冷冻保护剂二甲基亚砜的毒副作用及应用剂量研究

本文主要用台盼兰排斥试验、CFU-GM体外琼脂培养技术和细胞电泳技术研究了冷冻保护剂二甲基亚砜(DNISO)在4℃和室温条件下对细胞活力的影响。结果表明,DMSO对骨髓、胎肝和淋巴细胞的毒性在室温比在4℃时大。小鼠静脉注射DMSO的LDS0剂量为3.9364±0.8709mg/g体重。提出了应用DMSO作为冷冻保护剂冻存人骨髓和胎肝细胞悬液的临床输注方法和DMSO的剂量安全值。

维生素C对铁吸收影响的研究

本文用贫血大鼠血红蛋白(Hb)恢复法,研究了维生素C(V_c)对铁吸收率的影响。首先用低铁饲料喂饲大鼠25天复制出缺铁性贫血(IDA)模型,然后分成三组:Ⅰ组,低铁饲料组;Ⅱ组,添加乳酸亚铁组;Ⅲ组,同时添加乳酸亚铁和V_c组,喂饲20天后发现,乳酸亚铁有升高IDA大鼠模型的红细胞(RBC)、Hb、最终红细胞压积和(FPCV)和血清铁(SI)含量的作用。而乳酸亚铁和V_c同时使用,上述指标和对铁的相对生物利用率(RBA)更为显著。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠各项指标恢复变化情况分别是: 1.RBC(百万/mm^3) 380至506,304至682,326至736 2.Hb(g％) 7.02至7.77,8.88至10.70,6.29至12.84 3.SI(μg/ml) 1.53至2.56,1.05至4.36,1.05至1.24 4.FPCV(％) 44.98,50.50,57.70, 5.RBA(％) Ⅱ组为33.7％,Ⅲ组100％

玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响

采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存，在冻存１ｄ、１０ｄ、２０ｄ和４０ｄ后，３８℃水浴快速复温，离心洗脱冷冻保护剂，检测胚胎神经细胞的活性与功能，并移植于脊髓损伤大鼠．实验结果表明：玻璃化冻存４０ｄ的胚胎神经细胞，存活率为７６．４±８．３％，膜完整性为冻存前的６９．４±７．８％．细胞活力虽有下降，但仍可维持较高水平．培养１周的部分神经元建立突触联系。

人淋巴细胞经冻存复苏后DNA、RNA和蛋白质的合成代谢

本实验采用同位素掺入和光镜放射自显影技术,研究新鲜未经冻存、冻存1年和冷冻杀伤的人外周血淋巴细胞,对3~H-TdR、3~H-UR和3~H-亮氨酸的掺入量进行测量。并观察其掺入部位,以反映淋巴细胞经过冻存不同时间后,它们的DNA、RNA和蛋白质的合成强度和合成部位。实验结果表明,冻存1年的淋巴细胞,复苏后的回收率和存活率均在90％以上。PHA刺激后的3~H-TdR、3~H-UR和3~H-亮氨酸的掺入量,虽比冻存前降低,但仍相当活跃,保持较高水平。3~H-TdR集中在细胞核,3~H-UR和3~H-亮氨酸除分布在细胞质外,在核内也有一定数量。表明在合适的冻存条件下,长期深低温冻存的淋巴细胞,能保持较高的DNA、RNA和蛋白质合成代谢水平。

快速冻存对人骨髓细胞功能的影响

本文采用快速冻存技术深低温保存人骨髓有核细胞(BNC)和人骨髓单个核细胞(BMNC)。在冻存后1、10、20和30天,38℃水浴快速复温,离心洗脱低温保护剂,检测骨髓细胞活力变化。快速冻存30天,骨髓细胞的回收率为80.6％,存活率为85.2％,DNA合成能力和细胞膜完整性仍可维持在较高水平,与常规慢速冻存组的结果比较无显著差异(P>0.05)。提示快速冻存仍能保持人骨髓细胞的一定活力。

