重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白制备及其促癌细胞凋亡活性研究

从人乳腺癌细胞系B-Cap-37中克隆出Survivin的cDNA,并对其中编码34位Thr的密码子定点突变为Ala的密码子后,经一系列基因操作方法将天然HIV-TAT转导肽的突变体基因HIV-TATm引入Survivin(T34A)基因的5′端,正确构建了表达载体pRSET-B-HIV-TATm-Survivin(T34A),经转化E.coliBL21(DE3)后诱导表达,目的蛋白质以包涵体形式表达,占菌体总蛋白的45%。经3.7L发酵罐分批发酵可收获650mg/L的包涵体,经阳离子交换、凝胶层析分离和柱上复性与透析,得到纯度达96%以上的可溶性目的蛋白HIV-TATm-Survivin(T34A)。目的蛋白对人乳腺癌细胞B-Cap-37、人胰腺癌细胞SW1990和人肝癌细胞SSMC-7721作用4h后有在细胞形态上呈现出显著的凋亡特征,而对人宫颈癌细胞系Hela不敏感,对正常的人内皮细胞系EVC-304未见明显影响。作用24h时MTT法检测显示,120μg/mL目的蛋白对SW1990、B-Cap-37、SSMC-7721和Hela细胞的抑制率分别达到89%、63%、59.5%和39%,且具有剂量依赖性。对最为敏感的SW1990和B-Cap-37以每孔60μg/mL终浓度的目的蛋白作用48h的流式细胞技术检测发现,凋亡率分别为25.6%和19.3%,与对照相比,实验组细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期的分布发生明显的变化,65%以上的癌细胞被阻滞于G1期。体外实验结果显示重组目的蛋白具有较强的抑制癌细胞增殖和促进凋亡作用,预示着良好的抗癌前景。

蚕杆状病毒载体表达系统及其在动物疫苗生产中的应用

就杆状病毒的分子生物学特性及其作为表达载体以蚕体为表达外源基因的特点和优点进行综述 。

新形势下药学专业认知实习新要求和新模式探索

为了提高药学类专业本科生在制药企业进行认知实习的效果,建立学校—药企互联互通的人才培养新模式,本文结合新形势下药学专业认知实习的新要求,对我校奉贤校区现阶段药学专业认知实习过程中遇到的实际问题进行了系统的分析和总结,提出了引入信息化、通过科研基地和科研合作联系相关药企、探索建立稳定长效机制来带动认知实习的新教学模式,并进行了相关教学实践。师生和企业对教学实习效果均比较满意。可见,比对新时代背景下药学专业认知实习的新要求,对药学类专业认知实习过程进行新模式探索,可以解决我校新校区现阶段遇到的现实问题。

柞树害虫花布灯蛾生物学特性的研究

柞树主要害虫花布灯蛾在沈阳地区 1年发生 1代 ,以 1 0龄幼虫在土下越冬 ,1 2龄老熟幼虫作茧化蛹 ,蛹期约为 1个月 ,成虫有趋光性。

生物技术专业英语教学的一点体会

结合生物技术专业英语的教学实践 ,从提高学生学习积极性、利用网络资源及加强课外练习等几个方面进行探讨。为培养学生的实际应用能力 ,真正适应时代要求 。

大肠杆菌热敏毒素LT克隆基因的PCR定点诱变和重组表达的构建

为使大肠杆菌热敏毒素LT的毒素活性丧失的同时仍保留其较强的免疫原性 ,实验依据LT基因的同源序列设计并合成 5条引物 ,采用突出末端PCR法和重组PCR法 ,将克隆于质粒pEWD2 99上的LT基因 ,分别引入BamHI、Ndel和xhol等位点 ,扩增出带有上述RE位点且含有m7和m112 突变点的约 110 0bp和约 80 0bp的DNA片段和不含突变点的约 30 0bp的DNA片段 ,使控制LT毒力活性中心的第 7位和第 112位氨基酸的碱基分别发生诱变 ,各DNA片段经分离、纯化、RE酶切和DNA连接酶连接后 ,插入经BamHI和Xhol双酶切的线性化的高效表达载体pGEX_4T_1的多克隆位点区 ,使LTm基因置于pTac强启动子下且与Thrombin蛋白基因融合表达 ,将连接产物转化入JM10 5菌株 ,挑出可疑阳性菌落 ,提取质粒 ,经酶切鉴定、PCR鉴定和DNA序列分析 ,证明读框正确 ,序列正确 ,获得了pGEX_4T_1(LTm7和pGEX_4T_1(LTm112 两个重组表达质粒。为运用基因工程手段大量生产人和动物大肠杆菌流行性腹泻的疫苗抗原和幽门螺杆菌疫苗的粘膜免疫佐剂 ,完成了基因水平的工作。

螳螂卵囊在柞蚕场空间分布格局的调查研究

在螳螂孵化前 ,调查了螳螂卵囊在柞蚕场中的水平分布格局。经卡平方检验和5种聚集指标的测定结果表明 ,螳螂卵囊的空间分布型属于聚集分布中的负二项分布 ,即在柞林间的分布特点表现为极不均匀的嵌纹分布。种群中个体在发生概率上是不相同的 ,样方内一个个的存在 ,增加了同样方内其他个体发生的概率。

张闻天对遵义会议的历史性贡献

张闻天对遵义会议的历史性贡献郑文云张闻天是我党老一辈无产阶级革命家，曾经对我国革命和建设事业、对毛泽东思想形成和发展，作出了重要贡献。尤其是在长征途中，他摒弃了王明“左”倾错误，毅然站在以毛泽东为代表的正确路线一边，为遵义会议成功召开作出了历史性贡献...

