LncRNA HAGLR靶向miR-143/Hedgehog信号通路对HPV16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制

目的 研究LncRNA HAGLR靶向miR-143/刺猬因子(Hedgehog)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制。方法 CaSki细胞购自美国标准生物品收藏中心。选取宫颈癌患者的癌组织(符合宫颈癌确诊标准)与癌旁5 cm宫颈组织标本各10例。将LncRNA HAGLR转染到宫颈癌细胞中后分为宫颈癌组、NC组及转染组。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-143水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western印迹检测音猬因子重组蛋白(Shh)、神经胶质瘤相关基因同源蛋白(Gli)1蛋白水平。双荧光素酶报告检测LncRNA HAGLR、miR-143、Shh、Gli1靶向。结果 宫颈癌组织中LncRNA HAGLR表达明显高于在癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌组与NC组各指标对比无明显差异(P>0.05)。与NC组相比,转染组LncRNA HAGLR、增殖能力、Shh、Gli1水平明显降低,miR-143、凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 LncRNA HAGLR靶向升高miR-143及抑制Hedgehog信号通路可降低HPV16/18感染的宫颈癌细胞的增殖并诱导凋亡。

miR-222-3p对人乳头瘤病毒感染的宫颈癌细胞活性及糖酵解的作用及其机制

目的:探讨miR-222-3p对人乳头瘤病毒(HPV)感染阳性宫颈癌细胞活性及糖酵解的作用及其机制。方法:将Siha细胞分为宫颈癌组(未转染的HPV感染Siha细胞)、miR-222-3p-NC组(HPV感染Siha细胞转染miR-222-3p-NC)、miR-222-3p mimics组(HPV感染Siha细胞转染miR-222-3p mimics)及miR-222-3p siRNA组(HPV感染Siha细胞转染miR-222-3p siRNA)。qPCR检测各组Siha细胞miR-222-3p相对表达;CCK-8检测各组Siha细胞活性;流式细胞仪检测各组Siha细胞凋亡率;Transwell小室检测各组Siha细胞侵袭数目;划痕实验检测各组Siha细胞迁移距离;试剂盒检测各组Siha细胞葡萄糖及乳酸水平;免疫印迹检测各组丙酮酸激酶M2型(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达;荧光素酶证实miR-222-3p对PI3K、AKT的调控作用。结果:宫颈癌组、miR-222-3p-NC组、miR-222-3p mimics组及miR-222-3p siRNA组的Siha细胞中miR-222-3p的相对表达分别为1.00±0.00、0.96±0.02、1.33±0.09及0.60±0.04,差异有统计学意义。与miR-222-3p-NC组相比,miR-222-3p mimics组细胞增殖、侵袭及迁移、乳酸、葡萄糖、PKM2、LDHA、PI3K、AKT升高,凋亡率减少;与miR-222-3p mimics组相比,miR-222-3p siRNA组增殖、侵袭、迁移、乳酸、葡萄糖、PKM2、LDHA、PI3K、AKT均降低,凋亡率升高。荧光素酶证实抑制miR-222-3可抑制野生型PI3K、AKT表达。结论:抑制miR-222-3p可显著降低HPV感染的宫颈癌细胞增殖、迁移及恶性侵袭,促进凋亡,抑制肿瘤细胞糖酵解,作用机制可能与降低PI3K/AKT活性相关。

灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3⁃激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V⁃FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p⁃AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase⁃3(裂解的半胱天冬酶3)和E⁃cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p⁃AKT、PCNA、Cleaved caspase⁃3和E⁃cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p⁃AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase⁃3和E⁃cadherin表达升高(P<0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p⁃AKT、PCNA、Cleaved caspase⁃3和E⁃cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

唐山地区头颈部癌组织HPV与肿瘤复发相关性

目的人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)相关头颈部癌构成了头颈部肿瘤一个独特亚组,本研究分析唐山地区头颈部癌组织中HPV检出情况、HPV阳性头颈癌患者的临床病理特征及与肿瘤复发的相关性。方法选取2003-01-01-2013-12-31唐山市头颈疾病病理研究基地头颈部癌手术切除标本418例,采用PCR反向斑点杂交技术检测肿瘤组织中HPV-DNA,分析HPV阳性头颈癌患者的临床病理特征及与肿瘤复发的相关性。结果唐山地区头颈部癌组织中HPV平均检出率为20.8%(87/418),多数为HPV16型,少数为HPV11、HPV35和HPV58型。其中,喉癌、口腔癌、下咽癌和口咽癌组织检出率分别为19.0%(19/100)、29.3%(24/82)、26.1%(12/46)和28.6%(32/112),涎腺腺样囊性癌组织中无一例HPV检出(0/78),不同部位肿瘤组织中HPV检出差异有统计学意义,z=25.245,P<0.001;吸烟组HPV检出率为13.1%,低于非吸烟组33.3%,差异有统计学意义,χ2=17.675,P<0.001;复发组HPV检出率为3.9%,低于未复发组30.7%,差异有统计学意义,χ2=30.164,P<0.001。HPV检出率与患者性别、年龄、肿瘤分级和分期无明显相关性,均P>0.05。多因素Logistic回归分析显示,肿瘤分化程度(OR=1.549,95%CI:1.131~2.122)和HPV感染(OR=0.089,95%CI:0.038~0.210)是影响复发的主要因素,均P<0.01。结论唐山地区头颈部癌组织中HPV检出率低,HPV阳性者多为非吸烟患者;肿瘤分化程度低及HPV阴性的头颈癌患者复发率高;常规HPV检测对头颈癌患者的肿瘤复发有预警作用。

C-Fos与HR-HPV病毒负荷量在宫颈病变及宫颈癌中表达的相关性研究

目的探讨原癌基因蛋白（C－Fos）在宫颈病变组织及宫颈癌中的表达及与高危人乳头瘤病毒（HR—HPV）感染的相关性。方法收集2012--2014年就诊于唐山市妇幼保健院125例慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者的宫颈组织标本及相应宫颈脱落细胞标本，采用免疫组化（SP）法检测宫颈组织C－Fos基因蛋白的表达，同时采用杂交捕获法（Hc－Ⅱ）检测相应宫颈脱落细胞中HR—HPV病毒负荷量，分析二者在宫颈病变及宫颈癌组织中表达的相关性。结果125例标本中HRHPV阳性81例，其中1≤病毒负荷量（RLU／CO）≤100共40例，100～1000共33例，〉1000为8例；C－Fos在慢性宫颈炎、CINI、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中阳性表达率分别为0％，33．3％，42．9％，52．2％，67．5％，经Spearman秩相关分析显示，HR－HPV病毒负荷量与C－Fos表达有相关性（r=0．533，P=0．000）。结论随宫颈病变程度进展，HR－HPV病毒负荷量与C－Fos表达率均逐渐升高，且二者具有相关性．有望将二者联合检测应用于临床。进而预测宫颈病变及宫颈癌的痛变程度。