对肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的对临床分离肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶情况以及不同产酶模式进行耐药性分析。方法采用法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪对临床分离菌株进行鉴定及药敏检测。超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,采用美国临床实验室标准化协会推荐的纸片表型确证试验。头孢菌素酶(AmpC)的检测,采用头孢西丁纸片琼脂法筛选,筛选阳性菌株再经改良三维试验确证为AmpC阳性菌株。结果137株肺炎克雷伯菌中ESBLs和AmpC的阳性率为37.2%和8.8%,其中ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌产AmpC的阳性率为58.3%。产ESBLs的菌株对头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟及安曲南的耐药率均为100%,此外,AmpC阳性菌株对头孢替坦的耐药率为41.7%。二者对亚胺培南及厄它培南耐药率最低,均为0%。结论β-内酰胺酶的产生是肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因,碳青霉烯类抗生素仍然是产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的有效抗生素。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因型的检测分析

目的：针对该院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒型 AmpC 酶基因型进行研究分析。方法收集2011年7月至2012年8月对头孢西丁不敏感无重复临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共176株，采用聚合酶链反应（PCR）法和扩增全基因序列分析大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产 AmpC 酶基因型。结果 PCR 结果显示，AmpC 酶基因（ampC 基因）阳性率为18．2％主要以 DHA 型为主，阳性率为59．4％，CIT 型为37．5％，EBC 为3．1％；其中，大肠埃希菌 ampC 基因阳性率为11．4％，以CIT 型为主，阳性率为77．8％，DHA 型和 EBC 型阳性率均为11．1％；肺炎克雷伯菌 ampC 基因阳性率为23．7％，以 DHA 型为主，阳性率为78．3％，CIT 型为21．7％。基因序列结果显示，DHA 型有18株为 DHA‐1基因型和1株摩根摩根菌 ampC 基因型，一致率97．0％，CIT 型有10株为 CMY‐2基因型，1株 CMY‐42基因型和1株 CMY‐4基因型；EBC 型为阴沟肠杆菌 ampC 基因型，一致率为99．0％。将32株基因序列提交 GenBank ，均被接受，其登录号为 KJ127248～ KJ127279。结论该院临床分离大肠埃希菌 ampC 基因主要以 CMY‐2型为主，而肺炎克雷伯菌主要以 DHA‐1型为主。

2005-2006年医院常见革兰阴性杆菌的分布与耐药性分析

目的了解医院常见临床分离革兰阴性杆菌的分布情况及耐药现状,为临床医生合理使用抗菌药物治疗感染性疾病提供依据。方法收集2005年1月-2006年12月临床各科送检标本,采用美国德灵MicroScan Walk Away-40全自动微生物分析仪同时进行菌株鉴定与药敏测定。结果共分离出3种常见革兰阴性杆菌2024株,其中大肠埃希菌807株、肺炎克雷伯菌737株、铜绿假单胞菌480株;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药率最低,分别为2.2%和2.7%,其次是哌拉西林/他唑巴坦,分别为2.9%和7.6%;铜绿假单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率最低,为10.2%,对亚胺培南的耐药率为14.0%;三者对阿米卡星的耐药率均较低,分别为11.0%、13.3%和15.0%。结论3种常见革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药性呈上升趋势,加强医院感染病原菌的耐药性监测,对合理使用抗菌药物及减缓多药耐药菌的产生尤为重要,目前,亚胺培南仍是治疗医院革兰阴性杆菌感染最有效的抗菌药物之一。

双纸片抑制增效试验在AmpC酶检测中应用分析

目的探讨分析双纸片抑制增效试验在肺炎克雷伯菌产AmpC酶的检测应用,评价该方法在临床实验室的应用价值。方法采用头孢西丁纸片法,头孢西丁三维试验,双纸片抑制增效试验,以及耐药基因多重PCR技术对临床分离菌株进行检测。结果 137株临床分离肺炎克雷伯菌中,对头孢西丁不敏感的菌株共有22株,头孢西丁三维试验阳性有11株;双纸片抑制增效试验FOX/FOX+PBA双纸片组中阳性有18株,CTT/CTT+PBA双纸片组中阳性有11株;多重PCR技术检测阳性有19株。头孢西丁三维试验阳性结果与PCR结果符合率为47.4%(9/19),双纸片抑制增效试验中,CTT/CTT+PBA双纸片组阳性结果与PCR结果符合率为57.9%(11/19);FOX/FOX+PBA双纸片组阳性结果与PCR结果符合率为94.7%(18/19)。结论双纸片抑制增效试验,其方法简便,结果准确性高,其中FOX/FOX+PBA双纸片组可应用于临床分离肺炎克雷伯菌产AmpC酶的检测。

