四种抗原用于Dot-IGSS和Dot-ELISA诊断日本血吸虫病的比较

以日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA),用斑点免疫金银染色试验(Dot-IGSS)和Dot-ELISA诊断日本血吸虫病.结果显示:Dot-IGSS法,4种抗原分别检测50例日本血吸虫病人血清,抗体检出率均达100.0%,50例正常人阴性符合率98.0%—100.0%,与肝吸虫病人的交叉反应率0%—2.0%(P>0.05),Dot-ELISA法、AWA、AW和SEA阳性符合率均为100.0%,JWU为90.0%,低于其它抗原(P<0.05),与正常人阴性符合率及肝吸虫病人交叉反应率分别为94.0%—100.0%及0%—6.0%.各抗原检出抗体滴度,Dot-IGSS均高于Dot-ELISA(P<0.05—0.01).抗原浓度在500.0μg/ml,两法抗体检出结果无差异(100.0%),至6.25μg/ml,酶标法检出率为0,而金标法仍为70.0%—80.0%(P<0.01).

快速斑点免疫金染色法检测抗日本血吸虫抗体方法的建立与初步应用

目的 建立简便、经济和敏感、特异的快速免疫学诊断方法。方法 将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,以快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)检测日本血吸虫病患者血清抗体。结果 初步结果显示 ,共检测 5 5例日本血吸虫病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例义务献血员血清均为阴性 ;5 0例肝吸虫病患者血清 ,1例出现阳性反应 ,交叉反应率为 2 0 % ;10例肺吸虫病人血清未见交叉反应。结论 本法快速 ,更为简便、经济 ,有较高的敏感性和特异性 ,适于基层。

未成熟日本血吸虫虫卵抗原对宿主肝内肉芽肿病变影响的研究

用４ｗｋ－ＳＥＡ、５ｗｋ－ＳＥＡ和６ｗｋ－ＳＥＡ加福氏佐剂，背部皮下注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，攻击感染后短期动态观察结果显示，４ｗｋ－ＳＥＡ免疫小鼠攻击感染后４～６ｗｋ时，小鼠肝组织内的减卵率（４０．７４％～５２．５９％）显著高于感染组和佐剂对照组（Ｐ＜０．０１），且在攻击感染后６ｗｋ时，免疫鼠肝组织内未见成熟虫卵，同期肝组织内肉芽肿平均直径（８１．５４±２０．７０μｍ～１１５．２８±２０．５２μｍ）明显小于对照鼠者（１５２．２２±６０．６９μｍ～３４９．１１±４８．４０μｍ），而用５ｗｋ－ＳＥＡ和６ｗｋ－ＳＥＡ免疫小鼠均未获得类似４ｗｋ－ＳＥＡ的免疫效应。研究结果表明，未成熟虫卵可溶性抗原能诱导出显著的抗病免疫力（明显的减卵率和成熟卵减少率及感染鼠肝内肉芽肿的显著缩小）。

三种抗原用于斑点免疫金银染色试验(Dot-IGSS)诊断华支睾吸虫病的研究

应用斑点免疫金银染色技术(Dot-IGSS),以华支睾吸虫成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(CWU)和硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)诊断华支睾吸虫病,60例血清抗体检出率均达100.0％,与正常人血清反应(60例)阴性符合率为93.3～96.6％,与日本血吸虫病人(60例)的交叉反应为0～5.0％,与囊虫病人(30例)和肝炎病人(15例)的交叉反应分别为3.3～6.7％和0。各抗原间未见显著性差异(P>0.05)。但与混合阳性血清反应,AW活性似较AWA和CWU强。

加强教学质量意识 构建长效监控体系

构建和实施科学有效的教学质量监控体系是保证教学质量的重要措施;教学质量监控体系的总体构架包括目标体系、组织体系、方法体系、制度体系和评价体系;坚持和实施教学质量监控的实践证明,增强了教师教学质量意识,促进了教学改革的深化、良好教风、学风的形成和教学管理工作规范化,提高了教学质量。

借鉴TQM理论 构建高校教学质量监控体系

高等教育进入大众化阶段,加强质量意识,实施质量监控,提高教学质量和办学水平是高校可持续发展的必由之路。借鉴TQM理论,构建全员参与、全程监控、质量持续改善的高校内部教学质量监控体系是实施质量监控的长效机制。

快速斑点免疫金染色法检测抗囊尾蚴抗体的初步应用

将猪囊尾蚴液抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,以快速斑点免疫金染色法 (F- Dot- IGS)检测囊尾蚴病患者血清抗体 ,以建立简便、经济和敏感、特异的快速免疫学诊断方法 ,初步结果显示 ,共检测 4 0例囊尾蚴病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例健康人血清均为阴性 ;除包虫病人外 ,10例肝吸虫病人、 10例血吸虫病人和 10例肺吸虫病人血清未见交叉反应 ,本法快速 ,更为简便、经济 ,有较高的敏感性和特异性 。

