芳香烃受体在干眼中的调控作用

目的:探讨芳香烃受体(Aryl hydrocarbon receptor, AhR)在干眼中对结膜杯状细胞增殖分化及黏蛋白5AC (MUC5AC)分泌的调控作用。方法:建立小鼠干眼动物模型,采用酚红棉线法测量小鼠泪液分泌量,使用裂隙灯观察小鼠角膜荧光素钠染色损伤情况,并记录临床评分。给予AhR激动剂(FICZ)或AhR抑制剂(CH223191)处理七天,采用RT-PCR检测小鼠结膜组织中AhR、MUC5AC和炎症因子(TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8) mRNA的表达。提取C57BL/6小鼠结膜杯状细胞,给予FICZ或CH223191处理,采用RT-PCR检测小鼠结膜杯状细胞中AhR、MUC5AC和炎症因子(TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8) mRNA的表达。结果:与对照组相比,AhR在干眼小鼠结膜组织中表达降低。FICZ处理后AhR、MUC5AC表达升高,炎症因子表达下降。CH223191处理后AhR、MUC5AC表达降低,炎症因子表达升高。结论:AhR活化后促进结膜杯状细胞增殖分化,增加MUC5AC分泌,在治疗干眼中发挥重要作用。

青岛海域浒苔蛋白提取及其抗肿瘤活性的初步研究

目的提取浒苔蛋白并研究其对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法用20mol/L的Tris-HCl(pH8.0)缓冲液悬浮新鲜浒苔,悬浮液反复冻融结合超声波细胞破碎法提取其中的浒苔蛋白。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)研究浒苔蛋白对乳癌细胞EMT6生长的抑制作用,观察肿瘤细胞形态学的变化。建立乳癌细胞EMT6荷瘤小鼠模型,研究浒台蛋白对荷瘤小鼠瘤径和瘤体质量的影响。结果浒苔蛋白粗提率为0.54%,主要是相对分子质量约为25 000的蛋白。随着浒苔蛋白浓度的增加,肿瘤细胞存活率逐渐降低,抑制率逐渐增加;光镜观察结果显示,浒台蛋白作用48h后,肿瘤细胞出现明显的形态学改变。瘤体内注射浒苔蛋白可显著缩小瘤径和瘤体质量,抑瘤率达25%。结论浒苔蛋白在体内、体外均能够抑制肿瘤细胞的增殖,并呈明显的量效关系。

白介素-36α在烟曲霉感染的人角膜上皮细胞免疫反应中的作用及其机制

目的研究白细胞介素-36α(IL-36α)在烟曲霉菌感染的永生化人角膜上皮细胞(HCEC)免疫反应中的作用及其机制。方法烟曲霉菌灭活菌丝刺激体外培养的HCEC细胞,分别采用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞中白细胞介素36α(IL-36α)、IL-36R蛋白及mRNA的表达。将细胞按实验要求分为A、B、C组,A组采用IgG重组蛋白处理HCEC细胞,B、C组分别采用IgG重组蛋白、外源性IL-36α重组蛋白(rhIL-36α)预处理后加入烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,分别采用ELISA和RT-PCR方法检测各组细胞中IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白和mRNA的表达。将HCEC细胞按照实验需要分为D、E、F组,D组为单纯DMEM培养基培养的HCEC细胞,E组采用rhIL-36α和外源性IL-36Ra重组蛋白(rhIL-36Ra)处理HCEC细胞,F组采用rhIL-36α处理HCEC细胞,采用Western Blot方法检测各组细胞中核因子κB(NF-κB)p65蛋白、磷酸化NF-κB p65(pNF-κB p65)蛋白的表达。将HCEC细胞按照实验需要分为G、H、I组。G组为单纯DMEM培养基培养的HCEC细胞,H组采用烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,I组采用Dectin-1中和抗体预处理后,加入烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,采用Western Blot及RT-PCR方法检测各组细胞中IL-36α蛋白及mRNA的表达。结果烟曲霉菌灭活菌丝刺激的HCEC细胞中IL-36α蛋白和mRNA随时间改变表达逐步升高(F=21.88、249.74,P<0.05)。C组细胞中IL-8和TNF-α蛋白和mRNA的表达水平明显高于A、B组(F=11.54~95.42,P<0.05)。与D、E组相比,F组细胞中pNF-κB p65蛋白的表达水平明显升高,差异均有显著性(F=52.43,P<0.05)。I组细胞中IL-36α蛋白和mRNA表达水平较H组明显降低,差异均具有显著意义(F=70.99、34.26,P<0.05)。结论IL-36α在烟曲霉菌感染的人角膜上皮细胞免疫反应中起到促炎的作用,其作用可能是通过IL-36α/IL-36R/NF-κB信号通路实现的。

一株降解O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯的土壤微生物的分离与鉴定(英文)

目的:有机磷农药和杀虫剂广泛应用于众多国内和国外生产的,其数量已超过100种。大量使用的有机磷农药会增加农业生产,而且还造成了不可估量的环境污染。研究降解敌敌畏的微生物,为微生物以降低产品敌敌畏农药残留,恢复敌敌畏污染土壤中的研究奠定基础。方法:本文从种植蔬菜的温室大棚的土壤中分离了一株降解O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯(敌敌畏)的细菌,根据该菌的形态学、生理生化特征及16S rDNA序列比对。结果:该菌鉴定为荧光假单胞菌(菌株P)。该菌的最适生长温度为27℃,其培养基的最适初始pH为7.0,4天内该菌可将培养液中61.24%的降解。结论:本实验从蔬菜大棚的土样中筛选出一株能降解敌敌畏的菌株,并鉴定为荧光假单胞菌。本研究将为基于微生物以降低产品敌敌畏农药残留,恢复敌敌畏污染土壤中的研究打下基础。