成都市健康中青年人群外周血淋巴细胞免疫表型正常参考值调查

目的:调查成都地区健康人群中外周血淋巴细胞免疫表型分布,建立该地区淋巴细胞免疫表型正常值参考范围。方法:使用流式细胞术对112例健康人群外周血中各淋巴细胞亚群免疫表型检测并分析结果,运用SPASS17.0进行统计学分析,确定各淋巴细胞亚群正常值参考范围。结果:成都地区30岁～50岁健康人群外周血淋巴细胞亚群正常值参考范围为:CD3^+CD19^-,33%～86%;CD3^+CD4^-CD8^+,7%～38%;CD3^+CD4^+CD8^-,12%～63%;CD3^-CD19^+,2%～19%;CD3-CD(16+56)^+,6%～43%。结论:建立了成都地区健康中青年人群外周血中各淋巴细胞亚群免疫表型正常值参考范围,为分析和研究机体细胞免疫状态及肿瘤、免疫性疾病的预防提供了参考依据。

CIK细胞输注联合化疗治疗食道癌1例

食道癌是发生在食道上皮组织的恶性肿瘤，食道癌的发病与食道发炎受损相关，同时也具有一定的遗传性。我国是食道癌的高发区，死亡人数仅次于胃癌。通常食道癌患者接受大剂量的化疗后，免疫能力下降，极易引起感染，同时食道癌治疗后仍有转移复发的危险。CIK（cytokine—induced killer，多细胞因子诱导的杀伤细胞）是经过多种细胞因子诱导外周血单个核细胞产生的一类免疫细胞，扩增速度快，细胞毒性强，

脐带间充质干细胞对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老实验研究

目的研究人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对D-半乳糖所致的亚急性衰老小鼠的抗衰老作用。方法对模型对照组和治疗组连续8周颈部皮下注射D-半乳糖(0.25 mg/10 g)以建立衰老模型,两周之后治疗组注射脐带间充质干细胞。检测脐带间充质干细胞治疗前后衰老相关指标:包括小鼠血清、肝组织、脑组织中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化。结果模型对照组与治疗组相比,SOD、CAT偏低,MDA含量偏高并且存在显著性差异(P≤0.05),与空白对照组相比,则存在极显著性差异(P≤0.01)。结论脐带间充质干细胞能够显著改善D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的相关衰老指标,具有抗衰老作用。

体外培养不同时间后冻存对脐血来源CIK细胞生物学活性的影响

目的:观察体外培养不同时间后冻存对人脐血来源细胞因子诱导杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞增殖、免疫表型、细胞毒活性以及细胞因子分泌的影响。方法:CIK细胞在体外培养6、9、12 d后冻存1个月,复苏后培养至72 h,其间每隔24 h检测细胞增殖情况,并采用流式细胞术检测复苏后细胞免疫表型、CCK-8法检测复苏后细胞对A549细胞的杀伤活性、ELISA方法检测复苏后CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的变化。结果:体外培养不同时间后冻存的CIK细胞在复苏后仍然显示出较好的增殖活性,其中,体外培养6 d后冻存组CIK细胞增殖活性明显高于体外培养9 d和12 d后冻存组CIK细胞,复苏72 h时,6、9、12 d冻存组CIK细胞数分别为(35.90±1.67)×106、(18.98±2.13)×106和(11.76±2.12)×106个(P<0.01)。体外培养6、9、12 d后冻存组CIK细胞复苏24 h后,各冻存组CD3+CD56+、CD3+CD8+细胞比例逐渐增加,且复苏72 h后6 d冻存组CIK细胞中CD3+CD56+和CD3+CD8+细胞比例最低。体外培养后冻存组CIK细胞在复苏24 h内对A549细胞的杀伤活性较低,但24 h后细胞毒活性有较大幅度的增加,且体外培养12 d后冻存组CIK细胞对A549细胞的杀伤活性高于6 d和9 d冻存组CIK细胞,如复苏后72 h,12、6、9 d冻存组CIK细胞对A549细胞的抑瘤率分别为(0.81±0.09)%、(0.59±0.06)%、(0.42±0.08)%(P<0.01)。ELISA检测结果显示,随着复苏时间的延长,体外培养不同时间后冻存的CIK细胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平也逐渐上升;复苏72 h时,体外培养6 d后冻存组CIK细胞分泌IFN-γ的量要高于其他组,而体外培养12 d后冻存组TNF-α的分泌量则明显高于其他组。结论:体外培养不同时间后冻存对CIK细胞的生物学活性有一定影响,但复苏后经短时间培养后基本恢复,提示CIK细胞可以在培养至12 d后进行冻存。