三苯双脒肠溶片治疗肠道线虫感染的效果观察

目的观察三苯双脒 (Tribendimidine)肠溶片对钩虫、蛔虫、鞭虫和蛲虫感染的驱虫效果。方法对单纯钩虫、蛔虫、鞭虫、蛲虫感染或混合感染者共 42 4例进行分组 ,观察成人服用单剂三苯双脒 40 0 mg治疗钩虫感染 ,3 0 0 mg治疗蛔虫感染 ,40 0 mg连服 3 d治疗鞭虫感染 ,1 4岁以下儿童顿服三苯双脒 2 0 0 mg治疗蛲虫感染 ,及同等剂量的对照药物阿苯达唑 (蛔虫感染 40 0 mg)的驱虫效果及不良反应。结果三苯双脒和阿苯达唑治疗钩虫感染虫卵阴转率分别为 87.93 % (5 1 /5 8)和 66.0 3 % (3 5 /5 3 ) ;蛔虫感染的阴转率分别为 98.3 0 % (5 8/5 9)和97.87% (4 6/4 7) ;鞭虫感染的阴转率分别为 3 3 .3 3 % (2 5 /75 )和 5 6.0 9% (2 3 /4 1 ) ;儿童蛲虫感染的阴转率分别为 77.5 8% (4 5 /5 8)和 93 .93 % (3 1 /3 3 )。结论 三苯双脒治疗钩虫、蛔虫感染有显著疗效 ,治疗鞭虫和蛲虫感染有疗效 ,但虫卵阴转率较低。该药还有服用简便。

教学实验室管理体制机制创新与实验教学改革的研究和实践

文章主要探讨本校实验室管理体制机制创新与实验教学改革的关系,继而提供本校在实验教学改革方面的一些尝试,总结了本校实验室管理体制机制创新的经验。

未成熟日本血吸虫卵抗原诱导宿主肉芽肿病变免疫调节机理的研究

采用 4wk_SEA、5wk_SEA和 6wk_SEA免疫BALB/c小鼠 ,在攻击感染后 0～ 8周对其血清抗体水平、脾脏淋巴细胞表型进行动态观察。结果显示 ,4wk_SEA免疫鼠血清抗体水平 (ELISA法 )较 5wk_SEA和 6wk_SEA及对照鼠者高 1～ 3个稀释度 ,且用 4wk_SEA为抗原检测的特异性抗体水平也较 5wk_SEA和 6wk_SEA者高。应用流式细胞仪分析表明三期SEA免疫鼠脾脏CD4 + /CD8+ 淋巴细胞随攻击感染时间的后移而下降。提示 4wk_SEA的抗病免疫机理与其诱导出的短程特异性抗体的体液免疫和CD4 + /CD8+ 细胞抑制趋势的细胞免疫相关。

快速斑点免疫金染色法检测日本血吸虫病人血清抗体的初步研究

目的 :探索建立快速、简便、经济的免疫学诊断方法。方法 :将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,检测日本血吸虫病患者血清抗体 ,经过优化条件 ,数分钟出现结果 ,建立快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)并与斑点免疫金银染色法 (Dot -IGSS)比较。结果 :初步结果显示 ,F -Dot -IGS共检测4 5例日本血吸虫病急性患者血清抗体 ,均为阳性率 10 0 % ;检测 4 5例义务献血员血清均为阴性 ;5 0例肝吸虫病患者血清中 ,1例出现阳性反应 ,交叉反应率为 2 .0 % ;10例肺吸虫病人血清未见交叉反应。检测结果与Dot-IGSS比较无显著性差异。结论 :该法快速、简便、敏感性和特异性较好 ,适用于基层、流行病学调查和临床快速诊断。

快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法检测抗囊尾蚴抗体的比较研究

目的 建立敏感性高、特异性强 ,方法简便和经济实用的快速诊断囊尾蚴病的免疫学检测方法。方法将猪囊尾蚴液抗原点加于微孔滤膜 ,经预作用和封闭后 ,依次加入待检血清和金标记二抗 ,建立快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)以检测囊尾蚴病患者血清抗体 ,同时用快速微量斑点免疫金银染色法 (RMDot-IGSS)和斑点免疫金银染色法 (Dot-IGSS)检测作为对照。结果 检测 4 0例囊尾蚴病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例健康人血清均为阴性 ;除包虫病患者外 ,10例肝吸虫病患者、10例血吸虫病患者和 10例肺吸虫病患者血清未见交叉反应。结论 F -Dot-IGS敏感特异 ,快速简便 ,有较高的实用价值 。

