miR-155在TGF-β1诱导足细胞损伤中的表达及其与synaptopodin、CD2AP表达的相关性

目的:探讨TGF-β1诱导的足细胞损伤中miR-155的表达变化及其与足细胞损伤的关系。方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,用TGF-β1刺激足细胞构建足细胞损伤模型,用CCK8法检测各浓度梯度(0、4、8、12 ng/ml)、时间梯度(0、24、48、72 h)的细胞增殖活性。实时荧光定量PCR技术检测足细胞损伤模型中synaptpotodin、CD2AP mRNA及miR-155的表达。Western blot法检测足细胞损伤模型中synaptpotodin、CD2AP蛋白的表达。结果:一定浓度的TGF-β1可抑制足细胞增殖,降低细胞存活率(P <0. 05)。TGF-β1诱导的足细胞损伤模型中miR-155表达水平上调(P <0. 05),TGF-β1诱导足细胞损伤后,可引起synaptpotodin、CD2AP mRNA和蛋白表达水平下调,且与miR-155表达水平呈负相关(P <0. 05)。结论:miR-155表达上调与TGF-β1诱导的足细胞损伤有关,可能作为足细胞损伤诊断和治疗的靶点。

miR-155表达变化对TGF-β1损伤足细胞蛋白podocin、CD2AP、synaptopodin的影响

目的:研究miR-155 mimics/inihibitor转染足细胞后微小RNA-155(miR-155)的表达变化及其对TGF-β1损伤足细胞的影响。方法:体外培养小鼠足细胞,细胞免疫荧光染色鉴定足细胞分化成熟;用TGF-β1处理足细胞构建足细胞损伤模型,RT-PCR和Western blot分别检测miR-155和CD2AP的表达;免疫荧光显微镜观察转染成功指示剂Cy3,RT-PCR检测miR-155 mimics/miR-155 inihibitor转染(0 h、24 h、48 h、72 h)后miR-155的表达;选取转染时间48~72 h,RT-PCR检测Normal、TGF-β1、TGF-β1+mimics、TGF-β1+mimics NC、TGF-β1+inhibitor、TGF-β1+inhibitor NC组细胞miR-155及podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA表达,Western blot检测3种蛋白的表达,免疫荧光观察各组CD2AP的荧光分布和表达。结果:CD2AP呈足细胞分化成熟的特征分布;TGF-β1干预后miR-155表达上升,CD2AP蛋白表达下降(P<0.05);miR-155 mimics或miR-155 inihibitor转染48 h、72 h后,miR-155表达明显增加或减少(P<0.05);miR-155 mimics可上调TGF-β1诱导的miR-155表达(P<0.05),且可促进TGF-β1诱导的足细胞podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),而转染miR-155 inihibitor对足细胞蛋白的作用与miR-155 mimics相反。免疫荧光结果显示CD2AP蛋白的表达与Western blot、RT-PCR结果一致。结论:miR-155可靶向足细胞蛋白podocin、CD2AP和synaptopodin的表达,miR-155过表达可促进足细胞损伤,miR-155表达下调则可改善足细胞的损伤,因此,miR-155可作为足细胞损伤新的药物靶标。

miR-155调控线粒体自噬对足细胞损伤的机制研究

目的探讨miR-155对足细胞凋亡的影响,并深入研究其机制。方法MPC5细胞(经H 2O 2预处理)分为miR-155抑表达组、miR-155过表达组、对照(空质粒)组、空白组。分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot法检测线粒体自噬通路相关因子FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、p62及凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA或蛋白表达;JC-1探针检测线粒体膜电位;ELISA检测细胞内ROS含量;CCK8、流式细胞术检测细胞活性及凋亡。结果相较于对照组,miR-155抑表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1和Bcl-2表达明显升高,细胞活性和线粒体膜电位明显增加(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax的表达明显降低,ROS含量和细胞凋亡率显著下降(P<0.05);miR-155过表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、Bcl-2的表达明显下调,细胞活性和线粒体膜电位明显降低(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax表达,细胞内ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。对照组与空白组的结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论上调miR-155表达,可促进足细胞凋亡,其机制可能与miR-155靶向FOXO1,抑制线粒体自噬,促进足细胞氧化应激损伤有关。

