快速检测游离前列腺特异抗原ELISA方法的建立

目的 建立快速检测人血清中游离前列腺特异抗原(f-PSA)的ELISA方法.方法 利用抗f-PSA的单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,一株单抗2D1用于固相包被,另一株单抗2E4进行辣根过氧化物酶标记,采用二步法,建立定量测定人血清f-PSA的双抗体夹心ELISA法.对该法的敏感度、精密度、准确性、特异性进行了分析.应用该法与瑞典CanAg公司的f-PSA ELISA试剂盒同时检测了18例前列腺癌和25例前列腺增生患者血清标本的f-PSA含量,进行了两种方法检测结果的相关性分析.结果 以双抗体夹心ELISA法检测f-PSA,在f-PSA 0～20μg/L范围内线性良好;敏感度为0.025 μg/L;批内变异系数为4.5%～6.2%,批间变异系数为3.9%～7.2%;回收率为94.3%～111.1%;与α1抗糜蛋白酶结合的结合型PSA交叉率为0.7%;检测43份临床标本f-PSA含量的结果与瑞典CanAg公司f-PSA试剂盒检测结果的相关系数为0.995.结论 所建立的双抗体夹心ELISA方法是一种特异、敏感、简便实用的f-PSA快速检测方法,有助于在PSA低水平升高的重叠范围内(4～10μg/L)鉴别前列腺增生与前列腺癌.

抗沙眼衣原体单克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗沙眼衣原体 (CT)沙眼生物变种的特异性单克隆抗体 (mAb) ,并建立CT的胶体金免疫层析快速检测方法。方法 CT脂多糖 (LPS)免疫BALB/C小鼠 ,通过细胞融合 ,建立分泌抗CT抗体的杂交瘤细胞株 ,用ELISA法鉴定mAb的免疫球蛋白亚类和与衣原体性病淋巴肉芽肿生物变种 (CLGV)的交叉反应。用中和抑制法测定mAb与w1型淋球菌、w2 型淋球菌、人型支原体、解脲支原体的交叉反应 ;配对试验挑选出两株mAb ,建立检测CT的双抗体夹心法免疫层析试纸条 ,并与进口胶体金检测卡对照检测 176份女性宫颈和男性尿道拭子标本。结果 配对较好的 8株mAb中 6株为小鼠IgG1,1株为IgG2a,1株为IgM ,8株mAb与CLGV、w1型淋球菌、w2 型淋球菌、人型支原体、解脲支原体均无交叉反应。与进口胶体金检测卡相比 ,阴性符合率为 98.65 % ,阳性符合率为 89.2 9% ,总符合率为 97.16%。结论 本研究制备的mAb具有较高的特异性 ,建立的检测方法可应用于CT引起的泌尿生殖道感染的检测。