沈阳工业大学数字校园建设之路

数字校园建设是助力教育数字化进程的重要手段之一。教育部在《高等学校数字校园建设规范(试行)》中明确指出,高等学校在数字校园建设中,应将信息资源建设放在关键位置,逐步形成内容完善、数据准确、组织有序、广泛关联、更新及时、安全可靠、服务优质的全域信息资源库,为学校发展、师生用户以及社会公众提供优质信息服务。由此可见,数据在数字校园建设过程中起到的关键作用和重要性。

区域智慧教育示范校建设思路

随着大数据、云计算、物联网、5G、人工智能等新一代信息技术的快速发展,国家也在加快推进教育数字化进程,不断推动教育变革和创新,“智慧教育示范区(校)”建设是近年来以信息化促进教育现代化的有力手段之一。

基于HPLC-Q-Exactive-MS技术定性分析冠心七味片的化学成分

目的采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)技术对冠心七味片的主要成分进行快速、全面的定性分析。方法采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.5%甲酸水(B),流速为1.0 mL·min-1,柱温35℃,进样量10μL,质谱采用正、负离子扫描模式,扫描范围m/z 110~1200。基于化合物的精确质荷比、二级质谱裂解碎片,结合自建数据库比对所含成分进行分析鉴定。结果在冠心七味片中共鉴定出67个化合物,包括30个黄酮类、18个有机酸类、8个萜类、5个木脂素类、4个香豆素类、2个其他类化合物。结论该HPLC-Q-Exactive-MS方法能够对冠心七味片化学成分进行全面、快速定性分析,为其质量控制、药效物质基础研究提供基础。

新零售时代企业定价能力评价与提升策略研究

新零售时代,企业依托互联网,运用大数据、人工智能等先进的手段和方法,改进商品的生产、销售、流通等各个环节,进而重塑业态结构。如何在新零售时代有效识别自身的定价能力,并在激烈竞争的市场环境下提升自身的定价能力,是当前很多企业面临的主要难题。本文以定价能力影响因素的六个维度为基础,建立了企业定价能力评价体系,分析企业定价能力及其驱动因素,为企业提供新零售背景下提升定价能力的相关策略和建议。

沙美特罗替卡松吸入粉雾剂与布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂治疗儿童支气管哮喘的临床综合评价

目的:评价沙美特罗替卡松吸入粉雾剂与布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂治疗儿童支气管哮喘的临床综合价值,为医院药品遴选及临床用药决策提供参考。方法:检索国内外文献数据库,纳入随机对照试验,开展有效性及安全性评价;回顾性分析某三甲医院儿童支气管哮喘患儿直接医疗成本数据,开展经济性评价;通过问卷调研及搜集相关药品采购及销售数据、药品说明书,开展创新性、适宜性及可及性评价。结果:共检索出326篇文献,最终纳入3篇,共298例患者,其中干预组(沙美特罗替卡松吸入粉雾剂)148例,对照组(布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂)150例。Meta分析结果显示,沙美特罗替卡松吸入粉雾剂与布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂治疗儿童支气管哮喘后的不良反应发生率比较无统计学差异[OR=1.03,95%CI(0.62,1.73),P=0.91];沙美特罗替卡松吸入粉雾剂治疗后有效率低于布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂[OR=0.49,95%CI(0.25,0.97),P=0.04]。经济性评价结果显示,沙美特罗替卡松吸入粉雾剂治疗儿童支气管哮喘较布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂不具有经济性。共回收问卷52份,结果显示,沙美特罗替卡松吸入粉雾剂与布地奈德福莫特罗吸入粉雾剂相比不具有明显的创新性、适宜性和可及性。结论:沙美特罗替卡松吸入粉雾剂治疗儿童支气管哮喘临床价值较低,且其未纳入《国家基本药物目录》,不具有临床优势。