医院感染肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的分布差异及耐药分析

目的比较分析临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌之间的差异性,包括敏感性、标本类型分离和科室分布情况等,及时充分了解当前这两种主要病原菌耐药情况。方法采用法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对菌株进行细菌鉴定和药物敏感性检测,并用Excel软件进行数据分析。结果2020年临床分离大肠埃希菌1614株,肺炎克雷伯菌579株,大肠埃希菌尿液分离菌株占一半以上,而肺炎克雷伯菌不同标本分离菌株相差不大;呼吸道标本肺炎克雷伯菌分离数量大于大肠埃希菌;重症加强护理病房(ICU)中两者分离菌株相差不大,而其它科室分离相差较大;两者产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株检出率比较,差异有统计学意义(P<0.05),ESBLs(-)菌株检出率比较,差异无统计学意义(P>0.5)。大肠埃希菌对亚胺培南的敏感率为98.9%,而肺炎克雷伯菌为82.4%,尤其在ICU,其敏感率低至59.5%。痰液分离肺炎克雷伯菌对亚胺培南的敏感率为64.8%。102株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌中有4株对氨曲南敏感,而17株耐亚胺培南大肠埃希菌中对有10株氨曲南敏感。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均出现对碳青霉烯类抗菌药物耐药菌株,尤其是肺炎克雷伯菌上升明显,而且两者产碳青霉烯酶的类型有所区别。肺炎克雷伯菌对大多数抗菌药物敏感性比大肠埃希菌低,除左氧氟沙星相对较好;ICU耐药问题尤其严重,全血分离菌株敏感性较好,而痰液分离菌株敏感性较差。

2020年医院感染大肠埃希菌耐药性差异化分析

目的 回顾性分析临床分离大肠埃希菌的耐药性,比较不同来源分离临床菌株耐药性差异性,更精准全面了解该菌耐药性,为临床合理有药提供有效参考。方法 回顾性分析2020年临床分离大肠埃希菌,采用法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对菌株进行细菌鉴定和药物敏感性检测,并用Excel软件进行数据分析。结果 2020年临床分离的大肠埃希菌1 614株,其中尿液标本分离最多(58.7%),依次是体液(包括胆汁、腹水、胸腔积液、关节液等)、全血和痰液;科室来源门急诊分离最多(30.3%),ICU分离相对不多(8.2%);产ESBLs菌株710株占44.0%,不产ESBLs菌株890株占55.1%,其余有14株占0.9%;ICU产ESBLs菌株阳性率最高(58.7%),全血分离菌株产ESBLs较低(38.8%),大肠埃希菌仍保持对亚胺培南极高敏感性,敏感率在98.9%(1 597/1 614),从标本来源,除了全血未分离耐碳青霉烯类菌株,其他标本均可检出,耐碳青霉烯类菌株主要来自ICU和妇产科,门急诊患者也可检出;对头孢噻肟和头孢他啶敏感率分别是56.4%(910/1 614)和79.2%(1 279/1 614),ICU对头孢噻肟的敏感率只有37.6%(50/133),体液和痰液标本来源均低于50%;对3种酶抑制剂组合(哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸钾、氨苄西林/舒巴坦)的敏感率分别是92.3%(1 489/1 614)、76.8%(1240/1 614)和35.3%(569/1 614);对大多数抗菌药物,ICU和妇产科敏感性均相对比较低,全血敏感性最好而痰液最差;对左氧氟沙星的敏感率46.3%(748/1 614),ICU和内科敏感性均接近40%,尿液来源敏感性最差已接近40%;对氨曲南和阿米卡星敏感率分别是72.8%(1 175/1 614)和95.8%(1 547/1614)。结论 大肠埃希菌虽然对亚胺培南敏感性极度敏感,耐碳青霉烯类菌株在临床呈上升的趋势,尤其来自ICU分离菌株对抗生素敏感性均较差,产ESBLs菌株也比较高;另外对于外科感染经验性用药和预防用药,较高产ESBLs菌株也不容忽视;从标本类型分析,不同标本分离的菌株之间还是有所差别,临床用药时也应重视其差异性。