脐血CIK细胞表型变化与细胞毒活性相关性研究

目的研究脐血来源细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞表型变化与细胞毒活性相关性。方法用流式细胞术测定诱导前脐血单个核细胞及诱导后培养7、14和21 d CIK细胞的表型;用CCK-8测定培养0、7、14和21 d CIK细胞按20∶1、10∶1、5∶1与肿瘤细胞U251、SiHa和A549接种时对其的细胞毒活性。结果 CIK细胞对U251、SiHa和A549的杀瘤率,7、14和21 d依次降低(P<0.05);CIK细胞接种比例越高,杀瘤率越高(P<0.05);CIK细胞杀瘤率与CD3-CD19+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD45RA-CD45RO+、CD3+CD25-CD28+、CD3+CD25+CD28+呈正相关(P<0.05),与CD3+CD4-CD8-、CD3+CD16+CD56+呈负相关(P<0.05)。结论脐血CIK细胞对肿瘤细胞有很强的杀伤活性,且杀伤活性与CIK细胞各细胞表型及其与肿瘤细胞的比例有关。

两种不同淋巴细胞分离液对脐带血单核细胞的提取及后期诱导培养CIK细胞的影响

目的:研究两种不同的淋巴细胞分离液对脐带血单核细胞的分离效果及后期对CIK细胞的诱导培养的影响。方法:分别使用国产TBD以及进口GE healthcare牌淋巴细胞分离液分离提取脐带血单核细胞,用悬浮细胞培养法诱导培养脐带血单核细胞形成CIK细胞,再用血球计数板及台盼兰染色法检测细胞密度及活率。结果:国产的TBD牌所分离的单核细胞分层较清楚,并且方便提取,而使用进口GE healthcare的淋巴细胞分离液提取的单核细胞数量较多,但经过后期诱导培养CIK细胞发现两种分离液提取的细胞培养到后期数量逐渐接近。结论:国产TBD牌淋巴细胞分离液在用于脐带血淋巴细胞分离提取时较进口GE healthcare牌经济,并且细胞提取方便,后期培养效果无明显差别。

一种新的提取脂肪间充质干细胞的方法及对提取细胞的分离、培养及鉴定

目的:探讨建立一种新的从膨胀液中提取脂肪间充质干细胞(ADSCs)的分离方法。方法:收集含有脂肪间充质干细胞的膨胀液,然后从膨胀液中分离出脂肪间充质干细胞并进行体外培养,观察培养间充质干细胞生长状态,流式细胞术检测间充质干细胞干性标记物,细胞生长曲线比较新方法与运用传统方法分离脂肪间充质干细胞的增殖活性,多向诱导分化鉴定其向成骨,成软骨及成脂方向分化的能力。结果:成功建立了一种新的从膨胀液中提取脂肪间充质干细胞的分离方法;分离自膨胀液的间充质干细胞数量虽然低于与等体积脂肪组织来源的间充质干细胞,但细胞生长曲线分析结果表明其增殖速度快,生长至第8天时,密度基本等同于脂肪组织来源间充质干细胞。间充质干细胞表面分子标记物CD73,CD90,CD105,CD45,CD34,CD11b,CD19,HLA-DR表达测定结果显示正常,阳性细胞率与脂肪组织来源的干细胞相近。多向诱导分化结果显示从膨胀液中分离的脂肪间充质干细胞可以向成脂、成骨和成软骨三向分化。结论:新方法分离的细胞确为脂肪间充质干细胞,符合国际干细胞协会规定的定义标准。

自体成纤维前体细胞填充凹陷性瘢痕

目的观察体外培养的自体成纤维前体细胞注射治疗颜面部皱纹和凹陷性瘢痕的临床效果，探讨其在面部抗衰老治疗中的意义。方法从患者耳后内侧取一块约3mm×7mm皮肤，通过体外分离、培养产生自体成纤维前体细胞和自体胶原蛋白，致细胞数量增殖到4×10^7／ml时再注入到患者治疗部位的真皮层内。结果本组共780例患者，治疗后随访3～9个月，面部静态皱纹及凹陷性瘢痕均得到明显改善，未出现免疫排斥反应等并发症。结论应用自体成纤维前体细胞注射治疗颜面部浅表皱纹和凹陷性瘢痕，治疗方法简单、创伤轻微、安全、效果确切，是一种较好的修复真皮组织的技术。