阳性脂质体介导基因转染及其研究进展

基因治疗是一种很有前景的治疗模式,而阳性脂质体介导的基因转染是目前基因治疗的研究热点之一。现综述近5年来有关阳性脂质体的文献,介绍了阳性脂质体的基本组成,并从生物学、理化性质及制剂学等几个方面介绍了影响阳性脂质体/DNA复合物转染效率的主要因素,最后从新的阳性脂质成分及阳性脂质体或阳性脂质体/DNA复合物的表面修饰等方面介绍了近年来有关改善阳性脂质体介导基因转染的研究进展。

用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物的制备与初步评价

目的制备用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物并对其进行初步评价。方法以二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和3β-[N-(N′,N′-二甲氨基乙基)]氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)为脂质材料,采用逆相蒸发法制备得到磁性脂质体,并在此基础上制得磁性脂质体-DNA复合物。用邻菲啰啉法测定复合物中铁含量;用透射电子显微镜观察复合物的形态并对其进行能谱分析;用纳米粒度及电位分析仪测定复合物的粒径大小及Zeta电位;对复合物进行琼脂糖凝胶电泳考察形成稳定复合物所需的最低(DC-Chol)-DNA质量比值;并考察(DC-chol)-DNA质量比对磁性脂质体-DNA复合物的粒径、Zeta电位以及DNA包封率的影响;还初步考察了复合物的体外磁场响应性能。结果制得的复合物形态较为圆整,粒径分布均匀,复合物内含有磁性物质,且具有良好的磁场响应性能。(DC-Chol)-DNA质量比值对复合物的粒径、Zeta电位及DNA包封率的影响均呈现一定趋势。结论本实验制备得到的复合物具有高包封率、稳定性好且具有磁场响应性能等特点。且当(DC-Chol)-DNA质量比值在9左右时,复合物具有粒径较小、Zeta电位较高且包封率高的特点。

海参皂苷nobiliside A脂质体及其溶血行为的初步研究

本文旨在制备海参皂苷nobiliside A(Nob A)脂质体,建立脂质体中Nob A的含量和包封率的测定方法,考察该脂质体的体内外溶血行为。以高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定脂质体中Nob A含量,微柱离心法测定其包封率。以溶血率和包封率、粒径为指标,单因素考察了制备方法、磷脂用量、胆固醇用量和药脂比。根据单因素的考察结果,以薄膜超声法制备3批脂质体,与同浓度的药物溶液进行体内外溶血行为的比较。结果显示:用于含量测定和包封率测定的HPLC-ELSD和微柱离心法准确、快速,采用薄膜超声法制备的脂质体形态圆整,粒径较为均匀。当磷脂与胆固醇比例为2∶1,药脂比为1∶40时,Nob A脂质体的平均包封率为95.7%,平均粒径为87.6nm。Nob A以脂质体作为给药载体,其体内外溶血行为大大降低,有望成为静脉注射用脂质体。

磁性纳米靶向Apo-A-I基因治疗对大鼠动脉粥样硬化斑块发展的作用

目的观察载脂蛋白A族Ⅰ型(Apo-A-Ⅰ)基因对动脉粥样硬化(AS)斑块发展的作用。方法将超微超顺磁性氧化铁(USPIO)作为磁性纳米载药系统输送治疗基因,用逆相蒸发法制备带正电荷的磁性脂质体,再将DNA与该脂质体按照1∶7的电荷比形成复合物;将已形成AS斑块的12只大鼠分为实验组和对照组,实验组6只大鼠经尾静脉注入磁性纳米脂质体/DNA复合物,对照组6只大鼠经尾静脉注入不含基因的磁性纳米脂质体复合物,每只动物给药剂量为0.32 ml,给药后立刻在所有动物左侧肾脏附近(体外)绑缚铷铁硼稀土磁铁(场强500mT)进行磁诱导,约4h后将磁铁取下。继续喂养6周后抽血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL),并将动物处死,取腹主动脉进行油红O染色。结果基因治疗6周后,实验组80层切片中发现斑块10层,脂质条纹面积和纤维斑块面积的百分比分别为9.21%和1.18%;对照组83层切片中发现斑块35层,脂质条纹面积和纤维斑块面积的百分比分别为32.25%和1.66%。实验组与对照组进行斑块率的比较,P<0.01,实验组HDL水平明显升高,实验组肝组织Apo-A-ⅠmRNA水平明显高于对照组。结论DNA与逆相蒸发法制备的磁性脂质体形成的磁性纳米脂质体/DNA复合物在外加磁场导入下可以使Apo-A-Ⅰ基因定向到达肝脏,显著升高血浆HDL水平,降低LDL、TC、TG水平,抑制AS斑块的发展。

重酒石酸长春瑞滨热敏脂质体的制备及其包封率测定方法研究

目的制备重酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate,VRT)热敏脂质体,建立脂质体中VRT含量和包封率的测定方法。方法 pH梯度法制备VRT热敏脂质体,HPLC测定脂质体中VRT的含量。微柱离心法分离脂质体与游离药,考察葡聚糖凝胶类型、洗脱溶剂、柱高、洗脱体积等因素对VRT游离药洗脱的影响。结果 VRT热敏脂质体的平均粒径为(94.6±1.6)nm,含量为(1.83±0.03)mg.mL-1。选择葡聚糖凝胶G-25制备微柱,最佳柱高4 cm,以PBS缓冲液为洗脱溶剂,梯度洗脱体积法分离脂质体与游离药,测得3批VRT热敏脂质体的包封率分别为(95.75±1.42)%、(91.12±1.21)%、(94.10±2.03)%,洗脱回收率分别为(98.3±2.42)%、(93.5±1.83)%、(96.6±1.65)%。结论 VRT脂质体的制备工艺稳定,载药量大,包封率高。含量及其包封率测定方法简单、快速、准确。本实验可为VRT静脉注射用热敏脂质体新制剂的开发提供研究基础。