门诊与住院患者尿路感染分离病原菌的分布及耐药性分析

目的调查医院尿路感染的门诊患者与住院患者尿液分离病原菌分布及药敏情况,并对两者分离常见病原菌及耐药性进行对比分析.方法收集我院门诊、住院尿路感染患者尿液进行接种培养,筛选出阳性菌株分纯培养,并对分离菌株进行菌种鉴定和药敏试验.结果门诊尿路感染分离出的237株病原菌中,分离率前3位分别为大肠埃希菌55.70%、肺炎克雷伯菌7.59%、屎肠球菌5.06%;住院尿路感染分离出的736株病原菌中,分离率前3位分别为大肠埃希菌40.76%、肺炎克雷伯菌11.14%、粪肠球菌6.93%.门诊与住院尿路感染分离的大肠埃希菌产ESBLs阳性率分别为36.36%和50.67%,对不同抗生素耐药性有所差异,但都对亚胺培南、美罗培南、厄他培南的敏感性极好.结论医院门诊与住院尿路感染分离出的主要病原菌都是大肠埃希菌,但门诊的大肠埃希菌分离率比住院高;而住院的大肠埃希菌产ES-BLs阳性率较门诊高,且对抗生素耐药性整体也较门诊高.临床应注意对不同来源尿路感染患者规范用药.

肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药机制的研究

目的研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制（PMQR）在肺炎克雷伯菌临床分离株上的分布情况，并对阳性菌株上染色体介导的喹诺酮类耐药机制进行分析。方法细菌的鉴定和药敏采用Vitek－2compact系统；采用PCR法检测质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac，（69－Ib－cr和qepA的分布情况。对包含PMQR的细菌，采用E．试验测定环丙沙星的MIC大小，同时扩增测序分析染色体基因gyrA、gyrB、parC、parE的突变情况。结果临床分离的67株肺炎克雷伯菌中，qnrS、qnrB、aac－（6｀）．Ib．cr、qepA的检出率分别为14．93％、2．99％、2．99％和16．42％。8株细菌同时包含qn，和卵p4基因，其中2株qnr、qepA和aac-（6｀）-Ib-cr同时阳性。PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定（0．032～≥64μg／mL），其中8株（占61．54％）对环丙沙星高水平耐药（≥64μgg／mL）。比对结果显示，环丙沙星MIC≤0．5μg／mL的3株细菌几乎未见染色体的氨基酸序列改变；而环丙沙星MIC≥8μg／mL的菌株全部存在gyrA和parC编码氨基酸序列改变，且突变主要集中在gyrA83位、87位~[1parC80位上。所有PMQR阳性的肺炎克雷伯菌的∥膪和pa旭均未发现任何氨基酸序列突变。结论临床分离的肺炎克雷伯菌上检测到qnr、aac-（6｀）-Ib-cr、qepA的分布与共存。PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定，但染色体机制仍是肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素耐药的主要机制，突变主要见于gyrA的83位、87位及parC的80位上。

临床胆汁分离细菌培养与药物敏感试验结果分析

目的分析胆道感染病原菌分布和药敏试验结果,为临床合理用药提供依据。方法 2013年4月至2014年9月厦门大学附属第一医院胆汁标本采用法国生物梅里埃公司BacT/ALERT 3D全自动血培养仪及配套的血培瓶进行增菌培养,全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,运用WHONET 5.6软件进行数据统计分析。结果 217例胆道感染患者有35例(16.1%)分离出2种病原菌,其中肠球菌属与肠杆菌科细菌混合感染(19例,54.3%)最常见;共分离出252株非重复菌株,革兰阳性菌83株(32.9%),革兰阴性菌165株(65.5%),真菌4株(1.6%);分离率居前3位为大肠埃希菌、粪肠球菌和肺炎克雷伯菌;最常见的非发酵菌为铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌。常见肠杆菌科细菌对氨基糖苷类、4代头孢类、碳青霉烯类和哌拉西林/他唑巴坦耐药率低于40.0%,大肠埃希菌对喹诺酮类的耐药率大于50.0%;粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素、利奈唑胺和替加环素的耐药率极低,对高浓度链霉素和高浓度庆大霉素的耐药率均小于30.0%。结论该地区胆道感染常见病原菌为大肠埃希菌、粪肠球菌和肺炎克雷伯菌,肠球菌属和肠杆菌科细菌混合占2种病原菌混合感染很大比例,病原菌对头孢类和喹诺酮类抗菌药物的耐药性日趋严峻。

