汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定。以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法。结果如下:抗原包被量0.4μg·mL-1,37℃包被2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD450nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑。建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72%。该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查。

财务柔性、融资约束与企业研发投入

以我国2012—2019年A股上市公司为样本,检验财务柔性、融资约束与企业研发投入三者之间的关系。结果表明:企业保持一定的财务柔性能够提高企业研发投入水平;财务柔性对融资约束存在抑制作用,即企业储备财务柔性能够一定程度上改善企业的融资约束困境;财务柔性能够通过缓解企业的融资约束情况而促进研发投入水平的提高,融资约束发挥中介作用。进一步分样本研究表明,国有企业中财务柔性对企业研发投入作用并不显著,但非国有企业组中其作用依然显著;对于高新技术企业与非高新技术企业,财务柔性对企业研发投入的作用也存在差异。根据研究结论提出企业应当提高财务柔性储备意识,合理储备财务柔性以及拓宽财务柔性融资渠道的建议。

猪流行性腹泻病毒M和S蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

采用PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白和S蛋白基因的亲水区进行扩增,扩增片段(命名为Ma和Sa)分别克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6p-1中,获得的重组质粒pET-32a-Ma和pGEX-6p-1-Sa转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。表达产物经SDS-PAGE后切胶免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA方法检测小鼠免疫后血清效价,Westernblot和间接免疫荧光方法检测抗体的特异性。结果表明目标蛋白获得了正确表达,且制备的多克隆抗体具有较高的敏感性和特异性。PEDV Ma和Sa蛋白的表达及多克隆抗体的制备将为进一步构建PEDV的病毒样颗粒(VLP)抗原和建立血清学检测方法奠定基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒截短GP5蛋白间接ELISA方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系。为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行原核表达,以表达的重组蛋白tGP5为包被抗原建立了检测针对GP5蛋白抗体的ELISA方法,优化后反应条件为:抗原包被浓度2μg/mL,37℃包被2 h,5%脱脂乳37℃封闭2 h,待检血清稀释度1∶100,37℃作用1 h,二抗1∶20 000稀释,37℃作用45 min,37℃显色3 min,抗体临界值OD450nm≥0.22判为阳性,OD450nm<0.183判为阴性,介于两者之间为可疑。特异性和重复性试验证明,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪口蹄疫病毒血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好。

猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达和纯化

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子。本试验根据GenBank发表的猪的GM-CSF基因序列设计特异性引物,对GM-CSF基因片段进行扩增,扩增后的PCR产物经酶切后克隆入pET-28a载体。重组质粒转化入大肠杆菌杆菌BL21中经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果证明,重组蛋白获得了成功表达,并且主要以包涵体的形式存在。Western blot结果证明重组蛋白具有良好免疫反应性。以上结果为进一步应用重组GM-CSF作为血液干细胞动员剂提供了基础。

不同术式宫颈癌患者手术前后抑郁、焦虑和生存质量比较

目的比较腹腔镜手术和开腹手术宫颈癌患者手术前后的抑郁、焦虑和生存质量,为有针对性地对宫颈癌患者进行心理干预提供参考依据。方法于2015年1月—2016年7月在中国医科大学附属肿瘤医院和附属盛京医院随机抽取49例行腹腔镜根治术(腹腔镜组)和51例行开腹根治术(开腹组)的宫颈癌患者进行问卷调查。结果术前开腹组与腹腔镜组宫颈癌患者比较,2组患者抑郁、焦虑和生存质量得分差异均无统计学意义(均P>0.05);术后2个月和术后6个月开腹组与腹腔镜组宫颈癌患者比较,开腹组患者生存质量得分分别为(67.92±14.40)和(72.46±14.62)分,均低于腹腔镜组患者的(78.22±11.88)和(93.90±8.08)分(均P<0.05);术前、术后2个月和术后6个月比较,腹腔镜组患者抑郁、焦虑、生存质量得分和开腹组患者焦虑、生存质量得分差异均有统计学意义(均P<0.05);术前腹腔镜组和开腹组患者抑郁(89.8%和90.2%)、焦虑(91.8%和80.4%)、抑郁焦虑共病症状(81.6%和74.5%)检出率均处于较高水平,术后2个月和术后6个月与术前比较,抑郁、焦虑和抑郁焦虑共病检出率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论腹腔镜组宫颈癌患者术后2个月和术后6个月生存质量高于开腹组患者,且腹腔镜组宫颈癌患者术后6个月抑郁和焦虑水平降低,生存质量提高。

基于大宗商品贸易的业财融合研究重点分析

在经济全球化背景下,大宗商品贸易逐渐开始发展起来,促使国与国之间联系更加紧密,贸易往来更加频繁。在各种各样的贸易模式下以及诸多风险的贸易业务中,财务人员的重要性被加以强调,财务工作也不再只进行传统的账务核算,而是加入了监督、管理、资源整合等职能要求,业财融合模式逐渐出现在大众视野并被广泛应用。基于此,本文从大宗商品贸易业财融合的概念、融合方向以及具体问题进行探索,同时制定了几点优化措施。