大白菜耐热性分子标记的研究

采用单粒传的方法从大白菜耐热品种 177和热敏感品种 2 76杂交后代获得遗传性稳定的重组近交系群体 ,以此为材料用同工酶以及RAPD和AFLP分子标记技术鉴定了与大白菜耐热性数量性状相关的遗传标记 ,单因子方差分析和多元线性回归分析的结果表明 ,有 9个与耐热性QTL紧密连锁的分子标记 ,包括 5个AFLP标记 ,3个RAPD标记和 1个PGM同工酶标记 ,这些标记对耐热性遗传的贡献率为 4 6 .7%。 9个标记中有 5个分布在同一连锁群上 ,其他4个标记与任何一个标记无连锁关系 ,表明上述 9个标记分布在大白菜的 5个连锁群上。

三倍体西瓜种子萌发障碍及吸水促萌技术研究

为克服三倍体西瓜种子的萌发障碍,采用过氧化氢结合吸水促萌技术处理了6个无籽西瓜品种。种子用0.1%过氧化氢、水、水加气浸泡2h,并在饱和相对湿度下保持24h、34h和48h后回干,3种处理都显著提高了种子的萌发速度和萌发能力,发芽率分别提高了38%～56%,过氧化氢浸种结合34h和48h培养为最佳处理组合。吸水促萌提高了所有参试品种的萌发能力,提高程度从14%至66%因品种而异。促萌后的种子用适当的速度回干保存后仍能保持促萌效果。用软-X射线对无籽西瓜种子和胚结构的分析表明,萌发障碍的形成主要与种皮有关,吸水促萌提高了种胚的活力,克服了种皮造成的萌发障碍。

固体基质引发西瓜种子的效果及其对β-半乳甘露聚糖酶活性和DNA复制的影响

【目的】用固体基质引发(SMP)技术克服三倍体西瓜种子萌发障碍,有效提高种子发芽率40%,研究并发现引发机理。【方法】在SMP引发过程中西瓜种子的吸水速度缓慢并始终未达到饱和含水量,RNA积累速度和浓度高于对照。采用单粒种子凝胶扩散法和电泳法研究种子中β-半乳甘露聚糖酶的活性。【结果】SMP处理种子中的高酶活性种子的比率以及平均酶活性都高于未处理种子。流式细胞分析仪对引发种子DNA复制水平调查结果表明,SMP处理的种子在种子吸胀的各个阶段,胚根尖中6C与3C的比值都高于对照种子。用软-X射线对种子结构的检测发现,SMP处理过的种子胚乳套根尖处变薄。【结论】在SMP条件下西瓜种子中的生理、生化、DNA复制水平以及结构发生的变化与克服萌发障碍提高三倍体西瓜种子萌发能力相关。

不同超干方法与几种蔬菜种子储藏效应的研究

采用硅胶干燥、真空冷冻干燥、低温低湿干燥以及加温干燥 4种方法将 6种蔬菜种子的含水量降到 5%以下 ,在常温储存条件下保存 10年后进行的发芽试验表明其发芽率与 10年前比较没有明显变化 ,,唯加温干燥的种子降低了萌发时抵抗逆境的活力 ,种子生活力均未降低。

同工酶差异位点分析在蔬菜杂交种纯度检测中的应用

用 10种同工酶和蛋白质分析体系 ,分析了 7种重要蔬菜的 71个杂交种与其亲本之间的差异位点 ,以及这些差异位点用于杂交种纯度检测的可能性和存在的问题。试验表明 ,作物的不同种类 ,杂交种与亲本之间的亲缘关系以及作物种类的遗传多态性 ,都会影响同工酶差异位点产生的多寡 ,从而影响到这一技术是否能用于此种作物的纯度检测。

