募MDSC,在胶质瘤微环境中集聚形成免疫抑制,进而促进胶质瘤U87细胞在体内增殖。