CFC_s对人类生存条件的影响与争论

许多环境保护专家呼吁,人类生存环境的日益恶化,大自然总有一天会对人类进行报复,全球面临气候变暖,臭氧层逐步衰减,这已经引起各国政府与科学家的重视。有的学者甚至指出,再过50年,巴黎和费城早已接到要爆发洪水的警告,纽约的街道淹没在4英尺的水中,全世界皮肤癌患者将达到数亿,原来的鱼蟹产区已找不到它们的踪迹,

玻璃化冻存小鼠艾氏腹水癌细胞的超微结构和功能研究

研究了小鼠艾氏腹水癌细胞在含有不同低温保护剂的玻璃化冻存液内，快速降温冷冻保存１～７ｄ后细胞超微结构和功能的变化．结果表明，以９０％ＶＳｌ（含１８．５％Ｗ／ＶＤＭＳＯ，１４．Ｏ％Ｗ／Ｖ乙酰胺，９．０％Ｗ／Ｖ丙二醇，４．１％Ｗ／Ｖ分子量６０００的聚乙二醇）作为冻存液，快速冻存、复温后的艾氏腹水癌细胞，存活率为７ｌ％，绝大多数细胞保持完好的超微结构，体外ＤＮＡ增殖能力仍能保持较高的水平。小鼠体内接种后的长瘤情况与新鲜对照组相比没有显著差异．因此，复苏后的艾氏腹水癌细胞可用于该癌细胞模型的接种传代．这种快速、简便的方法可应用于艾氏腹水癌细胞的深低温保存．

N,N-二甲基甲酰胺对人淋巴细胞的低温保护作用

本文报道了N,N-二甲基甲酰胺(DMF)对冻存人外周血淋巴细胞,具有底温保护作用,实验结果表明,淋巴细胞在含有10％DMF和40％人AB型血清的1640液内冻存40至90天后,获得很高的存活率,并且超微结构完整,细胞凝集也较少.虽然在室温时,DMF对淋巴细胞有一定的毒性,DNA合成能力有所降低,但仍是一种优良的细胞低温保护剂。

冻存人淋巴细胞凝集的成因分析

本文对长期冻存的人外周血淋巴细胞的细胞膜形态和功能变化及其与细胞凝集的关系进行了研究,并对凝集的成因作了分析,初步提出了降低凝集作用的综合措施.采用含10%二甲基亚砜和40%人AB型血清的RPMI 1640培养液作为冻存液,将淋巴细胞在液氮中冻存1年,复温后,检测其存活率,细胞凝集现象和细胞电泳速率,并观察了细胞表面超微结构的变化.冻存淋巴细胞复苏后,部分细胞呈现凝集状态,这是由于细胞膜结构和功能受到损伤所致,表现在细胞表面净负电荷密度的降低,电泳率减缓,细胞轻度皱缩,膜表面微绒毛增粗,出现粗大的指状突起.二甲基亚砜是造成膜结构与功能变化的一个重要因素,在常温下更加明显,它具有较强的促凝集作用.此外,淋巴细胞悬液内混杂血小板,也是促进细胞凝集的因素.

快速和慢速冻存对小鼠骨髓造血细胞功能影响的比较研究

本文采用快速和慢速两种不同冻存方法深低温保存小鼠骨髓细胞，在冻存１、１０、２０和３０ｄ．复苏后检测细胞的功能变化，并比较两种不同方法冻存对细胞的影响．实验结果表明。快速冻存３０ｄ，细胞的回收率、存活率和膜完整性与冻存前比较分别为７１．７４±８．４７％、７８．６１±７．５４％和６５．３４±４．２０％．受８．０Ｇｙ￣（６０）Ｃｏ－γ射线照射的同种小鼠，移植冻存－复温骨髓细胞后，造血于细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的回收率为新鲜对照组的７２．４１±６．０２％．受体小鼠的骨髓有核细胞数、白细胞数和牌细胞数回升显著，３０天的存活率为４４％．上述各项指标与慢速冻存组比较均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）．提示快速冻存仍能保持造血干细胞的一定活力．