磁珠核酸提取方法在血浆EBV-DNA实时荧光定量PCR检测中应用的性能评价

目的评价磁珠核酸提取方法在血浆EB病毒DNA(EBV-DNA)实时荧光定量PCR检测中应用的性能。方法采用自动化磁珠法提取核酸,并结合实时荧光定量PCR测定EBV-DNA,利用第三方定值参考物质评价该方法的检测性能。同时选取100例鼻咽癌患者,分别用磁珠法与煮沸法定量检测其血浆EBV-DNA,比较分析两种方法的相关性。结果基于自动化磁珠法的实时荧光定量PCR系统检测EBV-DNA,其低、中、高水平的重复性精密度均<3/5 TEa(TEa=靶值±0.4 lg),中间精密度<4/5 TEa;在5.4×101~5.4×10~5U/mL范围内具有良好的线性;最低检测限约为3.334×10~1U/mL;样本中Hb干扰物浓度低于8.667 g/L,对磁珠法检测结果无明显影响。磁珠法与煮沸法的检测结果呈线性相关,阴阳性符合率为83%。结论采用自动化磁珠核酸提取方法结合实时荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA,具备良好的检测性能。

血清AFP、AFP-L3与GP73检测在原发性肝癌诊断中的应用价值

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)及高尔基体糖蛋白73(GP73)检测诊断原发性肝癌(PHC)的价值。方法采用电化学发光法分别检测100例PHC患者(肝癌组)、55例肝硬化患者(肝硬化组)和95例健康体检者(健康对照组)AFP,阳性者(≥20μg/L)采用微量离心柱法检测AFP-L3,并采用酶联免疫法检测GP73。结果 AFP、AFP-L3和GP73在肝癌组的检测值均高于肝硬化组、健康对照组(P<0.05);AFP单项诊断PHC的曲线下面积(AUG)为0.902,灵敏度67.0%,特异性90.7%,准确度81.2%;AFP-L3单项诊断的AUG为0.970,灵敏度37.0%,特异性100.0%,准确度74.8%;GP73单项诊断AUG为0.923,灵敏度56.0%,特异性98.0%,准确度81.2%;三者联合检测对PHC诊断的灵敏度提高为78.0%,特异性为90.0%,准确度为85.2%;单项与联合检测比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论单项检测诊断PHC AFP-L3(%)优于GP73和AFP,三项联合检测可显著提高PHC的诊断敏感度和正确性。

脑微透析探针置入对透析样品的影响

目的探讨微透析探针置入的刺激对大鼠纹状体内谷氨酸水平的影响。方法通过初次和二次置入微透析探针至大鼠纹状体并收集脑微透析液,结合高效液相色谱法检测透析液谷氨酸水平。结果探针初次置入纹状体谷氨酸水平立即升高约30倍,3h后降至基础值;二次置入时谷氨酸仅升高约15倍,1h后即降至基础值。结论微透析探针置入的刺激可引起大鼠纹状体内谷氨酸水平短暂增高,在脑微透析检测谷氨酸样品时应注意探针置入的影响。

