苦参提取液中黄酮类化合物的抑菌作用

为探讨苦参中黄酮类化合物体外抑菌活性,采用乙醇回流法从苦参中提取含黄酮类化合物并用分光光度法在510 nm处测定黄酮含量.同时,采用琼脂扩散法研究了苦参黄酮类化合物对2种细菌和3种真菌的抗菌性能,测定了其最小抑菌浓度.结果表明:浓度为0.556 g/L的苦参黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌圈直径分别为11,8 mm,对啤酒酵母菌、黑曲霉和产黄青霉的抑菌圈直径分别为11,9,9 mm;苦参黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母菌、产黄青霉、黑曲霉的最小抑菌浓度分别为5.6×10-3,0.56,0.28,0.56,0.56 g/L.由此得出结论,苦参中黄酮类化合物对细菌和真菌都有抑制作用,对革兰氏阳性菌的作用强于革兰氏阴性菌,对单细胞真菌作用强于丝状真菌.

蚯蚓抗菌肽的提取与抗菌活性研究

用30%～80%不同浓度硫酸铵沉淀蚯蚓蛋白,用考马斯亮蓝测定蛋白含量,采用管碟法和微量稀释方法分别测定蚯蚓抗菌肽和苯甲酸钠在pH值分别是4.0、7.0、9.0下的抑菌活性及最小抑菌浓度(MIC)。结果显示40%、50%、60%、70%硫酸铵沉淀出的蛋白都表现出抗菌活性,并对G(+金黄色葡萄球菌)和G(-大肠杆菌)均有抑菌性。同时证实蚯蚓抗菌肽抗菌性受pH影响不大。

两种方法提取甘草酸效率之比较

目的比较水酸法和氨水法提取甘草酸含量的变化。方法利用正交试验4因素3水平选择最佳提取条件(包括加水量、提取次数、煮沸时间、粉碎时间、溶剂量、振荡时间、氨水浓度),用紫外分光光度法在252nm波长处测定甘草酸含量。结果每100g甘草粗粉用水酸法提取的最佳条件为:每次加水量2000mL,提取2次,煮沸5min,粉碎20s;氨水法最佳条件为:每次加0.4%氨水2000mL,振荡2h,提取2次。最终氨水法提取率为32%,水酸法提取率为26%。结论在最佳条件下,氨水法提取的甘草酸纯度和提取率明显高于水酸法。

产碱性蛋白酶菌株的筛选与诱变育种

为获得性状稳定、高产的碱性蛋白酶菌株,采用平板诱变法对产碱性蛋白酶菌株进行诱变处理。结果表明,采用牛奶平板法及Folin测酶活法从鸡粪土样获得产碱性蛋白酶出发菌株。该菌株经亚硝基胍(NTG)诱变并利用利福平抗性株筛选获得蛋白酶活力为出发菌株34,65倍的2个变异株。因此,利用亚硝基胍作为诱变剂可产生高产酶菌株。

磷酰胺除草剂APM对大麦、黑麦POD和蛋白质组分的影响

不同浓度 ( 1～ 4μmol/ L APM)处理萌发的大麦、黑麦 2种种子 ,在 3μmol/ L APM下 ,大麦中诱导出 POD3(根系 )和 POD2 ,POD3(幼苗 )同工酶谱带 ,黑麦则在 4μmol/ L时诱导出 POD2 、POD4 (根系 )和 POD4 ,POD5(幼苗 )同工酶。蛋白质的变化则呈现出诱导出新的蛋白质或某些蛋白质谱带消失、活性减弱的特性。在 3～ 4μmol/ L APM浓度下诱导出某些新的蛋白质谱带 ( 31 k D,大麦幼苗 ;1 0 k D,大麦根系 ;66k D,8k D黑麦根系 )和某些谱带的消失或着色变浅 ( 88k D,大麦根系 ;66k D,大麦、黑麦幼苗 )。这一结果与 POD同工酶变化结果基本吻合 ,可以认为 3～ 4μmol/ L APM为上述作物的临界浓度。

银离子注入热解碳的抗菌性研究

本文用革兰氏阳性菌-金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌-大肠杆菌研究了注银医用热解碳的抗菌性。注入银离子的能量为70 keV,剂量分别为5×1014、1×10155、×1015、1×1016、5×1016ions/cm2。用卢瑟福背散射分析(RBS)和X射线光电子能谱(XPS)对注银热解碳的表面进行了微观分析。抗菌实验结果表明,样品的抗菌率随着注入剂量的增大而增大,当注入剂量高于1×1016ions/cm2时,注银热解碳对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌率接近100%。RBS和XPS分析结果表明,银离子注入到热解碳表层,且浓度随注入剂量的增大而增加,富银的表面层起到抑菌和杀菌作用。

医用脲酶菌的分离与选育

从尿毒症病人肠道中分离出一株脲酶菌,经鉴定为Enterobactergergoviae.纯化菌株经驯化后能以尿素为惟一氮源.经紫外线及硫酸二乙酯诱变处理后,其脲酶活性提高约180%.用非降解性高分子材料聚乙烯醇将该菌包埋在具有半透膜性质的微胶囊内,体外模拟尿毒症病人血清试验表明,250mg湿菌在8h内清除尿素约50mg.

