晒田环境胁迫对克氏原螯虾卵巢组织、卵黄蛋白原及营养物质代谢的影响

【目的】研究克氏原螯虾在晒田环境胁迫条件下卵巢组织学特点、卵黄蛋白原浓度及营养物质代谢水平的变化,探索其性成熟过程中体内营养物质变化相关机制,为晒田环境胁迫促进克氏原螯虾卵巢成熟这一生产操作的改良和标准化提供参考依据。【方法】试验对象分为晒田组与对照组克氏原螯虾,在晒田胁迫0、3、7、10 d时分别采集30只雌性克氏原螯虾,取卵巢进行石蜡切片和HE染色,并采集试验组的卵巢、肝胰腺和血清,检测卵黄蛋白原mRNA表达水平和浓度及营养物质代谢水平。【结果】雌性克氏原螯虾在晒田胁迫期间共鉴定出4个卵巢发育阶段,包括卵黄发生前阶段(Ⅰ期,卵巢为黄色,卵母细胞直径150~250μm)、初级卵黄发生阶段(Ⅱ期,卵巢为橙色,卵母细胞直径250~600μm)、次级卵黄发生阶段(Ⅲ期,卵巢为棕色,卵母细胞直径高于600μm)、成熟阶段(Ⅳ期,卵巢为黑褐色,卵母细胞直径高于1000μm)。晒田胁迫0 d时,晒田组与对照组雌性克氏原螯虾卵巢成熟率相似;晒田胁迫10 d时,晒田组雌性克氏原螯虾卵巢成熟率升至96.67%,而对照组仅升至60.00%。随着胁迫时间增加,晒田组和对照组雌性克氏原螯虾的卵巢与肝胰腺的卵黄蛋白原mRNA相对表达量均呈上升趋势,且卵黄蛋白原mRNA在肝胰腺的相对表达量大于卵巢;试验期间,晒田组和对照组雌性克氏原螯虾卵黄蛋白原在肝胰腺的表达总量均大于在卵巢的表达总量,且卵黄蛋白原在肝胰腺的贡献率均大于在卵巢的贡献率。晒田组与对照组雌性克氏原螯虾卵巢、肝胰腺和血液中的卵黄蛋白原浓度均随时间增加呈上升趋势;晒田组浓度上升幅度大于对照组,肝胰腺卵黄蛋白原浓度与卵巢卵黄蛋白原浓度、肝胰腺卵黄蛋白原浓度与血清卵黄蛋白原浓度、卵巢卵黄蛋白原浓度与血清卵黄蛋白原浓度呈极显著正相关(P<0.01)。随着晒田胁迫时间增加,晒田组和对照组雌性克氏原螯虾血蓝蛋白(Hem)、总蛋白(TP)、乳酸(LA)和葡萄糖(Glu)含量均呈下降趋势,晒田组的下降幅度大于对照组;晒田组和对照组雌性克氏原螯虾甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量呈上升趋势,晒田组的上升幅度大于对照组。【结论】晒田环境胁迫期间共鉴定出4个克氏原螯虾卵巢发育阶段。随胁迫时间增加,克氏原螯虾不同组织卵黄蛋白原mRNA相对表达量和浓度均呈上升趋势,卵黄蛋白原的肝胰腺贡献率大于卵巢贡献率。克氏原螯虾体内Hem、TP、LA和Glu含量降低,TG和TC含量升高,表明晒田环境胁迫对卵巢发育具有积极作用。

晒田环境胁迫对克氏原螯虾卵巢发育相关生化指标和激素的影响

【目的】探究晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢发育相关生化指标和激素的变化及对卵巢发育的影响,为晒田环境胁迫促进克氏原螯虾卵巢成熟这一生产操作的改良和标准化提供理论依据,促进克氏原螯虾产业可持续发展。【方法】将2个面积为1300 m2的池塘中投放的克氏原螯虾分别作为晒田组和对照组,以晒田组排干水为试验起点,晒田组排水晒田10 d,对照组正常养殖。分别在晒田环境胁迫0、3、7、10 d采集2组中的雌性克氏原螯虾,每次采样数量为30只,测量、称重后取卵巢、肝胰腺和血清,检测卵巢发育相关的生化指标[碱性磷酸酶(AKP/ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、前列腺素F2α(PGF2α)、前列腺素E2(PGE2)]、性类固醇激素[雌酮(Estrone)、17β-雌二醇(17β-E2)、睾酮(T)、孕酮(PROG)]、高血糖家族激素[高血糖激素(CHH)、性腺抑制激素(GIH)、蜕皮抑制激素(MIH)、大颚器抑制激素(MOIH)]和卵巢发育相关激素[蜕皮激素(Ecdysone)、甲基法尼酯(MF)、皮质醇(Cortisol)],并进行对比分析。【结果】随着时间增加,晒田组雌性克氏原螯虾卵巢成熟率高于对照组,卵巢发育分期主要分布在IV期。生化指标试验结果表明,晒田胁迫0 d时,晒田组雌性克氏原螯虾不同组织中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量均显著低于对照组(P<0.05,下同)或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异(P>0.05,下同);晒田胁迫3和7 d时,晒田组雌性克氏原螯虾不同组织中生化指标含量均显著高于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异;晒田胁迫10 d时,晒田组雌性克氏原螯虾不同组织中生化指标含量均显著高于对照组雌性克氏原螯虾。性类固醇激素试验结果表明,晒田胁迫0和3 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中Estrone、17β-E2、T和PROG含量显著高于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异;晒田胁迫7和10 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中性类固醇激素均显著高于对照组雌性克氏原螯虾。高血糖家族激素试验结果表明,晒田胁迫0 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中CHH、GIH、MIH和MOIH含量均显著高于对照组雌性克氏原螯虾;晒田胁迫3和7 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中高血糖家族激素含量显著高于、低于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异;晒田胁迫10 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中高血糖家族激素显著低于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异。卵巢发育相关激素试验结果表明,晒田胁迫0 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中Ecdyone、MF和Cortisol含量均显著高于、低于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异;晒田胁迫3 d时,晒田组雌性克氏原螯虾血清中卵巢发育相关激素显著高于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异;晒田胁迫7和10 d时,晒田组中卵巢发育相关激素均显著高于对照组。【结论】晒田环境胁迫能促进克氏原螯虾卵巢成熟,加快卵巢发育相关生化指标和激素的变化。晒田胁迫7~10 d时,促进卵巢发育成熟的效果达峰值。