血清HE4、CA125和ROMA指数评估卵巢癌风险性的初步评价

目的:评价血清HE4、CA125和ROMA指数在判断卵巢癌高风险性中的价值并分析三项指标与卵巢癌临床分期和病理特征的相关性。方法:临床回顾并随访从2011年1月到2011年9月期间在福建省肿瘤医院就诊的96例原发性卵巢癌病人、74例良性卵巢肿瘤患者及60例健康女性体检者。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定受试者手术前血清HE4和CA125水平。用卵巢癌风险性评估软件计算ROMA指数。以卵巢良性肿瘤+健康人为参照绘制ROC曲线以评价HE4、CA125和ROMA指数的诊断价值,并以单变量统计分析治疗前血清HE4、CA125水平和ROMA指数与临床病理学参数之间的关系。结果:卵巢良性肿瘤组和正常对照组患者血清HE4、CA125和ROMA指数水平均在正常范围内,而卵巢癌组三项指标的中位水平分别为240.40 pmol/L、88.37 U/ml和79.70%,与卵巢良性肿瘤组和正常对照组比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。以卵巢良性肿瘤为对照,卵巢癌组中ROMA指数的敏感性和阴性预测值最高(83.33%和82.95%),HE4的特异性、阳性预测值和准确性最高(100%、100%和82.82%)。以良性肿瘤+健康人为参照人群,HE4、CA125和ROMA指数单项检测的受试者工作特征曲线下面积分别为0.896、0.869和0.922。三项指标的阳性率随着临床分期的升高而升高,但CA125在Ⅰ期的的阳性率仅为36.36%,与HE4和ROMA指数相比(60.61%和78.79%),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。CA125、HE4和ROMA指数的阳性率均与卵巢癌病理特征(术前转移状态、组织学分级、肿物大小、肿瘤病理类型)显著相关,此外HE4的阳性率还与患者年龄显著相关,ROMA指数的阳性率则与患者年龄、绝经状态显著相关(P值均<0.05);HE4和ROMA指数在上皮类卵巢癌的阳性率均显著高于非上皮性卵巢癌(76.54%VS 6.67%,90.12%VS 46.67%),ROMA指数在上皮性卵巢癌的阳性率最高(90.12%),尤其是浆液性腺癌阳性率高达97.92%。而CA125在两组间差异无统计学意义。同时在子宫内膜癌组,CA125的阳性率显著低于HE4和ROMA指数,而在粘液性腺癌组,则是CA125的阳性率显著高于HE4和ROMA指数。结论:血清HE4、CA125的联合检测及ROMA指数的计算有助于评估腹盆腔肿块患者患卵巢癌的风险性,对于早期以及上皮性卵巢癌尤其是浆液性卵巢癌具有更好的预测价值,可提高卵巢癌的早期诊断效率,进而提高五年生存率。

大鼠胚胎中脑腹侧细胞和大脑皮质神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较

体外培养的大鼠胚胎中脑腹侧(VM)细胞和大脑皮质神经干细胞(NSCs)分别移植入帕金森病(PD)模型大鼠毁损侧纹状体。移植后2,4,8周采用脑微透析术结合高效液相色谱(HPLC)动态监测毁损侧纹状体内多巴胺水平,同期观察大鼠的旋转行为。移植后8周采用免疫组化法检测植入细胞的存活及分化情况。结果显示:移植后4,8周VM移植组多巴胺水平明显高于NSCs移植组或对照组,同期VM移植组较其余两组旋转行为有显著改善,而NSCs移植组与对照组多巴胺水平及旋转行为无显著差异。VM移植组较NSCs移植组植入的细胞易存活和分化。以上结果提示,大鼠胚胎VM细胞移植治疗PD模型的疗效明显优于胚胎大脑皮质NSCs。

福州市体检人群EB病毒VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG调查分析

目的调查EB病毒VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG在福州体检人群中的分布规律。方法采用ELISA法检测2010年8月至2014年9月13433例体检者血清VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG,统计其阳性率及不同性别、年龄组的区别,采用圆分布资料平均角假设检验分析阳性检出集中趋势。结果福州地区体检人群血清VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.001),但三者的性别差异无统计学意义(P>0.05),三者阳性率及VCA-IgA临界百分率随着年龄的增长而生高,>60岁年龄组阳性率明显增高(P<0.05),而EA-IgA临界率则随着年龄的增长而降低;VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG无显著集中趋势(P>0.05)。结论中老年人应联合检测VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG三项指标并定期复查,以利于鼻咽癌高危人群早期发现。