西瓜种子内源β-半乳甘露聚糖酶活性与分布以及与萌发速度的关系

利用单粒种子凝胶扩散法研究了β-半乳甘露聚糖酶在西瓜种子萌发过程中的分布以及与西瓜种子萌发速率的关系。结果发现,在胚根尖突破种皮前吸胀的西瓜种子中,内源β-半乳甘露聚糖酶主要分布于种子的胚膜套中,并起到减弱外种皮和胚膜套细胞壁对胚根伸出的机械阻力的作用。对具有不同萌发速率的品种以及引发处理和未处理的西瓜种子中酶活性的检测证明,β-半乳甘露聚糖酶活性与西瓜种子萌发速度相关。固体基质引发三倍体西瓜种子过程中β-半乳甘露聚糖酶的活化和种皮阻力的减弱,是引发种子提高了萌发速度和萌发能力的原因之一。

同工酶差异位点分析在蔬菜杂交种纯度检测中的应用

用 10种同工酶和蛋白质分析体系 ,分析了 7种重要蔬菜的 71个杂交种与其亲本之间的差异位点以及这些差异位点用于杂交种纯度检测的可能性和存在的问题。试验表明 ,作物的不同种类 ,杂交种与亲本之间的亲缘关系以及作物种类的遗传多态性 ,都会影响同工酶差异位点产生的多寡 ,从而影响到这一技术是否能用于此种作物的纯度检测。分析了不同同工酶在不同蔬菜中的多态性以及在蔬菜种子纯度检测中的表现。

几种蔬菜种子的渗漏物质与其活力关系的研究

本文研究了种子渗漏物质的变化与种子老化之间的关系并藉此预测种子活力的方法。从6种蔬菜种子的可溶性渗漏物质的分析表明,种子浸泡液的紫外光谱和茚三酮反应与种子的活力和发芽力呈极显著的负相关。这些方法对于长期保存的大量种质资源种子的生活力及活力的测定是简单可行的。

用EST-SSR分子标记技术构建大白菜核心种质及其指纹图谱库

利用EST-SSR分子标记对大白菜种质资源基因库中686份样品所代表的1900份大白菜种质资源进行分析研究。构建大白菜种质资源的核心种质并且形成核心种质的EST-SSR指纹图谱库。结果表明利用4组鉴定白菜品种的EST-SSR的特异性标记组合,获得近158个EST-SSR多态的标记,对大白菜种质资源基因库中686份样品所代表的1900份大白菜种质资源进行核心种质的构建提供了分析数据。形成的核心种质包括168份样品,占库存资源的8.8%,它的多态位点百分率保持了原群体的100%。所构建的核心种质涵盖了原资源的绝大部分区域来源的品种,包含了早、中、晚熟品种中所有典型的大白菜类型和其相关的特征特性。并进一步进行了核心种质资源遗传多样性分析。核心种质的EST-SSR指纹图谱库中,每一份样品的指纹都是唯一的,为登记、评价、整理、分发、繁殖等种质资源库的管理和育种者对其材料的利用提供了重要的有价值的信息。EST-SSR标记组合是构建中国大白菜核心种质及其指纹图谱的经济、高效的方法。

大白菜分子遗传图谱的构建与分析

利用不同生态型的大白菜 (BrassicacampestrisL .ssp .pekinensis)栽培种高代自交系 177和 2 76杂交获得的 10 2份F6重组自交系 ,通过对AFLP和RAPD两种分子标记进行遗传分析 ,构建了包含 17个连锁群 ,由 35 2个遗传标记组成的大白菜连锁图谱 ,其中包括 2 6 5个AFLP标记和 87个RAPD标记。该图谱覆盖基因长度2 6 6 5 .7cM ,平均图距 7.6cM。AFLP标记对于增加图谱密度效率较高 ,但容易出现聚集现象 ,从而造成连锁群上有较大的空隙。连锁群上有 13.92 %的分子标记表现偏分离 ,偏分离标记在连锁群上聚集出现。