内蒙古通辽市肉犊牛3种主要咳喘病病原感染调查

为了解通辽市犊牛咳喘病主要病原牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的感染情况,对7个旗县区213家养殖场户的产犊及咳喘发病情况进行了调查,采集400份咳喘犊牛血清样品进行了ELISA抗体检测。结果显示:犊牛咳喘病病原感染率为10.21%,IBRV、BVDV和Pm的抗体阳性率分别为26.50%、19.25%、33.50%;不同旗县区的IBRV、BVDV和Pm抗体阳性率分别为8.33%~41.79%、10.26%~32.26%和17.95%~46.77%;IBRV在秋、冬两季抗体阳性率较高,分别为32.22%和30.08%,BVDV在春、冬两季抗体阳性率较高,分别为19.72%和22.56%,Pm在秋、冬两季抗体阳性率较高,分别为36.67%和39.85%;单一感染率为41.00%,混合感染率为18.00%,其中二重感染率为15.75%,以IBRV+Pm混合感染为主,三重感染率为2.25%。结果表明:IBRV、BVDV、Pm是导致犊牛咳喘病的重要病原,其流行呈现地区和季节性差异。建议养殖场户根据本地区病原的流行情况和季节特征,对犊牛咳喘病进行科学合理防控。

氯化两面针碱通过Wnt/mTOR信号通路缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低

【目的】探究氯化两面针碱(Nitidine chloride,NitC)对热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的影响,为实际生产中缓解热应激对水牛乳品质的负面影响提供理论依据。【方法】记录非热应激季节和热应激季节牛舍温湿度指数(Temperature-humidity index,THI),检测水牛呼吸频率和直肠温度以判断水牛是否处于热应激状态;采集奶样进行乳成分分析以探究热应激对水牛奶β-酪蛋白含量的影响;以水牛乳腺上皮细胞为研究对象,经40.5℃处理24 h建立细胞热应激模型,使用LiCl和LGK974分别激活和抑制Wnt通路,检测水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的表达水平,探究氯化两面针碱缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的作用机制。【结果】与非热应激季节相比,热应激季节牛舍THI升高并超过水牛热应激阈值,水牛呼吸频率和直肠温度显著升高(P<0.05,下同),水牛奶β-酪蛋白含量显著降低;细胞试验结果表明,40.5℃处理24 h能显著降低水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量;而氯化两面针碱处理能有效缓解热应激对水牛乳腺上皮细胞的影响,显著提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量。【结论】热应激降低了水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的相对表达量,氯化两面针碱则通过Wnt/mTOR信号通路提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量,以缓解热应激造成的水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低。

相思子碱通过P53/mTOR通路缓解脂多糖对水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成的影响

【目的】探究相思子碱(Abrine)通过调节P53/mTOR通路缓解脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对水牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成的影响,为缓解乳房炎引起的水牛乳品质下降提供理论依据。【方法】使用脂多糖构建水牛乳腺上皮细胞炎症模型,同时使用相思子碱、P53抑制剂(Pifithrin-μ)、P53激活剂(Kevetrin hydrochloride)与水牛乳腺上皮细胞共同孵育12 h;通过HE染色观察水牛乳腺组织形态,采用CCK-8法检测细胞活性,使用ELISA试剂盒检测水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白分泌水平,利用实时荧光定量PCR测定NF-κB、IL-1β、TNFα、β-casein、mTOR、P53、JAK2、STAT5和AKT1基因相对表达量,并以Western blotting检测NF-κB、IL-1β、TNFα、β-casein、mTOR和P53蛋白相对表达量。【结果】临床型乳房炎乳腺组织间隙及腺泡腔被大量中性粒细胞浸润,部分腺泡结构呈现一定程度的萎缩。经1.0μg/mL脂多糖处理,水牛乳腺上皮细胞活力显著降低(P<0.05,下同),2.0、4.0和8.0μg/mL脂多糖处理,水牛乳腺上皮细胞活力极显著降低(P<0.001),25、50、100和200μmol/L相思子碱处理能缓解脂多糖的影响,水牛乳腺上皮细胞活力明显升高。与空白对照组相比,脂多糖处理组水牛乳腺上皮细胞NF-κB、IL-1β、TNFα和P53基因和蛋白相对表达量显著升高,β-酪蛋白表达水平显著降低;与脂多糖组相比,相思子碱+脂多糖处理组水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白水平显著升高,NF-κB、IL-1β、TNFα、P53基因和蛋白相对表达量显著降低;与脂多糖组相比,脂多糖+Pifithrin-μ组水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达水平显著升高,与相思子碱组相比,相思子碱+Kevetrin hydrochloride组水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达水平显著降低。【结论】脂多糖降低了水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成水平与β-酪蛋白合成相关基因及其编码蛋白的表达水平;相思子碱能通过抑制NF-κB通路缓解脂多糖诱导的水牛乳腺上皮细胞炎症,并通过调节P53/mTOR通路缓解脂多糖诱导的水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白合成减少。