不同卵巢成熟率下克氏原螯虾形态性状对体质量的影响

【目的】确定不同卵巢成熟率克氏原螯虾群体形态性状对体质量的影响,为克氏原螯虾选育工作提供参考。【方法】以晒田环境胁迫方式获得不同卵巢成熟率的克氏原螯虾群体,分别测量不同卵巢成熟率群体的全长(X_(1))、体长(X_(2))、头胸甲长(X_(3))等11个形态性状及体质量(Y);通过相关分析、通径分析和多元回归分析研究不同卵巢成熟率下克氏原螯虾群体体质量与主要形态性状间关系的变化。【结果】通过晒田环境胁迫方式确定3个卵巢成熟率[51.67%(S1+S2)、76.67%(S3)和96.67%(S4)]克氏原螯虾群体。相关分析结果表明,不同卵巢成熟率群体各形态性状与体质量存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异,体质量变异系数均在25.00%以上,选育潜力较大。通径分析结果表明,3个卵巢成熟率群体的总决定系数均≥0.850,51.67%卵巢成熟率群体体质量(Y)由全长(X_(1))、螯足长(X_(5))和腹全长(X_(8))共同决定;76.67%卵巢成熟率群体体质量由头胸甲长(X_(3))、头胸甲宽(X_(4))和螯钳长(X_(6))共同决定;96.67%卵巢成熟率群体体质量由全长(X_(1))和螯钳宽(X_(7))共同决定。3个卵巢成熟率克氏原螯虾群体形态性状与体质量的多元回归方程分别为:Y_(S_(1)+S_(2))=-34.028+0.301X_(1)+0.320X_(5)+0.256X_(8);Y_(S_(3))=-34.142+0.645X_(3)+0.835X_(4)+0.261X_(6);Y_(S_(4))=-45.899+0.553X_(1)+1.493X_(7)。【结论】随着晒田时间的增加,克氏原螯虾卵巢成熟率随之升高,卵巢成熟率为51.67%时,显著影响体质量的主要形态性状以螯足长为主,腹全长和全长为辅;卵巢成熟率升至76.67%时,显著影响体质量的主要形态性状以头胸甲长为主,头胸甲宽和螯钳长为辅;卵巢成熟率升至96.67%时,显著影响体质量的主要形态性状以全长为主,螯钳宽为辅。

合浦珠母贝PfCLEC17A基因的克隆及表达分析

为了探究C型凝集素(C-type lectin)家族成员在合浦珠母贝机体内的作用及表达模式,为进一步解析合浦珠母贝PfCLEC17A的免疫应答机制,通过RACE技术克隆获得合浦珠母贝C型凝集素基因PfCLEC17A;利用生物信息学方法分析了PfCLEC17A的分子特征,并通过荧光定量PCR检测PfCLEC17A基因在合浦珠母贝的鳃、外套膜、闭壳肌、性腺、血液、足和肝胰腺等组织及溶藻弧菌感染后在肝胰腺中的表达情况。结果显示,从合浦珠母贝中克隆获得新的C型凝集素基因PfCLEC17A,cDNA全长为699 bp,其中开放阅读框(ORF)长534 bp,编码178个氨基酸残基,含有一个CTL结构域。系统进化树分析表明,合浦珠母贝与其他贝类的PfCLEC17A基因聚集在一个分支。实时荧光定量PCR结果显示,PfCLEC17A在合浦珠母贝的鳃、外套膜、闭壳肌、性腺、血液、足和肝胰腺等各个组织中均有表达,其中在肝胰腺中的相对表达量最高且显著高于在其他组织中的相对表达量。肝胰腺作为软体动物重要的免疫器官,暗示PfCLEC17A基因可能参与机体免疫过程。藻弧菌感染1 h后,合浦珠母贝PfCLEC17A基因表达水平显著升高并达到最大值,说明该基因参与弧菌等微生物刺激的早期反应。综上所述,PfCLEC17A基因参与合浦珠母贝的免疫应激反应,具有一定的免疫功能。

山麦冬叶绿体基因组密码子使用的偏好性

为了分析山麦冬叶绿体基因组密码子使用偏好性及其成因,以筛选到的49条叶绿体基因为研究对象,采用Codon W软件和CUSP在线程序对核苷酸组成及对应性进行分析,应用SPSS软件进行多元统计分析。结果显示:ENC与G3、GC3相关系数分别为0.526和0.508,均呈极显著正相关(P<0.01);有30个密码子的RSCU大于1,其中以A/U结尾的密码子28个;密码子第3位上嘌呤核苷酸多于嘧啶核苷酸;确定了UUU、CUU和UCA等11个密码子为山麦冬叶绿体基因组最优密码子;山麦冬叶绿体基因组密码子使用偏好性较弱,密码子偏好性的形成主要受自然选择的影响,核苷酸组成和突变压力也起一定作用。