大白菜耐热性QTL定位与分析

应用 35 2个标记位点的大白菜AFLP和RAPD图谱 ,采用复合区间作图的方法对控制大白菜耐热性的数量性状基因位点 (QTL)进行定位和遗传效应研究。用苗期热害指数进行耐热性表型鉴定 ,共检测到 5个耐热性QTL位点 ,分布于 3个连锁群上。ht 1、ht 3和ht 5表现为增效加性效应 ,ht 2和ht 4表现为减效加性效应。ht 2对大白菜耐热性的遗传贡献率最大 ,其次是ht 5。发现了与 5个QTLs紧密连锁的侧连分子标记 ,它们与QTL间的距离为 0 1～ 2 4cM。这为大白菜耐热性分子标记辅助选择提供了理论基础。

用SRAP标记分析黄瓜品种遗传多样性及鉴定品种

利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术对35份不同类型的黄瓜品种进行了指纹图谱遗传多态性分析,从38对引物组合中筛选出3个多态性高的引物组合,此3对引物扩增得到的图谱可将35份黄瓜品种完全区分开来。依据SRAP指纹图谱聚类分析结果确定了品种之间的遗传距离以及鉴别的难易程度。用SRAP分子标记技术得到了两个黄瓜品种杂交组合F1与亲本的指纹图谱中的鉴别条带,可以用于黄瓜杂交种的纯度检测。

大白菜叶球相关性状的QTL定位与分析

应用 35 2个标记位点的大白菜AFLP和RAPD图谱和一套品种间杂交获得的重组自交系群体 ,采用复合区间作图的方法 ,对大白菜叶球相关的 7个农艺性状进行QTL有定位及遗传效应研究。结果表明 ,在 14个连锁群上检测到 33个QTL ,其中控制生育期的有QTL 3个 ,控制外叶数的QTL有 3个 ,控制球高的QTL有 7个 ,控制球径的QTL有 5个 ,控制球叶数的QTL有 4个 ,控制球重的QTL有 4个 ,控制荒重的QTL有 7个。另外 ,估算了单个QTL的遗传贡献率和加性效应 ,其加性效应各不相等 ,各位点的遗传贡献率介于 4 .72 %～ 2 1.0 4

大白菜SSR检测体系的优化

以不同地区栽培的5份大白菜品种为试材,从PCR反应组成、扩增程序、电泳检测等环节对SSR技术进行了优化,建立了一套适用于大白菜品种鉴定的SSR-PCR体系。即10μL反应组成为:1×buffer;2.50mmol/LMgCl2;0.10mmol/LdNTPs;0.35μmol/LSSR引物;1.00ng/μL模板DNA和0.40UTaq酶。适宜的扩增程序为72℃热启动3min,94℃预变性2min后进行20个迫降循环:94℃变性60s,68℃退火60s,72℃延伸45s(-1℃/2cycles);再进行20个循环:94℃变性60s,58℃退火60s,72℃延伸45s,72℃延伸10min。应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(银染)电泳检测并取得很好的效果。选用108对芸薹属SSR引物,对这5份品种的基因组进行扩增,筛选出具有2条以上特异扩增条带的SSR引物22对。用这些引物对5份品种进行扩增,初步分析了SSR标记的多态性及用于大白菜指纹分析的潜力。

AFLP分子标记鉴别大白菜品种

本试验采用AFLP技术,研究了90份来自7个不同栽培地区的大白菜品种材料。共筛选了20对引物,不同引物组合检测多态性谱带的能力有很大的差异,多态性谱带的数量从9条到32条不等。其中E-ACA/M-CTG是大白菜品种十分高效的引物组合,共产生71条清晰的扩增带,其中有32条多态性谱带,多态性谱带的百分率为45.7%。通过该引物组合,能将90个品种全部区分开来。同时应用该引物组合检测2个大白菜杂交品种(北京新2号,京夏王)各10株,其中有1株北京新2号的谱带异常,其余同一品种不同单株的带型完全一致。表明AFLP标记用于研究品种指纹图谱,并鉴别品种是完全可行的。

