环状RNA circNIPBL对肺癌细胞DNA损伤的影响

目的探讨烟草特异性致癌物4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)暴露对肺癌细胞DNA损伤的影响以及环状RNA circNIPBL在NNK诱导DNA损伤效应中的调控作用。方法分别使用0(对照)、50、100、200、400μmol/L的NNK染毒人肺癌上皮(A549)细胞48 h。采用CCK-8法检测细胞活性,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测circNIPBL的表达水平;运用ELISA法检测细胞上清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的分泌水平;使用碱性彗星实验检测细胞的DNA损伤情况;采用Western blot法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达水平。结果与对照组比较,200、400μmol/L NNK暴露A549细胞的存活率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。circNIPBL的表达水平随着NNK染毒剂量的升高呈现剂量依赖性表达上调;其中,与对照组比较,400μmol/L NNK暴露A549细胞的circNIPBL表达上调了7.13倍,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测发现,敲低circNIPBL表达可显著降低NNK染毒A549细胞上清中的8-OHdG水平,而过表达circNIPBL则促进NNK暴露所致的8-OHdG分泌。碱性彗星实验结果提示,敲低circNIPBL表达能够显著降低NNK暴露导致的DNA损伤程度,过表达circNIPBL则进一步加重NNK所致的细胞DNA损伤。此外,敲低circNIPBL的表达能够降低NNK染毒A549细胞中γ-H2AX的蛋白水平,而过表达circNIPBL则提高γ-H2AX的蛋白水平。结论环状RNA circNIPBL在NNK暴露的A549细胞中显著上调,且参与调控NNK诱导的A549细胞DNA损伤。