原发性肾病综合征患者尿液中podocalyxin、 nephrin的表达及意义

目的探讨不同病理类型的原发性肾病综合征患者尿中podocalyxin、nephrin的表达及意义。方法将80例原发性肾病综合征患者,按照病理分为微小病变性肾病(MCN)组22例、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)组11例、膜性肾病(MN)组36例、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)组11例,另设20例健康人为对照组。通过酶联免疫吸附法检测各组尿中podocalyxin、nephrin的表达,并分析其与24小时尿蛋白、血清白蛋白、血脂、肌酐的相关性。结果FSGS组尿podocalyxin、nephrin高于其他肾病综合征组和正常对照组( P <0.05),其他肾病综合征组高于正常对照组( P <0.05);MsPGN组尿podocalyxin、nephrin低于其他肾病综合征组( P <0.05),其在MCN、MN组表达差异无统计学意义( P >0.05);不同病理类型肾病综合征组尿podocalyxin、nephrin的表达与血清白蛋白呈负相关,与24小时尿蛋白、血脂、肌酐水平呈正相关( P 均<0.05)。结论尿podocalyxin、nephrin的表达水平与肾病综合征病理类型及疾病严重程度相关,可作为判断肾病综合征病理类型和预后的参考指标。

不同浓度miR-155mimics和miR-155 inihibitor在足细胞中的转染效果

目的探讨瞬时转染miR-155mimics和miR-155 inihibitor化学合成物在足细胞中表达变化及其稳定情况。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,用脂质体法将miR-155mimics/NC、miR-155 inihibitor/NC、Cy3 miR-155 mimics/inhibitor NC转染足细胞,构建足细胞内miR-155高表达模型、低表达模型、荧光基团。然后用免疫荧光显微镜观察不同剂量LipofectamineTM 2000转染不同浓度Cy3 miR-155 NC后的荧光转染效果。用实时荧光定量PCR技术检测足细胞中miR-155mimics浓度梯度(50、80、100 nmol/mL)、miR-155 inihibitor浓度梯度(80、100、150 nmol/mL)的miRNA-155表达。结果达到一定剂量的LipofectamineTM 2000足以饱和不同浓度的miRNA,并将不同浓度Cy3 miR-155 NC成功转入足细胞内,且转染效率达80%以上。qRT-PCR结果显示转染miR-155mimics、miR-155 inihibitor 24 h后,miR-155在足细胞中的表达明显改变,与阴性对照组(NC)比较差异有统计学意义,表明转染成功。转染80 nmol/mL浓度的miR-155mimics,miR-155在足细胞中的表达明显上调(P<0.001),与其他浓度对比表达量升高,差异有统计学意义。转染150 nmol/mL浓度的miR-155 inihibitor,miR-155在足细胞中的表达明显下调(P<0.001),与其他浓度对比表达量降低,差异有统计学意义。结论 LipofectamineTM 2000达到适当剂量时将各工作浓度的miRNA-155转入足细胞内的转染效果高。80 nmol/mL的miR-155mimics和150 nmol/mL的miR-155 inhibitor可能较适合用于实验研究。

U0126对TGF-β1诱导足细胞炎症因子分泌和miR-155表达的影响

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(erk)1/2通路抑制剂U0126对转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导足细胞炎症因子分泌和微RNA(microRNA,miR)-155表达的影响。方法 体外培养小鼠足细胞,随机分为正常对照组、TGF-β1组和TGF-β1+U0126组,使用Westernblot法检测erk1/2磷酸化水平,ELISA法检测足细胞上清TNF-α及IL-6蛋白表达水平,RT-qPCR法检测足细胞miR-155表达水平。结果 与正常对照组相比,TGF-β1诱导足细胞后,erk1/2磷酸化水平明显上升,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌增多,足细胞miR-155表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组相比,TGF-β1+U0126组erk1/2磷酸化水平被抑制,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌减少,足细胞miR-155表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 erk1/2通路抑制剂U0126可抑制足细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌,下调足细胞miR-155的表达。

微RNA-155与肾脏疾病的研究进展

微RNA(miRNA)是一类内源性基因表达调节因子,在免疫相关性疾病的体液和细胞免疫调控中发挥重要作用,免疫细胞中miRNA的异常分布、表达可导致疾病的发生。其中,miR-155作为免疫系统最主要的多功能miRNA之一受到广泛关注,是目前研究的热点。成熟的miR-155可通过调控特定的靶基因在免疫系统中发挥生物学作用,而免疫系统异常是肾脏疾病发生的主要原因之一,影响其发生、发展及预后。因此,miR-155有望成为肾脏疾病治疗的新靶点,从而为揭示肾脏疾病的作用机制、临床诊断和治疗提供新思路。