1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基-吡唑啉酮-5(HPMBP)缩氨基酸乙酯的合成、表征及抑菌活性

用1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基-吡唑啉酮-5(HPMBP)和2种氨基酸酯合成了2个HPMBP缩氨基酸乙酯化合物,采用核磁共振、红外光谱、元素分析等方法对配体的结构进行了表征,并对其生物活性进行了测试,结果显示该化合物对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌(S.Aureus)和革兰氏阴性大肠杆菌(E.Coli)均有一定的抑制作用.

医用脲酶菌的固定化比较研究

以聚乙烯醇为载体,分别通过化学法与物理法对医用脲酶菌进行包埋,并比较了2种方法所制备微球的性能及血清尿素清除活性.化学法采用硼酸交联,当调节硼酸pH至6.5时所得固定化微球比未调硼酸pH(4.0)的微球有较高的机械强度及尿素吸收活性;物理法采用冷冻交联,所得微球粒径均一,机械强度较好,冷冻交联微球吸收尿素的活性与未调pH(4.0)的硼酸交联微球接近,而略低于pH 6.5硼酸交联微球.体外尿毒症模拟血清尿素清除试验表明,化学法硼酸(pH 6.5)交联的固定化脲酶菌尿素吸收活性最高,8h尿素清除率达97%,若经培养液预培养24h,则尿素吸收活性明显增加,6h清除率为97.2%.

PCR-Targeting体系构建棒状链霉菌基因突变株

棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)可产生多种β-内酰胺类化合物,其中包括克拉维酸。利用聚合酶链式反应(PCR)-Targeting体系构建棒状链霉菌突变株是获得克拉维酸高产菌株的又一可行方法。采用该体系对棒状链霉菌的lat基因进行了敲除,获得了没有抗性标记的lat基因被敲除的突变株S.clavuligerus lat::scar,其克拉维酸产量是出发菌株的2.8倍。由于最终构建的突变株没有抗性标记,因此可以将该方法应用于突变棒状链霉菌的其他基因,实现用一种抗性标记突变同一菌株不同基因的目的,为链霉菌的基因突变提供了又一种有效的方法。

建立生物本科必修课实验耗材数据库的初步探索

生物实验耗材种类多、数目广,而建立实验耗材数据库是进行实验耗材管理的基础,是达到零库存管理的有效途径,是教学、科研顺利进行的基本保证。首先以各门必修课为基础,建立一级子数据库;然后以各实验分室为单位建立二级子数据库;最终以实验中心为单位建立实验耗材总数据库。我们的最终目的是耗材数据库可以与采购公司的数据库联网,利用网上平台进行交易结算,通过物流公司进行配送,最终实现实验耗材的电子化零库存管理。

水解淀粉对运动发酵单胞菌酒精发酵的影响

工业水解淀粉用于运动发酵单胞菌的酒精发酵，其结果与１５％和２０％葡萄糖的发酵结果相近似，酒精终浓度可达９％，发酵周期为７０ｈ，发酵过程中，以２４～４８ｈ期间内产酒精速度最快。

扩增ccaR基因提高棒状链霉菌克拉维酸产量的研究

在棒状链霉菌B71-14中扩增对克拉维酸具有正调控作用的基因ccaR,构建了ccaR的重组质粒pSET152-ccaR,通过接合转移将重组质粒pSET152-ccaR转入了S.clavuligerus B71-14中,通过pSET152-ccaR中的attP位点整个质粒插入到S.clavuligerus B71-14基因组中的attB位点,实现了S.clavuligerus B71-14基因组DNA中增加一个拷贝ccaR基因的目的,所得突变株S.clavuligerus::ccaR产酸量可达820.91mg/L,较出发菌株提高了54%.

青蛤(Cyclina sinensis)IRAK-4基因的克隆及其组织间的表达分析

利用转录组测序获得了青蛤(Cyclina sinensis)白介素-1受体相关激酶-4(Interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4)基因的序列信息,利用巢式及荧光定量PCR克隆并分析了Cs IRAK-4基因在青蛤各组织中的表达情况,进一步在鳗弧菌的胁迫下检测了Cs IRAK-4基因在青蛤血淋巴中的时序表达情况。结果显示,Cs IRAK-4基因的序列全长共2 687 bp,其开放阅读框长1 926 bp,共编码641个氨基酸,Cs IRAK-4基因在青蛤的血淋巴、肝脏、外套膜、闭壳肌、性腺和鳃中均表达,其中在血淋巴中表达量最高,肝脏中表达量最低。青蛤在鳗弧菌胁迫下该基因的表达量在3 h即达到最大值,与对照组差异极显著(P<0.01),证明该基因所表达的产物是青蛤重要的免疫信号通路蛋白。

植酸酶分泌菌株的筛选研究

利用涂平板法从土样中筛选出了3株能分泌植酸酶和淀粉酶的芽孢杆菌(Bacillus)菌株.此菌株接种在植酸酶检测培养基上,37℃恒温下培养86 h时,植酸水解圈最大;接种在淀粉酶检测培养基上,37℃恒温下培养24 h后,淀粉水解圈最大.