EB病毒感染与XRCC1-Arg399Gln基因多态性在鼻咽癌发生中的交互作用

目的评估XRCCl-Arg399 Gln单核苷酸多态性在鼻咽癌发病中的风险,研究XRCCl-Arg399 Gln单核苷酸多态性与EB病毒感染的交互作用。方法采用病例对照研究,收集90名经病理确诊的鼻咽癌患者作为病例组和75名在我院进行健康体检的病人作为对照,并按照性别和年龄1∶1配对,提取全血基因组DNA进行PCR扩增,对扩增产物再进行测序PCR反应,最后分析得出XRCC1 Arg399Gln的基因型。结果 EB病毒感染能增加鼻咽癌发病风险,VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG抗体三项阳性时可以增加鼻咽癌发病风险,但单项VCA-IgA阳性是鼻咽癌发病的最强危险因素（OR=26.526,95%CI：11.190~62.884）,单因素条件Logistic回归分析显示,与携带XRCC-1 Arg399Gln的AA基因型相比,携带XRCC-1 Arg399Gln的GG基因型可增加鼻咽癌发病风险（OR=4.3,95%CI：1.184~15.618）;XRCC-1 Arg399Gln的GA基因型与VCAIgA存在交互作用（OR=20.755,95%CI：5.312~81.094）。结论 XRCC-1基因的Arg399Gln基因多态性能够增加患鼻咽癌的风险,且Arg399Gln的GA基因型与EB病毒感染具有一定的交互作用。

鼻咽癌外周血单个核细胞和血浆中EB病毒DNA水平变化及与放化疗疗效的关系

目的比较鼻咽癌患者放化疗治疗前后外周血单个核和血浆EBV DNA水平的动态变化,探讨EBV DNA水平与鼻咽癌放化疗近期疗效的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法分别测定整群选取的2015年7—11月福建省肿瘤医院放疗科收治的75例初诊鼻咽癌患者放化疗前后外周血单个核细胞和血浆EBV DNA水平,根据疗效评价分为CR、PR、SD、PD组,各组治疗前后外周血单个核细胞和血浆EBV DNA水平分别进行比较;对配对的75例治疗前鼻咽癌患者外周血单个核细胞和血浆EBV DNA水平进行检出率和相关性分析。结果 CR、PR组外周血单个核细胞和血浆EBV DNA治疗前后下降明显,差异有统计学意义(P<0.05);SD、PD组外周血单个核细胞和血浆EBV DNA治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。外周血单个核细胞和血浆EBV DNA总体检出率为78.7%、53.3%,差异有统计学意义(P<0.05);两种类型标本EBV DNA结果呈正相关(r=0.481,P=0.00)。结论外周血单个核细胞和血浆EBV DNA检测可作为评价鼻咽癌放化疗近期疗效的指标。

三种核酸提取方法用于检测血浆EBV—DNA的性能及应用评价

目的评价并比较用于检测血浆EBV-DNA的3种核酸提取方法的分析性能及临床应用价值。方法分别采用硅膜离心柱法、浓缩煮沸裂解法或自动化磁珠吸附法平行提取核酸，并通过实时荧光定量PCR测定EBV-DNA。利用第三方定值参考物质，比较三种方法的检测性能，并配对检测100例NPC患者及100名健康体检者血浆，评估3种方法的临床应用价值。结果3种方法提取并检测EBV-DNA的正确度、不精密度均符合要求，且对临床样本的测定结果均呈线性相关。但磁珠法的重复性不精密度和中间不精密度较离心柱法与煮沸法均小且稳定（均〈3%）；最低检测限（约3.334×101 IU/ml）较离心柱法（4.159×101 IU/ml）与煮沸法（8.511×101 IU/ml）稍灵敏；线性范围（5.4×101～5.4×105 IU/ml）较煮沸法（5.4×102～5.4×105 IU/ml）稍宽；抗Hb干扰能力优于煮沸法；而且对NPC样本检测的阳性率及平均病毒载量（95%，8.342×103 IU/ml）均显著高于离心柱法（84%，4.707×103 IU/ml）与煮沸法（78%，2.571×103 IU/ml）（P均〈0.05）。 结论采用自动化磁珠吸附法提取检测血浆EBV-DNA可以实现更好的检测性能，并具备更高的临床应用价值。

