虎源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠模型的建立

为研究H5N1亚型禽流感病毒的病原特性、致病机理及对其疫苗与救治药物效果评价提供平台,利用本室分离鉴定的虎源A/Tiger/Harbin/01/2002株(简称HAB/01)H5N1亚型禽流感病毒进行连续10倍稀释后,对4～6周龄雄性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定其MLD50,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14d。结果感染小鼠呈现出规律的以肺炎为主的临床症状、病理变化及病死率;测得该病毒对小鼠的MLD50为10-7.1/0.05mL。成功建立了虎源H5N1亚型禽流感病毒感染BALB/c小鼠的实验模型。

高压对米曲霉理化性质影响及诱变的研究

在100-400 MPa压力、保压20 min的条件下处理酱油酿造菌种——米曲霉,研究高压对米曲霉存活率、形态特征、生理性质、蛋白酶、淀粉酶活性等的影响,并诱变筛选优良菌株。结果表明：高压对米曲霉的存活率、形态特征有明显的影响;压力对蛋白酶及淀粉酶活性的影响也有特异的规律,即在一定压力范围内（0.1-200 MPa）蛋白酶的活性随着压力的增加而减小,但随着压力的进一步升高（200-400 MPa）蛋白酶的活性又逐渐增强,在300 MPa时超过对照组,400 MPa时蛋白酶的活性达到最高值;淀粉酶在0.1-100 MPa时活性下降,在200 MPa时其平均的糊化和糖化活性最强、活力最高,当压力升高活性又开始降低,400 MPa时几乎又回到对照值。另外,高压处理后获得一株理想的变异菌株HP300a：生长速度快、孢子数量多、蛋白酶活力高,且不易被杂菌污染。其成曲的几项主要指标均优于对照株,酿出酱油的几项主要指标也明显优于对照株。为利用高压诱变筛选米曲霉优良菌种、提高酿造酱油产品的产量及质量提供了理论依据,并发现了高压处理米曲霉引起其蛋白酶及淀粉酶活性改变的特殊规律。

一株产新型淀粉酶嗜温菌ZW2531-1的分离与鉴定

根据淀粉筛选平板上透明圈的大小,从土壤中筛选、分离出12株产淀粉酶嗜温菌株,由各菌株分泌淀粉酶催化淀粉降解的产物组分特征判定,菌株ZW2531-1为初筛12个菌株中较优良的产酶菌株.由ZW2531-1产生的新型淀粉酶可催化淀粉降解产生麦芽糖、麦芽三糖和异麦芽三糖及异麦芽四糖,但不产生葡萄糖.通过电镜观察,可见ZW2531-1菌株的杆菌形态及芽孢.提取ZW2531-1的全基因组,根据已知16S rDNA上的保守序列设计引物,扩增出ZW2531-1菌株的16S rRNA基因,并与其他标准菌16S rDNA序列进行对比分析,建立进化树,最终确定了ZW2531-1的系统发育地位,推断ZW2531-1应属于Bacillus属的一个种,为Bacillus sp.ZW2531-1.

虎源高致病性禽流感病毒H5N1在实验小鼠体内分布与含量测定

将本实验室分离、鉴定的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株第3代鸡胚尿囊液进行10-3倍稀释,接种小鼠,待小鼠死亡后无菌采取心、肝、脾、肺、肾、脑六种脏器分别研磨制成乳剂,接种MDCK细胞,以细胞病变为判定指标,计算病死小鼠不同脏器内病毒含量。同时用RT-PCR、血凝-血凝抑制试验以及电镜负染的方法进行鉴定和观察。结果显示,可在小鼠的肺脏、肝脏、肾脏、脑组织中检出所接种的病毒,肺脏中的病毒含量最高,脑中的病毒含量次之,肝脏和肾脏中的病毒含量最少。可在肺、肝、肾、脑组织与感染细胞培养物中扩增出与理论值一致的核酸条带,肺乳剂上清液感染细胞培养物中可检出1∶23的血凝效价,电镜观察在肺乳剂上清液及其感染细胞培养物中可见到典型的流感病毒颗粒。

犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞,通过RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36 h后就可检测到目的基因的转录;在转染72 h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明,3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答,这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。