基于GAPDH重组蛋白建立羊肝片吸虫病间接ELISA检测方法

为了建立早期羊肝片吸虫病的血清学快速检测方法,本试验成功克隆并表达肝片吸虫GAPDH重组蛋白,Western blot结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性。用肝片吸虫GAPDH重组抗原包被,建立肝片吸虫病血清抗体的间接ELISA方法;随后优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时筛选其他反应条件。结果显示,间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,GAPDH重组抗原与华枝睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的96份羊血清进行检测,阳性率为16.67%(16/96)。结果表明本试验建立的方法具有良好的敏感性和特异性,能够为早期诊断羊肝片吸虫病提供参考。

基于TPX和CatB4重组蛋白的绵羊肝片吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

为了建立早期快速诊断绵羊肝片吸虫病的血清学方法,原核表达肝片吸虫TPX和CatB4重组蛋白。分别以TPX、CatB4重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测肝片吸虫血清抗体的间接ELISA方法。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。蛋白免疫印迹结果显示,重组蛋白具有良好的抗原活性。这2种间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,且这2种方法与华支睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的95份绵羊血清进行检测,阳性率分别为18.95%和22.11%。结果表明,本研究中建立的2种间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,为肝片吸虫病的早期诊断和流行病学调查提供了必要手段。

旋毛虫不同虫期收集方法的比较

为了满足旋毛虫研究中对收集到的不同虫期虫体的数量、活力、纯净度等质量需求,基于相关文献中不同虫期虫体的收集方法,进行适当优化,比较了各收集方法的耗时长短、难易程度、收集的虫体数量及其感染力等,并总结出应用于不同实验需求的最适收集方法。同时,通过荧光定量PCR方法检测旋毛虫新生幼虫期特异性基因T668(AF331160.1)在不同时期各组织器官中的表达量,来间接反映移行期新生幼虫的含量,为后续描绘新生幼虫在动物体内的移行路径以及移行幼虫的研究提供新思路。研究结果表明:用贝尔曼静置法收集的肌幼虫的活力和侵袭力最强,用贝尔曼搅拌法收集的肌幼虫死虫数量最少,以生理盐水作为消化液更佳,用常规孵育装置收集法收集的成虫的数量最多,用离心法收集的新生幼虫的数量最多,用自然沉淀法收集的新生幼虫的感染力最强;旋毛虫雌虫在回肠和攻虫后第5天时数量最多;第4天时肺和后腿肌中移行期新生幼虫含量较多,第8天时在心、肾、舌肌、膈肌中较多,第12和15天时在心中最多。研究结果为满足不同实验需求,提供了虫体的最适收集方法。