高等动物克隆成功及其意义

综述了克隆技术在微生物、植物、低等动物和高等动物上的应用过程 ,阐述了高等动物的克隆成功在动物科学、医学和整个生命科学领域的重要意义。

略论日本侵略者统治东北的主要手段

“九·一八”事变后,日本侵略者为巩固其殖民统治,炮制伪满洲国傀儡政权以实行政治欺骗,建立殖民地经济以实行经济掠夺,进行军事围剿以镇压抗日活动。日本统治东北14年之久,欠下了中国人民一笔大大的血债。

大肠杆菌热敏毒素研究概况

本文在分析大肠杆菌热敏毒素 (LT)生物学特性及其分子学水平研究的基础上 ,从蛋白质和基因水平阐述了猪源 L T与人源L T的亲缘关系 ,评述了 LT在研制人畜大肠杆菌腹泻疫苗中的应用价值 ,也通过对与 LT具有相似蛋白和基因结构的霍乱毒素 CT的分析 ,表明二者具有相同的进化起源 ,认为通过定点诱变的 L T能够取代

略论东北沦陷时期殖民地经济的特点

1931年,军国主义的日本为摆脱经济困境,实现其称霸亚洲及世界的野心,悍然发动了侵略中国东北的“九·一八”事变。由于国民党政府的不抵抗主义,四个月的时间里,东北的大好河山便沦为日本侵略者的殖民地。随即,日本把东北作为北上反苏、西侵蒙古、南下华北的大陆军事基地。与此同时,日本侵略者在我国东北推行了一系列反动措施。政治上,建立傀儡政权,掩盖殖民统治的实质;经济上,实行垄断和掠夺,使东北成为日本经济的附庸;

论日本帝国主义对我国东北人民的奴化统治

日本帝国主义在东北沦陷时期,为配合军事统治达到其长期霸占东北的目的,在东北实行一系列殖民思想统治和奴化教育措施,妄图变东北人民为奴隶,变东北大好河山为“日本领土”。然而,侵略者的野蛮行径在人民的反抗下只能以失败而告终。

论中国抗战对世界反法西斯战争的贡献

中国是抗击法西斯日本的主要力量和主要战场。中国抗日战争牵制并消灭了日本陆军主力,拖垮了日本的经济,粉碎了日本“北进”和“南进”的世界战略,有力地支援了盟国对日作战,对打败法西斯日本起了决定性作用。

如何降低稳压电源的噪声

简要介绍了电磁干扰的定义、抗干扰设计的基本原则以及如何在实际的电源系统中降噪。

利用多联PCR技术检测致病性大肠杆菌肠毒素

根据GenBank上登陆的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)产生的STⅠ和LTⅠ、产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)产生的SLT3种毒素基因序列,利用DNAstar软件针对其保守区设计并合成3对PCR引物:Pa1与Pa2、Pb1和Pb2、Pc1和Pc2,以上述引物分别对已知携带有3种毒素基因的质粒或菌株进行PCR扩增,将扩增产物连接入pGEMT-Vector,测序确认。随后进行了单项与二联PCR试验与优化,建立了较为特异和敏感的多联PCR反应体系,并对临床送检并分离鉴定的致病性大肠杆菌进行了肠毒素多联PCR检测。本研究建立的多联PCR技术可敏感、快速地检测大肠杆菌的肠毒素。

动物细胞培育肉及其种子细胞优选与永生化策略

鉴于传统养殖和屠宰获取肉类食品的方式,环境污染、资源浪费和多种有害成分残留等方面问题不断加剧,以及未来绿色低碳发展所面临的现实问题,随着“细胞农牧”科技的兴起,国内外研究者和企业家将目光转向了具有综合优势的细胞培育肉生产新模式。与以多种蛋白质资源为原料进行调制加工的“植物人造肉”不同,动物细胞培育所生产细胞培育肉,在营养品质和口感上更接近“真肉”,有望成为细胞合成生物技术生产替代蛋白质的未来发展新热点,已成为新兴食品科技和产业与投资界的新宠。将细胞培育成具有一定规模和效率的“培育肉”,将对生长效率与周期,以及规模化生产的成本控制具有基础性作用,其中最为关键的是种子细胞及其永生化扩增能力。主要就国内外有关动物细胞培育肉概况、种子细胞优选与实现其永生化策略,以及动物细胞培育肉方面科技伦理等进行较为系统的综述和分析,为我国开展相关研究和细胞培育肉产业提供重要参考。

视觉和视机能

每个人都有两只眼睛，用这两只眼睛观察周围的事物，开展各项工作。工作需要这两只眼睛，生活也离不开这两只眼睛。既然眼睛与人的工作和生活如此密切，我们有必要对人眼作一初步的了解，对视觉和视机能有一深入的认识。本文介绍人眼在光学仪器中的作用；视觉神经系统的基本构造；眼球的构造；视网膜的构造；观察和眼球运动；人眼的视见曲线（光谱灵敏度）和人眼适应；人眼的绝对视觉阈；人眼的反衬灵敏度；人眼的分辨本领；

基于STC12C5A60S2单片机的多功能测试装置开发

根据热像仪整机的设计要求，在生产过程中对差分外同步电路和温度传感器LM235进行测试，设计了一套基于STC12C5A60S2单片机的测试装置，利用单片机内部的多个定时器产生方波信号，利用单片机内部的A／D模块测试温度，可以同时实现对上述两类电路的测试。