肉桂醛微胶囊在紫米防霉保鲜中的应用

为对比常见天然植物提取物对紫米优势霉菌的抗菌性能,并探究其在紫米储藏中的应用,本研究分离和纯化发霉紫米中的霉菌,通过显微镜镜检和分子生物学鉴定确定优势霉菌。以此为基础,研究柠檬醛、肉桂醛、对茴香醛、茶多酚、百里香酚、丁香酚六种天然植物提取物对紫米优势霉菌的抑菌性能,选择抑菌性能最好的天然植物提取物并测定其对优势霉菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)及最小杀菌浓度(Minimum Bacterial Concentration,MBC)。然后,通过正交试验优化得到肉桂醛微胶囊最佳制备工艺,将制得的微胶囊干燥后包装于无纺布袋中并应用于35℃紫米加速储藏试验。最后,以水分、霉菌含量、气味、色差等作为紫米新鲜度的指标,评价肉桂醛微胶囊对紫米的保鲜效果。结果表明:发霉紫米优势霉菌为Aspergillus versicolor(杂色曲霉)、Aspergillus chevalieri(谢瓦曲霉)、Cladosporium tenuissimum(细枝孢霉)、Aspergillus candidus(亮白曲霉)、Rhizomucor pusillus(微小根毛霉),肉桂醛对上述霉菌抑制效果最佳,并且测得其MIC分别为2、1、1、2、1 mg/mL;MBC分别为4、8、4、16、4 mg/mL。肉桂醛微胶囊最佳制备工艺为:海藻酸钠的浓度为3%,氯化钙的浓度为1%,壁芯比为12:1,造粒液面距离为25 cm,该工艺制得的肉桂醛微胶囊的包埋率为96.67%,载油率为61.27%。肉桂醛微胶囊使紫米的各项新鲜度指标均优于空白对照组,说明所制备的肉桂醛微胶囊对紫米保鲜有积极作用。

三师图木舒克市总工会开展普法宣传

5月17日,三师图木舒克市总工会开展“民法典宣传月暨优化法治化营商环境”普法宣传活动。活动现场,悬挂着浅显易懂的民法典宣传横幅,法律咨询台前排起了长长的队伍,工作人员为职工群众发放宣传折页、宣传新《工会法》《女职工劳动保护特别规定》,并用通俗易懂的语言向职工群众宣传《民法典》出台的意义,解读着民法典中涉及合同、劳资纠纷、侵权责任等群众关心的内容,吸引了广大职工群众认真聆听。

编辑在推动传统媒体改革中的作用

新媒体的兴起给传统媒体带来了一些挑战,为了保持竞争力,传统媒体必须采纳新技术,改变信息传播的方式,而在这个过程中,编辑的作用很重要。本文利用定性研究方法,通过对10家进行融媒体改革的传统媒体机构的深度访谈与内容分析,揭示了编辑在内容生产、平台策略和用户互动中的创新实践和挑战。结果表明,编辑在融媒体环境下需要具备多元的技能,不断更新媒体的内容理念,发挥聚合各类媒体资源的作用,推动媒体形态从单一到多样的演变。同时,他们在整合各类媒介平台、优化用户体验和实现内容的最大化传播中扮演着至关重要的角色。

基于医院药房药学的综合干预对2型糖尿病患者血糖控制与不良反应的改善作用评价

研究医院药房药学干预对2型糖尿病患者血糖水平的影响。方法 随机选取一段时期内在我院接受治疗的200例2型糖尿病患者,对照组采取常规药物管理,观察组采取基于医院药房药学的综合干预,对比两组治疗情况。结果 观察组患者的血糖水平改善更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 基于医院药房药学的综合干预能够针对过往存在的2型糖尿病患者用药风险进行精准优化,减少长期服药的风险,这也对构建和谐的医患关系具有积极意义。

