苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是生物黑色素形成的关键酶,该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100s延长到140s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显示浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为2.05mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070mmol/L.

转基因聚球藻PCC7942及其野生藻的培养条件优化

通过考察培养温度、光照强度、培养基初始pH和碳、氮源浓度等单因子对转人源胸腺肽α1基因聚球藻PCC7942及其野生藻生长的影响,对其中NaHCO3浓度、KNO3浓度和初始pH进行三因素三水平的正交试验,获得以BG-11为基础的培养基成分的最佳组合及最适培养条件.实验结果表明,转化藻于28℃,光照强度1500Lx,往复式光照摇床转速75r/min,初始pH=9.0,NaH-CO330mg/L,KNO31.7g/L(其他同BG-11培养基)培养;野生藻于28℃,光照强度2000Lx,往复式光照摇床转速75r/min,初始pH=9.0,NaHCO340mg/L,KNO32.2g/L(其他同BG-11培养基)培养,藻细胞生物量均得到有效地提高,其比增殖速率分别达0.375d-1和0.382d-1,比优化前分别增加106%和99%,这为微藻的进一步高密度放大培养提供依据.

转人源胸腺肽α_1基因聚球藻7942的高密度培养

应用响应面分析方法(Response Surface Method,RSM),对转人源胸腺肽α1基因聚球藻7942的培养基及培养条件进行优化,优化后摇瓶培养转化藻的比增殖速率(μ值)可达0.500d-1,10 L全自动光生物反应器中培养转化藻μ值可达0.979 d-1,分别比正交实验提高了33%和161.1%,建立高密度培养的数字模型预测实验结果,预测值与实验值之间的相对误差在±5.0%以内,为响应面方法在微藻细胞培养中的广泛应用奠定了基础。

人ω干扰素在毕赤酵母中的表达和纯化

ω干扰素(IFN-ω)是同IFN-α功能相近但抗原性不同的一类干扰素分子,它具有同IFN-α、IFN-γ以及肿瘤坏死因子α相似的抑制病毒复制的作用.采用5L发酵罐发酵表达IFN-ω,发酵培养液经超滤膜浓缩、SP层析柱梯度分离,得到糖基化的IFN-ω,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOF-TOF MS)和N端蛋白序列分析仪分析其分子质量和N端序列,用细胞病变抑制法测定活性.结果表明,诱导约48h时,目的蛋白表达量最高,通过SP梯度洗脱,可将糖基化和非糖基化的IFN-ω分离,质谱分析糖基化蛋白样品,质谱峰为糖基化蛋白特有的峰.纯化后糖基化的IFN-ω抗病毒活性为1.46×108 U/mL.

人ω干扰素基因工程菌发酵条件的优化

目的对表达人ω干扰素(in terferon,ωIFN-ω)的巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化,确定最佳的发酵控制条件以获得ω干扰素的最高表达量。方法设计三因素三水平正交实验方案,用直观分析法分析来确定出最佳的发酵条件。结果用FBS培养基发酵的最佳条件是:温度28℃,溶氧50%,甲醇浓度1%,pH 7.0。结论通过发酵条件优化后,ω干扰素表达量达到了90m g.L-1。