慢性乙型肝炎病毒感染者辅助性T淋巴细胞亚群的变化

目的了解慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者体内辅助性T淋巴细胞(Th细胞)亚群的变化,探讨HBV感染慢性化与Th细胞亚群变化的关系。方法通过细胞内染色技术,采用流式细胞术检测HBV感染者外周血中Th1细胞和Th2细胞的水平。结果慢性HBV感染者中,乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性感染组和HBV-DNA复制组Th1数量明显低于健康对照组(9.46±2.06,9.52±2.41与11.18±3.12相比,P<0.05);HBeAg阳性组、丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高组、HBV-DNA复制组Th2细胞数量明显高于健康对照组(3.05±1.12,3.12±1.12,2.97±1.12与2.38±0.96相比,P<0.05);HBeAg阳性感染组、ALT升高组和HBV-DNA复制组Th1/Th2比值都明显低于健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性HBV感染者Th1/Th2比例失衡,表现为Th1/Th2比值下降,Th2细胞数量优势,Th1/Th2比例失衡可能与肝脏损伤程度和病毒复制水平有关,Th1/Th2比值可以作为监测HBV慢性感染者免疫状态的重要指标。

临床分离铜绿假单胞菌分布及耐药性分析

目的了解铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性特性。方法对医院2007年7月至2008年10月细菌培养和药敏试验的结果进行回顾性分析。结果共分离铜绿假单胞菌335株,占总病原菌9.2%;主要标本来源是痰液,占77.6%。高发病区是ICU病房。铜绿假单胞菌对丁胺卡那霉素、哌拉西林/他唑巴坦、妥布霉素、左氧氟沙星、头孢吡肟、庆大霉素、替卡西林及环丙沙星12种常用抗菌药物耐药率小于10%。对亚胺培南不敏感的铜绿假单胞菌对氨曲南、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率明显高于对亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌多重耐药现象普遍存在,建议治疗选用丁胺卡那霉素、哌拉西林/他唑巴坦、妥布霉素。

微生物临床检验和细菌耐药性的监测要点评价

目的研究微生物临床检验和细菌耐药性的监测要点。方法选取2014年2月—2016年6月该院临床上分离出的200株致病菌的耐药性与敏感性临床资料进行回顾性分析。结果致病菌株共有200株,革兰阳性球菌125株,革兰阴性杆菌75株。革兰阳性球菌主要为葡萄球菌属,革兰阳性球菌主要为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌,不同的致病菌采用不同的抗生素进行耐药性及药敏性检测,进行分析。结论在临床微生物检验与细菌耐药性监测中,需要掌握好实时明确的细菌耐药性变迁状态,根据细菌耐药性情况指导临床合理使用抗生素药物,达到有效控制院内感染的指导作用。

变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测

目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性。方法以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/XhoI之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR、酶切及测序鉴定;经ScaI酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性。结果成功扩增出大小为269bp的ldh基因候选启动子;经PCR、酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍。结论成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础。