牙鲆(Paralichthys olivaceus)TLR21基因在迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染后的表达特征

应用荧光定量PCR技术,检测了TLR21基因在牙鲆(Paralichthys olivaceus)感染迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)后,在0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、6 d后,在心脏、肝脏、脾脏、头肾、鳃、小肠、肌肉和血的时空表达特征,并探讨了它们与牙鲆先天免疫反应的关系。结果表明,大多组织在感染病原6 h后TLR21基因表达明显上调,尤其是头肾和小肠。头肾6 h的表达量达到了对照组的59.3倍,小肠6 h的表达量为对照组的38.6倍。迟缓爱德华氏菌感染引起牙鲆体内各组织中TLR21的上调表达和变化,为研究牙鲆对迟缓爱德华氏菌的防御机制提供了理论依据。

迟缓型爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)诱导牙鲆(Paralichthys olivaceus)TLR1及TLR2基因的表达分析

Toll样受体是一类重要的蛋白质分子,参与固有免疫系统,在哺乳动物在受到细菌感染的时候,TLR1和TLR2基因可以形成异源二聚体,进而启动宿主的固有免疫。本文应用实时荧光定量PCR的技术,检测了TLR1和TLR2基因在牙鲆健康组织以及牙鲆腹腔注射迟缓型爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)后各组织中的表达变化,并探讨了它们与牙鲆(Paralichthys olivaceus)固有免疫反应的关系。结果表明,TLR1和TLR2基因广泛表达于健康牙鲆的各种组织中,其中,TLR1在脾脏组织中表达量最高,其次是心脏、肌肉;TLR2在小肠组织中表达量最高,其次是肝脏、心脏。免疫刺激实验表明,多数组织在感染病原6h后TLR1基因表达达到峰值,其中脾脏中基因的表达量最大,是0时间点的290倍(P<0.01)。TLR2基因在感染病原1h后在脾脏中表达量最高,为0时间点的17.8倍(P<0.01),在感染病原1d后心脏组织中基因的表达量为对照组的14倍(P<0.01),其余时间点表达变化不明显。结果表明TLR1和TLR2参与了牙鲆对迟缓型爱德华氏菌的免疫应答反应。实验结果还显示,在牙鲆感染迟缓型爱德华氏菌后,MyD88、TNF-α和IL-1基因的表达也都同步上调,暗示迟缓型爱德华氏菌有可能通过TLR1通路上调MyD88的表达,并最终导致炎症因子TNF-α和IL-1的基因表达上调,以应答病原菌的感染。

迟缓爱德华氏菌刺激对牙鲆转录组差异基因表达的影响

为了研究迟缓爱德华氏菌刺激下牙鲆基因表达作出的响应,采用高通量测序平台(Illumina HiSeq)分别对迟缓爱德华氏菌刺激的牙鲆和未受刺激牙鲆的肾脏进行转录组测序,并对差异基因进行生物信息学分析,包括GO(基因功能注释)、SNP(单核苷酸多态性)分析、SSR(简单重复序列)分析等.结果表明,用Trinity软件对clean reads进行拼接后,聚类得到222 980条转录本,总长200 234 420 bp,平均长度898 bp,N50为1 886 bp.对组装的序列进行基因功能注释后,有99 808条序列得到了注释.筛选出2 502个差异表达比较显著的基因,表达量上调的有1 280个,下调的有1 222个.GOseq结果显示差异基因显著富集在38个GO terms上,包括6个细胞组分、12个生物学过程和20个分子功能.差异基因共获得277个KEGG通路富集,627个差异基因显著富集到20条信号通路上,其中,8个与信号通路有关,3个与发育有关,9个与相关疾病有关.

注银热解碳的抗菌机理研究

使用革兰氏阳性菌——金黄色葡萄球菌,对注银热解碳的抗菌机理作了探讨分析.银离子的注入能量为70 keV,注入剂量分别为5×1014,1×1016,5×1017ion/cm2.用俄歇电子能谱(AES)和X射线光电子能谱(XPS)对样品表面进行了微观分析.结果表明:材料表面形成了富银层;对注银剂量相同的热解碳,直接接触的抗菌效果比其滤液的抗菌效果好.说明注银热解碳的抗菌作用是溶出的银离子和未溶出的材料表面络合状银离子的共同抗菌结果,且杀菌以银离子溶出为主.