浅析融媒体生态下新媒体编辑创新思维与实践能力提升的路径

融媒体生态下,新媒体编辑面临信息爆炸和媒介融合的双重挑战。本文采用文献分析和实证调查的方法,分析了新媒 体编辑角色的转变和创新思维的必要性,然后提出了新媒体编辑应具备的创新思维与能力,最后总结了新媒体编辑的实践 路径。研究表明,新媒体编辑的创新思维与实践能力的提升,对推动媒体行业的持续发展具有一定的意义和作用。

探究新会计制度对企业财会工作的影响

2019年,我国颁布了新会计制度,旨在推动企业财会工作与国际财会工作接轨,促进企业的国际化发展。鉴于此,企业要积极响应国家财政政策,在财会工作中主动落实新会计制度,检验新制度的应用成果,推动自身的国际化发展。本文首先简述了新会计制度,并主要分析新会计制度对企业财会工作造成的影响。新会计制度的实施,有效提高了企业信息的公开度、会计工作人员的工作谨慎性,促使企业成本核算更加标准。最后从健全财会工作制度、细化会计科目及财务报表等方面,重点探究了企业落实新会计制度、优化财会工作的一系列措施,从而为企业财会人员提供一定的工作参考,并有效提高企业财会工作的质量。

高血压脑出血血肿清除术后并发脑梗死影响因素分析

目的:分析高血压脑出血血肿清除术后并发脑梗死影响因素,方法:选取我院于2022年1月到2023年12月时间段内,共有67位接受血肿清除术治疗的高血压脑出血患者被纳入本次研究范畴。研究组为脑梗死组27例,对照组为无脑梗死组40例,结果:两组性别、年龄、血糖水平比较,不具有统计学意义(P>0.05),两组高血压病史及收缩压和舒张压的差异均在统计学上具有意义(P<0.05),两组术后血肿量、水肿及脑组织移位比较,具有统计学意义(P<0.05),经过Logistic回归分析,发现高血压病史、收缩压和舒张压的上升,以及血肿量的增大,均为术后并发脑梗死风险增加的关键因素(P<0.05)。结论:高血压脑出血血肿清除术后并发脑梗死与高血压病史、收缩压、舒张压以及术后血肿量等存在密切关系,临床应针对上述因素进行针对性干预。

基于网络药理学探讨宣肺清热方治疗COVID-19的分子机制

目的 基于网络药理学探讨宣肺清热方治疗新型冠状病毒感染(COVID-19)的潜在作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库获取宣肺清热方的活性成分及相关作用靶点;通过基因卡片(GeneCards)、在线《人类孟德尔遗传》(OMIM)、药物银行(DrugBank)数据库获取COVID-19的主要作用靶点;获得宣肺清热方与COVID-19共同靶点并制作韦恩图(Venn Diagram);利用基因/蛋白质互相作用检索分析工具(STRING)进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,构建PPI网络;通过Metascape平台进行基因本体论(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,采用Cytoscape 3.9.0软件构建“宣肺清热方-活性成分-共同靶点-COVID-19-信号通路”网络。结果 经筛选后获得宣肺清热方活性成分121个、靶点232个,COVID-19靶点2 255个及药物-疾病共同靶点68个,度值(Degree)最大的10个活性成分为槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇、豆甾醇、柚皮素、异鼠李素、汉黄芩素、黄芩素和光甘草定,GO及KEGG富集分析结果主要涉及炎症-免疫调节、胞内信号转导、基因调控等多种生物学途径以及癌症通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、钙信号通路、p53信号通路、过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)信号通路等。共同靶点根据度值排名,前10位是雄激素受体(AR)、一氧化氮合酶2(NOS2)、电压门控钠通道5α(SCN5A)、RELA、蛋白激酶B(AKT)1、B淋巴细胞瘤2(BCL2)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)、核因子κB抑制剂α(NFKBIA)、白细胞介素-6(IL-6)。结论 宣肺清热方中主要化学成分可能作用于多靶点多通路介导炎症-免疫调节等生物学过程,发挥治疗COVID-19的作用。