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。

不同地区日本血吸虫成虫组分蛋白及其感染鼠肝病变差异的研究

应用SDS-PAGE对我国四川、湖南、江苏和浙江四地日本血吸虫成虫组分蛋白进行电泳分析,表明各地日本血吸虫AWA组分蛋白既有共同成分又存在相互之间及雌、雄虫之间的质与量的差别。应用常规病理切片技术,对相应感染小鼠肝内虫卵肉芽肿进行比较观察,显示江苏地区日本血吸虫感染鼠肝虫卵肉芽肿反应增长比四川、湖南者为小(P<0.01),浙江者也较四川、湖南者为小(P<0.05),而江苏与浙江、四川与湖南者之间无显著性差异(P>0.05);江苏者纤维化程度似较四川、湖南者明显。实验结果为了解我国不同地区日本血吸虫之间是否有所不同,提供了生化和病理方面的参考依据。

不同地区日本血吸虫成虫可溶性抗原免疫反应性的比较

应用酶联免疫印迹技术检测我国不同地区日本血吸虫雌、雄及雌雄合抱虫体可溶性抗原(AWA),结果上述三者与相应感染动物血清及慢性日本血吸虫病人血清反应,分别显示出4～20、6～34和3～29条反应带;一地日本血吸虫AWA与各地感染鼠血清反应呈明显相似,而不同地区虫体AWA与各感染鼠血清反应性之间则显示出大的差异性;与不同感染宿主血清(感染鼠、兔和病人血清)的反应带及其分子量互不相同;各地雌、雄虫之间也不同,一般雄虫较雌虫反应带多且强;不同宿主(兔和鼠)体内获取的江苏虫体AWA的反应性也存有差异。提示不同地区日本血吸虫成虫可溶性抗原的血清反应性存在着地区及性别间差异。

未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用SDS－PAGE对日本血吸虫4周、5周和6周－SEA进行分析，分别出现21、14和20条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显示出不同的分子基础。于攻击感染后0～8周作动态观察，ELIB结果表明，4周－SEA及其免疫鼠血清的免疫学特性与5周－SEA和6周－SEA存在一定差异，其中被4周－SEA免疫鼠血清识别的72．4～68．5ku蛋白宽带至攻击感染后6～8周消失，与该抗原免疫鼠肝内虫卵数减少、虫卵发育延缓及肉芽肿缩小（在6周前）及后来的恢复（8周）基本一致。

华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。

不同品系小鼠感染华支睾吸虫后IgG及亚类的动态观察

目的观察不同品系小鼠感染华支睾吸虫后，血清中特异性抗体IgG、IsGI／IgG2a的动态变化。方法NaOH消化法粪检虫卵，ELISA法测定不同品系小鼠感染后4、8和12w血清中抗体IsG、IsGI／IgG2a的动态变化。结果三个品系小鼠血清IsG均于感染后第4～8w升高，约在第10w达到高峰，此后开始下降并维持至观察结束的第12w；IgGI／IgG2a比值感染后逐渐增高，并持续至第12w。结论华支睾吸虫感染的免疫应答发生了由Th1免疫应答向Th2免疫应答转变的趋势。

刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析

目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因编码蛋白的结构与抗原表位,预测该蛋白的免疫原性。方法利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、SOSUI、TMPRED、HNN、MotifScan和NCBI上的ORF finder、SignalP、Bcepred等生物信息学在线分析程序,结合Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件,分析并预测TgMDH蛋白的开放阅读框、理化性质、可溶性、信号肽、跨膜区、表面可及性、可塑性、亲(疏)水性、翻译后修饰位点、二级结构及抗原表位,通过CPHmodels程序预测该蛋白的三维空间结构。结果 TgMDH蛋白由316个氨基酸组成,分子式为C1498H2454N402O440S20,分子质量单位为33 777.5,等电点为6.01,波长280nm时的吸光度(A)值为0.364,半衰期为30h,有9个表面可及性参数≥1.9的区域、4个亲水性参数得分≥1.9的区域、7个柔韧性参数得分≥2的区域、14个翻译后修饰位点和14个潜在抗原表位,为可溶性表达蛋白。结论 TgMDH基因编码蛋白为可溶性蛋白,有多个抗原表位,具有免疫原性,可作为弓形虫病疫苗候选抗原。

IHH-Gli信号通路在CIA大鼠滑膜成纤维细胞增殖中的作用

目的初步探讨IHH-Gli信号通路在胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast,SF)增殖中的作用。方法注射胶原诱导CIA大鼠模型,采用组织块贴壁法培养大鼠膝关节SF,免疫荧光法检测Vimentin鉴定细胞纯度,免疫荧光法检测IHH-Gli通路相关分子(IHH、Ptc、Smo及Gli1)的表达情况,给予GANT61阻断IHH-Gli信号通路,观察细胞形态变化、CCK8法检测细胞增殖情况、免疫荧光法检测糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达变化情况。结果病理及影像学检查显示CIA模型建立成功,培养的细胞95%以上均表达Vimentin,CIA-SF表达IHH、Ptc、Smo及Gli1蛋白,且CIA-SF表达IHH蛋白较正常SF高,10μmol/L及15μmol/L的GANT61能显著抑制CIA-SF的增殖,且降低GSK-3β的蛋白表达水平。结论 IHH-Gli信号通路参与CIA-SF的增殖机制,可能成为研究RA治疗药物的新靶点。