新型免疫抑制剂芬戈莫德的研究进展

芬戈莫德(fingolimod,FTY720)是冬虫夏草中提取的有效成分多球壳菌素(myriocin,ISP-1)通过结构改造而合成的一种新型免疫抑制剂。与传统的免疫抑制剂不同,它不影响淋巴细胞的活化和增殖,主要作用于细胞表面的鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)来发挥免疫抑制和免疫调控作用。本文介绍FTY720对T、B淋巴细胞和天然免疫细胞(树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤性T细胞)的分布和细胞因子产生的影响,探讨FTY720对炎症的免疫抑制和免疫调控作用;对FTY720在自身免疫病、移植物抗宿主病和肿瘤治疗等方面的研究进展,FTY720的副作用及可能的解决方案做了简要总结。

芬戈莫德对小鼠皮肤胶原沉着病的治疗作用及可能机制

目的探讨芬戈莫德对小鼠皮肤胶原沉着病的治疗作用及可能机制。方法建立B10.D2→BALB/c异基因移植小鼠皮肤胶原沉着病模型,随机分为两组,芬戈莫德治疗组口服芬戈莫德1 mg/(kg.d),连续治疗50 d;模型组口服等体积的无菌PBS+无水乙醇(芬戈莫德溶剂)混合溶液。同时移植BALB/c供体小鼠细胞混悬液,建立BALB/c小鼠同基因移植对照。记录小鼠体质量和状态变化情况;取耳部皮肤进行组织病理学分析;提取耳部RNA,实时荧光定量PCR检测趋化因子,即调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、单核细胞趋化因子(MCP)-1,以及纤维生成相关的转化生长因子(TGF)-β1和胶原Ⅰ表达水平的变化;取第4周和第8周各组外周血,通过流式细胞仪分析外周血中T、B淋巴细胞水平的变化。结果观察期结束(13周)时,芬戈莫德治疗组小鼠体质量(18.67±0.26)g,明显高于模型组(15.68±1.45)g(P<0.05);组织病理学结果显示,与模型组相比,芬戈莫德治疗组小鼠皮肤无明显增厚变硬、胶原沉着及炎性细胞浸润;实时荧光定量PCR检测证实,芬戈莫德治疗组小鼠皮肤RANTES、胶原Ⅰ、TGF-β1以及MCP-1 mRNA转录水平较模型组显著下调(P<0.05);流式检测结果显示,第4、8周时芬戈莫德治疗组小鼠外周血T淋巴细胞所占比例为(22.8±5.96)%与模型组(72.96±14.97)%相比显著下降(P<0.05)。结论芬戈莫德主要通过降低外周血中T淋巴细胞的数量,抑制效应细胞的活化,下调炎症细胞的浸润以及趋化因子的分泌表达,从而改善小鼠皮肤胶原沉着及炎性浸润,显著提高小鼠的生存质量。

西罗莫司对慢性排斥反应诱发小鼠肾炎的治疗作用及可能机制

目的探讨西罗莫司对慢性排斥反应诱发小鼠肾炎的治疗作用及可能的机制。方法建立DBA/2小鼠→B6D2F1(DBA/2×C57BL/6)小鼠的慢性排斥反应诱发的小鼠肾炎模型,随机分为两组西罗莫司治疗组和模型组。西罗莫司治疗组给予西罗莫司1 mg/(kg·d),连续治疗12周;模型组给予同样剂量的橄榄油。通过尿蛋白检测及组织病理学分析确定小鼠肾炎的发生。酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中抗核酸抗体(抗-dsDNA IgG、抗-dsDNA IgG1、抗-dsDNA IgG2a、抗-ssDNA IgG、抗-ssDNA IgG1、抗-ssDNA IgG 2a)的水平;实时定量PCR检测肾脏中的炎性因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、IL-1β、趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、B细胞趋化因子(BLC)、转化生长因子(TGF)-β1和胶原蛋白(collgen)Ⅰ的水平;直接荧光标记检测外周血或脾中T、B淋巴细胞的活化水平及调节性T细胞(Treg)的比例变化。结果 12周观察期结束时,西罗莫司组小鼠肾炎的发病率明显低于模型组(P<0.05);病理结果显示,模型组的小鼠肾组织有明显的血管内膜增生及炎性细胞浸润,西罗莫司组的小鼠肾组织趋于正常;建模后5周,ELISA结果显示,西罗莫司组小鼠血清中自身抗体及抗核抗体水平较模型组显著降低(P<0.05);实时定量PCR结果显示,西罗莫司组小鼠肾IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、MCP-1、RANTES、BLC、TGF-β1及collgen I的mRNA表达转录水平均明显低于模型组(P<0.05);流式测定结果显示,西罗莫司组小鼠外周血中活化/记忆性T细胞比例、脾中T、B细胞表面活化分子水平较模型组均显著降低(P<0.05);与模型组相比,西罗莫司组小鼠脾中CD4+FOXP3+Treg细胞的比例明显上调(P<0.05)。结论西罗莫司可能通过上调CD4+FOXP3+Treg细胞水平,抑制效应细胞的增殖活化,下调趋化因子和炎性因子的表达,从而有效延缓小鼠慢性排斥肾炎的发生。

索债型非法拘禁罪的司法认定研究

随着经济和社会法治的发展,因债务处理不当引发诸多法律问题。在实践中,索债型非法拘禁罪的犯罪现象十分复杂,遇到的情况也是愈发多样,在对此罪的认定及定罪处罚上,并没有达成统一认识。并且,索债型非法拘禁罪具有介于非法拘禁罪与绑架罪之间的复杂性,介于一般犯罪与违法行为之间的模糊性,很容易导致刑法理论与司法实践的混乱。因此,有必要区分彼罪与此罪,对本罪目前存在的疑难问题给予全面探讨与研究。本文通过对索债型非法拘禁罪的特征、犯罪对象等方面展开论述,对一些争议较大的问题进行重点解析,以期解决索债型非法拘禁犯罪的司法认定问题。

Tim-3抗体的生物学活性及应用研究

目的制备抗人Tim-3单抗并评价其生物学活性,为干预Tim-3表达失调引发的疾病提供实验基础。方法制备重组人Tim-3蛋白,常规方法免疫BALB/c小鼠,筛选出阳性克隆,并对其识别、中和活性进行体内外验证,探讨其作为免疫干预手段的可行性。结果 1获得一株能够分泌具有较好结合活性的抗人Tim-3单克隆抗体细胞株(克隆号L3D),其分泌的免疫球蛋白亚型为IgG2a;2流式实验结果表明,该抗体能够结合人U937细胞上的Tim-3分子,且与小鼠RAW 264.7细胞上Tim-3有一定的交叉结合活性;3该抗体能够阻断Gal-9分子诱导的人THP1细胞凋亡,具有良好的体外中和活性;4体内注射L3D,显示该抗体能够显著加重脓毒血症模型小鼠病情,提高炎性因子的表达水平,显示出其良好的体内中和活性。结论成功制备一株分泌抗人Tim-3抗体的细胞株,其良好的结合及中和活性为基于Tim-3表达异常相关疾病的干预提供了实验基础。