抑制BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响

【目的】探究BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响。【方法】利用脂质体转染的方法将合成的Smad 4基因的3对siRNAs(Smad4-siRNA1、Smad4-siRNA2和Smad4-siRNA3)和NC-siRNA(对照组)分别转染水牛颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测Smad 4基因的表达水平,比较不同siRNA的干扰效率。然后利用筛选的干扰效率最高的siRNA,转染水牛卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测对照组和干扰组细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR检测上述两组细胞凋亡相关基因Bax和Bcl2,细胞周期相关调控基因CyclinD2和CDK4,以及类固醇激素合成相关基因Cyp19A1和Cyp11A1的表达水平,并通过ELISA检测雌二醇(E 2)和孕酮(P 4)的含量。【结果】基因干扰试验结果表明,3对siRNAs对Smad4基因的表达均具有极显著的干扰作用(P<0.01),其中Smad4-siRNA1的干扰效率最高,达到了64%。CCK-8检测结果显示,与对照组相比,干扰组细胞的增殖效率显著降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,干扰组Bcl2、CyclinD2、CDK4和Cyp19A1基因的表达量均显著或极显著下调(P<0.05;P<0.01),而Cyp11A1基因的表达极显著上调(P<0.01),Bax基因的表达未受影响。ELISA检测结果表明,与对照组相比,干扰组雌二醇分泌量减少10.2%,孕酮的分泌量增加24.7%,差异均显著(P<0.05)。【结论】通过RNAi介导的Smad 4基因沉默对内源性BMP/Smad信号通路的中断不仅能够显著抑制水牛颗粒细胞的生长,而且能够诱导水牛颗粒细胞的凋亡,还会改变类固醇激素生成。BMP/Smad信号通路在调控水牛颗粒细胞生长和类固醇生成过程中具有重要的作用。

α-亚麻酸对水牛卵巢颗粒细胞体外培养的影响

【目的】研究α-亚麻酸(ALA)对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中细胞活力、细胞凋亡、细胞周期相关基因表达及激素分泌功能的影响。【方法】为了筛选体外培养水牛卵巢颗粒细胞ALA最适浓度,在96孔板中加入起始细胞数量为1×104/mL的水牛卵巢颗粒细胞,细胞贴壁12 h后更换含0(对照组)、10、50、100、200μmol/L ALA的培养液,在相同条件下处理24 h,用CCK-8进行细胞活力检测,筛选出最适处理浓度,并用于后续试验。后续试验分为对照组(0μmol/L)和处理组(50μmol/L)两组,用实时荧光定量PCR检测颗粒细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1(p21)和增殖细胞核抗原(PCNA)基因的相对表达量,用免疫荧光对颗粒细胞中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和细胞周期相关蛋白p21进行荧光检测和定量分析,用ELISA法检测培养液中水牛颗粒细胞分泌的雌二醇(E 2)和孕酮(P 4)含量。【结果】与对照组相比,水牛卵巢颗粒细胞经ALA处理24 h后,在10~50μmol/L范围内随着ALA浓度升高水牛卵巢颗粒细胞的细胞活力随之升高,处理浓度为50μmol/L时细胞活力相比对照组极显著提高(P<0.01),随着浓度继续增加,水牛卵巢颗粒细胞活力下降,200μmol/L时细胞活力极显著低于对照组(P<0.01),因此后续试验选用ALA的浓度为50μmol/L。与对照组相比,50μmol/L ALA处理后颗粒细胞中抗凋亡基因Bcl-2和增殖细胞核抗原基因PCNA相对表达量均无显著差异(P>0.05),但促凋亡基因Caspase-3和细胞周期基因p 21在mRNA和蛋白水平上的表达量均极显著降低(P<0.01),E 2和P 4水平显著或极显著增高(P<0.05;P<0.01)。【结论】培养液中添加50μmol/L ALA能够提升水牛卵巢颗粒细胞增殖活力、抗凋亡能力及激素分泌能力,本研究为调控水牛卵泡发育提供理论参考。