SDS-PAGE蛋白电泳技术在F_1代杂交种纯度鉴定中的应用

随着市场的需要 ,商品种子量越来越大 ,而对杂交种质量问题不容忽视 ,我们在实际工作中对中椒四号 ,中椒五号 ,京欣一号 ,金花宝四个杂交种纯度鉴定尝试了大量的同工酶电泳方法 ,包括 POX,EST,ADH,MDH,ISH,PGM,PGI等同工酶电泳图谱中均未找到父母本与一代杂种的鉴别标记。而在种子蛋白质 SDS- PAGE电泳图谱中找到了一代杂种与父母本的鉴别带 ,并利用这个鉴别带进行了杂交种纯度鉴定。这种鉴定方法的准确性在田间对照纯度鉴定中得到确认 。

大白菜种质资源的遗传多样性分析

采用RAPD技术对64份大白菜种质资源的遗传多样性进行了研究。从OPE,OPF,OPG和OPH 4套共80条引物中选出了16个条带清晰、且具有多态性的引物分析供试材料,结果共产生100条扩增带,其中72条带具有多态性,多态性频率平均为72%。由RAPD分析结果可初步得出芜菁、小白菜和大白菜的特征谱带,这些特征谱带可分别作为这3个亚种的RAPD标记,据此可鉴定这3个亚种。将扩增出来的72条多态性片断进行统计,采用UPGMA进行聚类分析,取相似距离0.721为阈值,将大白菜种质资源分为6个类群,而小白菜(66号,苏州青)和芜菁(67号)各成一类,共8个类群。

以科研促进检测建设与国际接轨的——蔬菜种子检测中心

农业部蔬菜种子质量监督检验测试中心位于北京市农林科学院蔬菜研究中心内，是由农业部授权、经国家计量认证的专职检验机构。多年来，在农业部市场与经济信息司、农业部质量办公室、北京市科委、北京市农林科学院及北京市蔬菜研究中心的正确领导和大力支持下，中心本着“科学、公正、廉洁、高效、服务”的原则，出色的完成了所承担的各项蔬菜种子质量监督抽查和委托检测工作。

酯酶(EST)和酸性磷酸酯酶(ACP)同工酶电泳技术在绿菜花和西瓜F1代杂交种纯度检测中的应用

用水平板等电聚焦聚丙烯酰氢电泳（IEF）和垂直板均匀胶聚丙烯酸氨电泳（PAGE）分析了绿菜花3个杂交组合（碧秋，B53，碧杉）和西瓜2个杂交组合（丰收一号，金花宝）发芽种苗的酯酶同工酶和酸性磷酸酯酶。发现5个杂交组合中，5个F1一代杂交种与其双亲的酯酶（EST）和酸性磷酯酶（ACP）酶谱有明显稳定的区别。在此基础上，建立了酯酶（EST）和酸性磷酸酯酶（ACP）酶谱分析绿菜花和西瓜F1一代杂交种纯度的技术，检测结果与田间鉴定结果基本一致。

AFLP分子标记应用于白菜品种鉴定

采用AFLP技术,用混合的模板DNA从数对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性丰富且分辨能力强的引物,对市场上经营的两份大白菜杂交种样品586和587所扩增出的AFLP指纹图谱进行分析,根据数据分析得到了两份大白菜样品与标准样品之间的欧氏距离系数。6对引物对两份大白菜样品和标准样品扩增所得到的指纹图谱分析的结果表明,587与标准样品存在显著的差异,其中多态性位点占总扩增位点的31.7%,欧氏距离系数为3.87,样品587与标准样品不是同一个品种;而样品586与标准样品之间欧氏距离系数近于0,而据此得知此样品与标准样品之间没有明显的差异,判断为同一个品种。本研究采用AFLP技术很好地鉴别了两份样品的不同。这对应用AFLP技术鉴定大白菜品种的真伪,保护品种繁育者、生产者和种子使用者的利益提供了有效技术体系的依据。