原发性乳腺癌患者术前血清中糖类抗原153癌胚抗原和组织多肽特异性抗原水平与临床病理特征和预后的关系

目的探讨原发性乳腺癌患者术前血清中糖类抗原153（CA153）、癌胚抗原（CEA）和组织多肽特异性抗原（TPS）水平与患者临床病理特征和预后的关系。方法对386例Ⅰ～Ⅳ期原发性乳腺癌患者的临床资料进行严格随访，回顾性分析患者术前血清中CAl53、CEA和TPS水平与乳腺癌临床病理特征和预后的关系。结果分别有383、382和324例患者进行了术前CA153、CEA和TPS的检测，平均表达水平分别为（21．46±34．88）U／ml、（1．53±7．95）μg/L和（224．87±436．19）AU／ml，CA153、CEA和TPS的阳性表达率分别为10．7％（41／383）、7．6％（29／382）和63．9％（207／324）。原发性乳腺癌患者术前血清CA153的表达水平与患者的年龄和肿瘤大小显著相关（均P〈0．05），CEA的表达水平与肿瘤大小显著相关（P〈0．05），TPS的表达水平与肿瘤大小和淋巴结转移状况显著相关（均P〈0．05）。术前血清CA153、CEA和TPS阳性表达患者的总生存率显著低于阴性患者（均P〈0．05）。Cox多因素分析表明，ER的表达水平以及术前CA153的表达水平是影响乳腺癌患者预后的独立因素（均P〈0．05），其中术前CA153水平增高是危险因素，而ER阳性表达则是保护因素。结论术前血清CA153、CEA和TPS的表达水平与乳腺癌患者的临床病理特征和预后有关，CA153是影响乳腺癌患者预后的独立因素，CA153表达水平增高者的预后较差。

血浆EBV DNA监测鼻咽癌治疗疗效意义

目的探讨血浆EBV DNA监测鼻咽癌治疗疗效的临床意义.方法回顾分析2016-2017年间本院初诊的799例鼻咽癌根治性调强放疗患者的临床资料.分析疗前血浆EBV DNA与临床分期、肿瘤进展的相关性,比较放疗结束及随访中EBV DNA与肿瘤进展的关系.结果疗前DNA表达水平与临床分期、肿瘤进展呈正相关(P<0.001).放疗结束后6~8周,19例(2.3%)血浆EBV DNA持续阳性者预后最差,14例发生了肿瘤进展.9例放疗结束后6~8周转为EBV DNA阴性,3例肿瘤进展.而放疗结束EBV DNA阴性患者肿瘤进展率仅8.3%(64/772),3个组无肿瘤进展生存率不同(P<0.05).随访中持续性血浆EBV DNA阳性,诊断肿瘤进展的敏感性、特异性、准确性分别为77.6%、100%、98.1%.结论鼻咽癌患者疗前EBV DNA表达水平与肿瘤负荷和肿瘤进展相关,放疗结束6~8周EBV DNA持续阳性者预后极差,应给予合适的辅助治疗.随访中持续性血浆EBV DNA阳性诊断肿瘤进展的正确性高,是鼻咽癌根治性治疗后可靠的疗效监测指标.