水牛SFRP 1基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

【目的】获取水牛分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因CDS区序列,并预测其编码蛋白的结构功能,构建SFRP 1基因真核表达载体,检测SFRP 1基因在水牛不同组织中的表达情况,为探索SFRP 1基因在水牛生长发育中的作用奠定基础。【方法】以水牛卵巢组织cDNA为模板,通过RT-PCR对SFRP 1基因CDS区序列进行扩增并测序,利用生物信息学在线分析软件对水牛SFRP 1基因与不同物种进行比对和系统进化树构建,并预测SFRP1蛋白理化性质、信号肽、跨膜结构等。将获得的目的基因连接至pCMV-HAhyPBase-mcheery载体并转染至水牛颗粒细胞,检测转染后荧光和基因表达情况。通过实时荧光定量PCR检测水牛不同组织中SFRP 1基因表达情况。【结果】水牛SFRP 1基因CDS区长927 bp,共编码308个氨基酸。多重序列比对结果显示,水牛SFRP 1基因氨基酸序列与黄牛、牦牛、山羊、虎鲸、黑猩猩、北极狐、猫、人、小鼠的相似性分别为100%、100%、99.65%、98.58%、98.23%、98.23%、98.58%、98.23%、96.45%,存在CRD_FZ、NTR_like和DUF3367结构域。水牛SFRP 1基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、山羊、牦牛、野牛、马鹿、野骆驼、猪、人的相似性分别为97.3%、95.9%、95.8%、94.5%、94.2%、93.7%、80.4%、78.5%和77.3%。系统进化树结果显示,水牛与黄牛、牦牛、野牛聚为一支。生物信息学分析结果显示,SFRP1蛋白呈碱性,为不稳定蛋白;第1—15位氨基酸处存在信号肽,为分泌型蛋白,存在跨膜结构,主要定位于细胞外;存在21个磷酸化位点和8个O-糖基化修饰位点。二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲构成;水牛、黄牛、人的SFRP1蛋白三级结构高度相似。成功构建pCMV-mcheery-SFRP1真核表达载体并转染水牛颗粒细胞,转染72 h后pCMV-mcheery-SFRP1重组质粒组细胞内SFRP 1基因表达量极显著高于对照组(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,SFRP 1基因在水牛不同组织中均有表达,且在脾脏中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。【结论】SFRP 1基因在不同物种以及遗传进化过程中具有高保守性,在水牛不同组织中广泛表达。研究结果为今后探究SFRP 1基因在水牛生长发育中的功能及分子机制奠定基础。

水牛DDR1基因生物信息学及细胞学功能分析

为了了解水牛DDR1蛋白的生物信息学和细胞学功能,试验采用ProtParam、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、PSORTⅡPredictio、NetPhos 3.1在线软件对水牛DDR1蛋白进行生物信息学分析,采用基因干扰的方法研究水牛DDR1基因对水牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡、基因表达和迁移的影响。结果表明:水牛DDR1蛋白由915个氨基酸组成,分子式为C_(4538)H_(7029)N_(1261)O_(1287)S_(43),分子量为101222.99 u,半衰期为30 h,理论等电点为6.22,属于酸性、不稳定、可溶性蛋白质。DDR1蛋白的二级结构由256个α-螺旋(27.98%)、175个延伸链(19.13%)、55个β-折叠(6.01%)、429个无规则卷曲(46.89%)构成。亚细胞定位于内质网(44.4%)、高尔基体(33.3%)和质膜中(22.2%)中。DDR1蛋白共含有65个磷酸化位点,其中丝氨酸磷酸化位点35个,苏氨酸磷酸化位点18个,酪氨酸磷酸化位点12个。DDR1基因的最佳干扰片段为siDDR1-1,最佳干扰时间为48 h。DDR1基因干扰72小时时可极显著抑制水牛乳腺上皮细胞的增殖(P<0.01)。DDR1基因干扰显著或极显著上调凋亡相关基因BCL-2(P<0.01)、XIAP(P<0.05)、TP53(P<0.01)和增殖相关基因CCND1(P<0.01)的表达,下调凋亡相关基因CASPASE3(P<0.05)和CCDB1(P>0.05)的表达,但对细胞凋亡率的影响不显著(P>0.05)。此外,DDR1基因干扰可极显著降低水牛乳腺上皮细胞的迁移率(P<0.01)。说明DDR1基因干扰可极显著影响水牛乳腺上皮细胞的增殖和迁移。