弓形虫鸡尾酒DNA疫苗的免疫保护作用研究

研究旨在构建弓形虫鸡尾酒DNA疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果。研究将编码弓形虫棒状体蛋白ROP5、ROP9和ROP17的基因分别构建至真核表达载体pVAX1上,获得重组真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9和pVAX1-ROP17,将上述质粒进行PCR和双酶切验证,并通过Western blot检测重组质粒在真核细胞中表达。将三种重组质粒按1∶1∶1的比例混合后,取100μg通过腿部肌肉注射免疫小鼠,加强免疫后,检测小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖及细胞因子水平,并接种弓形虫RH强毒株进行攻毒,评价免疫后小鼠的保护效果。真核表达质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP9和pVAX1-ROP17经PCR和双酶切验证的结果显示:分别在1686bp、1128bp和1836 bp处出现特异性目的条带;Westernblot检测结果发现,在约为62、41和68kDa处出现目的条带,分别与预期目的蛋白ROP5、ROP9和ROP17的分子量大小相符。与空载体组和生理盐水组小鼠相比,疫苗免疫组小鼠产生的血清中抗体IgG和淋巴细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-6水平、脾脏淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)均极显著升高(P<0.01),且接种弓形虫RH强毒株后,免疫组小鼠的存活时间(16.1±2.07)比对照组小鼠存活时间(9.2±0.74或9.0±0.77)极显著延长(P<0.01)。研究结果表明,成功构建的弓形虫鸡尾酒DNA疫苗pAX1-ROP5/ROP9/ROP17能激发小鼠的体液免疫反应和细胞免疫反应,并增强小鼠对弓形虫感染的抵抗能力。研究结果为弓形虫新型疫苗研制提供借鉴和参考。

BMSCs联合髓芯减压对犬股骨头内CD34和OCN表达的影响

本试验通过免疫组化方法检测CD34和OCN的表达情况,初步探讨BM SCs联合髓芯减压治疗犬早期股骨头坏死的可能机制.随机挑选6条健康试验犬为正常组(A组),再选取建立犬早期股骨头坏死模型的18条试验犬随机分为3组,即模型空白治疗组(B组)、髓芯减压术组(C组)、BM SCs联合髓芯减压组(D组);在行髓芯减压术后第2周和第4周后,通过免疫组织化学方法比较4组试验犬股骨头内CD34和OCN的积分光密度值(IOD).B组CD34的IOD在术后2周和4周与A组比较均极显著降低(P<0.01);D组在第2周和第4周均显著高于A组、B组和C组(P<0.05),C组CD34的IOD在第4周时显著低于A组(P<0.05).B组OCN的IOD在术后2周和4周与A组比较均极显著降低(P<0.01),D组OCN的IOD值在术后第4周与正常组和髓芯减压组比较均极显著升高(P<0.01),髓芯减压组在术后第4周显著升高(P<0.05).与B组相比,C组和D组在术后2周和4周均极显著升高(P<0.01).结论:BMSCs联合髓芯减压能提高犬早期股骨头坏死模型内CD34和OCN的表达,推测该方法可能通过恢复造血组织和重建骨质来治疗犬早期股骨头坏死.