肠道微生物菌群与足细胞损伤的研究进展

原发性或继发性肾小球疾病均能造成足细胞损伤,而足细胞是肾小球滤过屏障的主要组成部分,也是肾小球疾病防治的关键靶点。目前,肾小球疾病的治疗仍以免疫抑制剂为主,其毒副作用不可避免。随着“微生物组基因计划”的开展,人类微生物菌群对人类健康和疾病的影响得到了更深入的研究,也成为医学科学研究领域的热点之一。研究成果不仅强调了免疫和饮食在肠道微生物菌群组成中的重要作用,同时也表明了肠道微生物菌群对宿主的营养、肥胖、代谢、免疫功能有着很大程度的影响。近年来,肠道微生物菌群在肾脏生理学和病理生理学中的作用已被揭示,肠道微生物菌群组成和结构发生变化,会使其产生的毒性代谢产物积聚,随之免疫炎症失调促进足细胞损伤和肾脏功能障碍。尽管目前确切的发病机制尚未完全清楚,但是肠道微生物代谢组学在足细胞损伤的新见解将会为足细胞的防治提供新的理论依据和策略。现就肠道微生物菌群在足细胞损伤中的研究现状进行综述。

肩胛上动脉解剖变异类型及临床意义

肩胛上动脉是供应肩胛骨及其周围骨骼肌和构成肩胛动脉网的重要血管,常见起源部位是甲状颈干(42.10±2.05)%,锁骨下动脉(30.93±1.92)%,与颈横动脉共干起自甲状颈干(16.49±1.54)%。从胸廓内动脉发出、与颈横动脉共干起自锁骨下动脉和缺如等情况属于罕见变异[1]。临床陆续有一些肩胛上动脉细小属支血管的罕见异位报道。相比常见异位,罕见异位不仅起源异常,还可发生走行异常,导致该动脉与相邻解剖结构的位置关系发生较大变化而引起一系列临床症状和手术操作的不便[2]。此外,罕见异位的影像学表现不显著、易漏诊,往往是出现症状之后才发现,引发严重的并发症,如锁骨骨折导致血管破裂、进而导致冈上肌供血不足而萎缩[3]。

TRPC家族在TGF-β1诱导足细胞钙离子内流中的表达及作用

瞬时受体电位阳离子通道蛋白(transient receptor potential cation channel,TRPC)是哺乳动物重要的阳离子通道蛋白,参与细胞多种生理和病理过程。本研究组前期研究发现转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)可提高肾小球足细胞TRPC6的表达,为进一步明确TRPC家族其他成员在足细胞损伤中的作用,本研究探讨TGF-β1对足细胞TRPC家族表达的影响以及TRPC家族在TGF-β1诱导足细胞内钙离子浓度变化中的作用。体外培养条件永生化肾小球足细胞株MPC5,通过TGF-β1构建足细胞损伤模型,qRT-PCR和Western blot法检测TGF-β1干预对足细胞TRPC家族mRNA和蛋白表达水平的影响。通过基因干扰siRNA技术和药理学方法分别抑制TRPC家族表达后,荧光探针Fluo-3/AM静态检测足细胞游离钙水平,动态高速钙离子成像系统检测足细胞内钙离子浓度动态变化。结果显示,与正常对照组相比,TGF-β1可使足细胞TRPC1/3/6蛋白表达增多,对TRPC4蛋白表达无影响,对TRPC5/7蛋白表达分别只在4 ng/mL和8 ng/mL时有显著影响。TGF-β1可使足细胞TRPC1/3/6 mRNA表达增多,对TRPC4/5/7 mRNA表达无明显影响。TGF-β1干预可显著提高足细胞内钙离子浓度,TRPC1/4/5/7低表达对TGF-β1干预下足细胞内钙离子浓度无明显影响,TRPC3/6低表达可降低TGF-β1干预下足细胞内钙离子浓度。TRPC6低表达组足细胞内钙离子浓度与SKF96365(TRPC通道广泛抑制剂)组相当,TRPC3低表达组钙离子浓度高于SKF96365组。以上结果提示,TGF-β1可使足细胞TRPC1/3/6表达升高,TGF-β1提高足细胞内钙离子浓度与TRPC3/6有关,TRPC6对足细胞内钙离子浓度的影响程度可能大于TRPC3。