2014年我院临床分离金黄色葡萄球菌的分布及耐药性分析

目的了解我院2014年临床分离金黄色葡萄球菌的分布情况及耐药现状,为临床治疗相关感染提供依据。方法收集我院2014年全年临床各科室送检标本,采用法国Bio Merieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对菌株进行细菌鉴定和药物敏感性检测,并用Excel软件进行数据分析。结果 2014年我院各种标本分离金黄色葡萄球菌共712株,标本分布主要以痰液(60.8%)为主,其次是脓液(17.8%)和分泌物(10.4%);临床科室分布依次是儿科、呼吸內科和神经外科,分别占12.6%、10.8%和10.4%;MRSA菌株检出率为33.0%(235株/712株),诱导克林霉素耐药菌株检出率为16.9%(120株/712株)。712株菌株对万古霉素,替加环素、奎奴普汀/达福普汀、利奈唑胺的耐药率最低,均为0%,对红霉素、克林霉素和四环素耐药率较高,分别是49.7%、48.0%和40.7%;MRSA菌株对红霉素、克林霉素、四环素、左氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、莫西沙星和利福平的耐药率均比MSSA菌株高,且两者比较具有显著性差异(P<0.005)。结论我院临床分离金黄色葡萄球菌对红霉素、克林霉素和四环素的耐药性相对比较高,在临床经验用药方面应谨慎使用;另外MRSA菌株对抗菌药物的耐药性比较高,且呈多重耐药性,应加强监测控制,防止其流行传播。

专科患者解脲脲原体的培养结果及耐药性分析

解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum．Uu）因生长需要尿素而得名，为脲原体属中唯一的一个种。调查显示．Uu为非淋球菌性尿道炎的重要病原体（仅次于衣原体），而且可导致不孕、不育或围产期事件如流产、死产等．甚至还能引起下呼吸道感染及中枢神经系统（CNS）感染等。随着抗菌药物的使用．Uu的耐药性问题也日趋严重．对我院专科门诊就诊的1498例患者Uu培养情况及其药敏结果进行回顾分析．为临床抗菌治疗提供指导．

厦门某三级综合医院近3年血培养病原菌构成及耐药性分析

目的了解厦门某院近3年血培养主要分离菌分布及耐药情况,为临床准确使用抗菌药物,防控医院获得性血流感染提供科学依据。方法采用美国Bactek FK全自动血液培养仪进行培养,VITEK 2Compact全自动细菌鉴定/药敏系统对血培养分离菌株进行鉴定及药敏试验,药敏结果采用美国临床和实验室标准化协会（CLSI）2011标准判断。结果近3年内血培养主要分离菌为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌及凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）等。医院获得性血流感染所占比率2012~2014年分别为42.2%、46.9%、54.1%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为18.8%,多重耐药鲍曼不动杆菌（MDRAB）检出率为42.9%,大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检出率分别为71.8%和69.8%。结论该院血流感染病原体以肠杆菌科细菌为主,医院获得性血流感染比重逐年上升;MRSA、多重耐药鲍曼不动杆菌检出率较高,临床应重视血培养病原体的变化及其耐药趋势,同时需防控医源性血流感染。

变异链球菌clpP基因启动子的克隆及活性测定

目的克隆变异链球菌clpP基因启动子,并进行初步验证。方法 PCR分别扩增变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列FclpP及其突变体FclpP-ΔRS,插入β-半乳糖苷酶(β-glucuronidase,gusA)报道基因表达载体pIB107 BamHI/XhoI酶切位点之间,构建clpP基因5′-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达载体pFclpP和pFclpP-ΔRS,PCR、酶切及测序鉴定;经Bgl II线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆,得到clpP基因5′-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS,经PCR及测序鉴定后,测定SClpP、SClpP-ΔRS、阳性对照SAmi和阴性对照SIB107的GusA活性。结果成功扩增出变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其突变体;变异链球菌clpP基因gusA报道基因表达载体经PCR、酶切及测序鉴定正确无误;PCR及测序结果表明成功构建clpP基因5′-侧翼序列及其突变体变异链球菌gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS;GusA活性测定证实变异链球菌clpP基因5′-侧翼序列及其变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS的GusA活性分别是阴性对照pIB107的34.6和8.7倍,是阳性对照松鼠葡萄球菌ami基因启动子片段gusA报道基因表达株活性的5.2和1.3倍,提示插入片段FclpP和FclpP-ΔRS具有较强的启动子活性。结论成功定位并克隆变异链球菌clpP基因启动子,为今后研究clpP基因上游调控序列提供试验和理论依据。

肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶的研究进展

肺炎克雷伯菌是医院获得性感染最常见的致病菌之一。近年来,在肺炎克雷伯菌中发现了质粒介导的AmpC酶,给临床抗感染治疗带来了更多困难。该文主要针对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶的种类、耐药表型、分子生物特性以及实验室检测方法等研究进展进行综述。