运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白(英文)

目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能。方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长。诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母菌株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有X-α-gal的四缺(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)的培养皿上。分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒。结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内,其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAG5,PTPN23,L3MBTL3,RA-LYL,KIAA1783。结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆。这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索。

早发性帕金森综合征患者抑郁情绪状况研究

【目的】了解早发性帕金森综合征(EOP)患者抑郁情绪状况。【方法】应用汉密尔顿抑郁量表对63例EOP患者和60名正常对照进行评分,并应用统一帕金森病评定量表对EOP患者进行运动评分,使用SPSS13.0软件对所得数据进行统计分析。【结果】本组EOP患者的抑郁发生率为50.8%,高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),其抑郁情绪主要表现为焦虑/躯体化、认知障碍以及绝望感;EOP患者抑郁发生与疾病的严重程度相关,而与发病年龄、受教育年限以及病程无关。【结论】EOP患者有较高的抑郁情绪发生率,在EOP患者发病初期应该考虑治疗其抑郁症状。