血清HE4与卵巢癌临床诊断的相关性研究——附69例CA125比对分析

分别用ELISA法和电化学发光法测定手术前的69例卵巢癌患者和52卵巢良性肿瘤患者及60例健康体检者的HE4和CA125的血清水平,并以卵巢良性肿瘤+健康人为参照绘制ROC曲线,分析HE4和CA125在不同临界点时对卵巢癌的诊断能力,评价HE4和CA125的诊断价值。临床回顾卵巢癌患者临床分期和病理学参数,以单变量统计分析治疗前HE4和CA125水平与卵巢癌临床病理特征的相关性。结果显示卵巢癌组HE4的中位水平为233.40 pmol/L,CA125中位数水平为88.37 U/ml,与卵巢良性肿瘤组和正常对照组比较,差异有非常显著意义(P<0.01)。以良性肿瘤+健康人为参照人群,HE4和CA125单项检测的受试者工作特征曲线下面积分别为0.906和0.758,当HE4的阳性临界点为150 pmol/L时,其敏感性和特异性分别为68.12%和100%,当HE4的阳性临界值为75 pmol/L时,其敏感性和特异性分别为79.71%和94.64%。HE4和CA125的表达水平和阳性率与患者临床分期及病理特征显著相关。尤其在FIGOⅠ期卵巢癌患者,高分化卵巢癌患者以及卵巢子宫内膜样癌患者中,HE4的表达阳性率显著高于CA125,差异有统计学意义(P<0.05)。由此可见HE4作为卵巢癌的肿瘤标志物,具有比CA125更好的鉴别诊断和早期诊断价值,术前HE4和CA125的检测可辅助判断卵巢癌患者临床病理特征,提高术后生存率。

AFP-L3在肝细胞癌早期诊断和疗效监测中的价值

为了探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝细胞癌的早期诊断和疗效监测价值,本研究联合应用微量离心柱法和电化学发光法随访监测83例原发性肝细胞癌患者和57例首诊为非肿瘤性慢性肝病患者血清中的AFP和AFP-L3水平。原发性肝细胞癌患者监测时间为肝癌术前至术后6个月,慢性肝病患者监测时间为首诊前至诊后2年。同时收集原发性肝细胞癌患者门脉癌栓情况、肿瘤分化程度、临床分期、肿块大小等临床诊断指标。研究结果为,随访的22例AFP-L3持续阳性的慢性肝病患者平均3.15个月均确诊为肝癌,肝癌发生率为45.45%;4例AFP-L3阴性变阳性的慢性肝病患者,平均8.17个月均确诊为肝癌,肝癌发生率为100%;31例AFP-L3持续阴性的慢性肝病患者,平均11.75个月确诊为肝癌,肝癌发生率为9.68%。各组相比差异有统计学意义。原发性肝细胞癌患者手术有效者AFP和AFP-L3水平明显下降,而病情稳定和进展者二者水平无显著变化或升高。AFP-L3水平与肿瘤分化程度相关,而与门脉瘤栓、临床分期和肿块大小不相关。在有门脉瘤栓组、低分化肝癌组、Ⅰ期肝癌组和小肝癌组中,其AFP-L3的阳性率分别为81.97%、100%、75%和77.78%。由此可知AFP-L3在肝细胞癌早期诊断和疗效监测中具有重要的临床价值。

术前HE4单项及联合CA125检测在子宫内膜癌中的临床价值

分别在ARCHITECT i2000_(SR)化学发光免疫分析仪(微粒子化学发光法)和E170电化学发光免疫分析仪(电化学发光法)上测定术前85例子宫内膜癌患者和100例健康体检者的HE4和CA125血清水平,绘制ROC曲线并确立HE4最佳诊断临界值,分析HE4和CA125单项和联合检测的诊断指标,进而评价术前HE4单项及联合CA125检测在子宫内膜癌的早期诊断价值。临床回顾子宫内膜癌患者预后相关因素,以单变量统计分析治疗前HE4和CA125与子宫内膜癌预后因素的相关性。结果显示术前子宫内膜癌组HE4和CA125血清水平与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HE4和CAl25单项检测的工作特征曲线下面积分别为0.797和0.746,以约登指数确定HE4的临界参考值为69.45 pmol/L,在100%特异性下,HE4单项和联合CA125检测的敏感性分别为50.59%和58.82%,均显著高于CA125(28.24%)。HE4和CA125均与患者FIGO分期、附件受侵、阴道和(或)宫旁受侵和盆腔或(和)腹主动脉旁淋巴结转移显著相关;HE4和CA125的阳性率随着子宫内膜癌的分期、恶性程度和播散范围的升高而升高。HE4在绝经妇女及早期内膜癌的阳性率显著高于CA125(P<0.01)。由此可见HE4作为子宫内膜癌的肿瘤标志物,具有比CA125更好的早期诊断价值,术前HE4和CA125的联合检测可辅助判断子宫内膜癌患者预后,提高术后生存率。

治疗前血浆EBVDNA在调强放疗鼻咽癌患者预后中的意义

[目的]探讨初治鼻咽癌患者治疗前血浆EBV DNA表达水平的预后价值。[方法]回顾分析667例初诊鼻咽癌接受根治性调强放疗患者的临床资料,分析治疗前血浆EBV DNA与临床分期、总生存的关系。以1500拷贝数/ml为临界值,将患者分为EBV DNA高表达者和低表达者。Kaplan-Meier法计算生存率并用Log-rank法检验,多因素分析采用Cox模型分析。[结果]Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者中EBV DNA〉0拷贝数/ml的比率分别为18.8%、34.4%、50.5%、66.4%。患者治疗前血浆EBV DNA的表达量与临床分期呈正相关（P〈0.001）。临床分期和EBV DNA是患者总生存的独立预后因素。Ⅲ期患者中,EBV高低者两组差别具有统计学意义（χ^2=4.084,P=0.043）,EBV DNA还是Ⅲ期患者总生存的独立预后因素。Ⅰ-Ⅱ期及Ⅳ期患者中,EBV DNA高低两组总生存率差别无统计学意义,但多因素分析发现,EBV DNA的绝对拷贝数是总生存的独立预后因素（P〈0.05）。[结论]治疗前血浆EBV DNA对于各期鼻咽癌患者均具有预后作用,对于Ⅲ期患者,以1500拷贝数/ml为临界值,可以较好地判断预后,但对于Ⅰ-Ⅱ期及Ⅳ期患者,还需要更多的研究以确定合适的临界值。

细胞移植术对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺的影响

目的探讨细胞移植过程中麻醉以及细胞植入等操作对中枢神经递质谷氨酸和多巴胺的影响。方法体外培养的新生大鼠大脑神经干细胞定位植入正常成年大鼠大脑纹状体，采用脑微透析术结合高效液相色谱（HPLC）动态检测探针置入、麻醉剂氯胺酮和戊巴比妥钠以及移植细胞等操作对谷氨酸和多巴胺水平的影响。结果探针置入大鼠纹状体后15min，纹状体内谷氨酸和多巴胺的水平均明显高于基础值，5～6h后方恢复至基础水平。戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉后15min均可使大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平呈一过性升高。细胞植入本身对大鼠纹状体内谷氨酸和多巴胺水平无明显影响。结论常规剂量的戊巴比妥钠或氯胺酮腹腔麻醉均可使脑内谷氨酸和多巴胺水平短暂升高，进行脑微透析术检测谷氨酸和多巴胺应在探针置入至少6h后进行。

血清GP73与AFP-L3(%)在AFP低浓度肝癌中的诊断价值研究

目的探讨血清高尔基体蛋白73(GP73)及甲胎蛋白(AFP)异质体3百分含量(AFP-L3(%)检测在AFP低浓度(1.0~108.0μg/L)肝癌中的诊断价值。方法选择临床诊断符合AFP低浓度肝癌患者(80例)、肝硬化患者(55例)及健康体检者(80人),测定3组人的血清GP73、总AFP及AFP-L3含量,并计算AFP-L3(%)。结果GP73和AFP-L3(%)在AFP低浓度肝癌组的检测值及阳性率,均高于肝硬化组和健康对照组;ROC曲线分析结果,GP73单项诊断AFP低浓度肝癌的曲线下面积0.887、敏感性37.5%、特异性97.8%、准确度75.3%;AFP-L3(%)单项诊断的曲线下面积0.933、敏感性10.0%、特异性99.3%、准确度66.0%;两者联合应用对AFP低浓度肝癌诊断的敏感性45.0%、特异性97.0%、准确度77.7%。结论血清GP73及AFP-L3(%)测定有助于检出AFP低浓度肝癌患者,两者联合可提高检测的敏感性与准确度,实现对肝癌的早期预警。