CpG位点选择对焦磷酸测序法检测肝癌SMP30启动子甲基化的影响

目的选择适宜的CpG位点用于焦磷酸测序法检测肝癌衰老标记蛋白30(SMP30)启动子甲基化。方法提取人肝癌细胞系SMCC-7721和BEL-7404的基因组DNA,设计针对SMP30基因序列1和序列2的扩增和测序引物,焦磷酸测序法检测SMP30基因序列1和序列2中的CpG位点甲基化程度,并用Sanger测序法验证序列2中出现的SNP位点。结果 SMCC-7721和BEL-7404细胞系中,SMP30基因序列1中6个CpG位点低甲基化,与SMP30基因低表达不符,且测序结果质量评估均为失败。SMP30基因序列2中6个CpG位点高甲基化,与SMP30基因低表达相符,前2个CpG位点均为通过,而后4个CpG位点均为失败。去除第5和第6个CpG位点,只检测SMP30基因序列2中poly(T)结构前4个CpG位点,SMCC-7721细胞系中甲基化程度分别为100%、90%、100%和80%;BEL-7404细胞系中甲基化程度分别为100%、92%、100%和77%。除第3个CpG位点为失败,其余CpG位点均为通过。Sanger测序显示SMCC-7721和BEL-7404细胞系在第3个CpG位点前存在SNP位点,且均为A。结论焦磷酸测序时选择靠近基因转录起始点上游且在poly(T)结构之前的CpG位点,测得的SMP30启动子甲基化值较准确。

基于基因表达谱的卵巢癌相关基因筛选及预后价值分析

目的本研究旨在筛选出卵巢癌相关基因,分析其参与的信号通路及与卵巢癌预后的相关性。方法利用GEO数据库中GSE14407及GSE38666数据集筛选出正常卵巢组织与卵巢癌组织中差异表达基因。DAVID数据库对差异基因进行功能分析和信号通路富集,STRING和Cytoscape构建出蛋白互作网络图。通过Kaplan-Meier在线工具分析关键基因与卵巢癌预后的相关性。结果本研究挖掘出1471个差异表达基因,基因富集后发现主要涉及肿瘤细胞的增殖和迁移。从蛋白互作网络图中筛选出了96个相关基因,其中CLDN6、COL23A1、KIFC2、ECT2、LPAR3、PTGER1与卵巢癌患者的生存预后具有显著的相关性。结论本研究新挖掘出6个与卵巢癌密切相关基因,这些基因有助于进一步研究卵巢癌发病的分子机制,并可能作为新的治疗靶点和诊断标志物。

脑梗死患者运用综合护理干预后并发症情况分析

目的:探讨脑梗死患者运用综合护理干预后并发症情况。方法:选取我院2015年1月—2016年8月随机抽取的80例脑梗死患者,依据不同护理方法分为对照组与观察组各40例,其中对照组运用常规护理,观察组运用综合护理干预,分析两组患者护理后并发症情况差异。结果:在并发症发生率上,观察组为22.5%,对照组为57.5%,组间差异具有统计学意义,P<0.05;在护理满意度上,观察组为100.0%,对照组为87.5%,组间差异具有统计学意义,P<0.05。结论:脑梗死患者运用综合护理干预后并发症发生率相对降低,同时提升患者满意度,有利于和谐护患关系的建立。

CRISPR/Cas9介导的CD34报告基因293AD细胞系的构建

CRISPR/Cas9技术作为一项新起的基因工程技术,在细胞及动物模型基因的编辑修饰中起着越来越重要的角色。CRISPR相关Cas9核酸酶可在特殊设定的单一导向RNA(single guide RNA,sg RNA)的引导下造成基因组DNA双链断裂(DSBs),从而引起同源重组修复(HDR)。利用这种特性,我们构建出了带有CD34-GFP报告基因的293AD细胞系。根据CD34基因组序列,我们设计出了针对CD34基因特异性的单向导向RNA(sg RNA)和带有CD34-GFP报告基因的外源性同源序列。在与Cas9共转染之后,利用嘌呤霉素筛选出基因组DNA中插入有CD34-GFP报告基因的293AD细胞。之后我们对筛选出的293AD细胞进行单细胞分选,并利用PCR扩增对CD34绿色荧光报告基因的插入进行了验证。最后,我们将PCR扩增结果阳性的单克隆293AD细胞系的基因组进行DNA测序。DNA测序结果显示,分选出来的细胞基因组里确实包含有CD34-GFP报告基因。最终,我们成功利用CRISPR/Cas9系统构建出了绿色荧光标记的CD34报告基因293AD细胞系,为后续人体细胞诱导去分化成造血干细胞提供了有利的工具。

SMP30对肝癌细胞行为学影响及其与糖代谢关系研究

糖代谢是癌症的一个典型特征,研究显示SMP30(senescence marker protein 30)是一种肝癌相关抗原,与脂代谢关系密切,为了探讨SMP30与糖代谢的变化是否相关,我们构建了稳定转染SMP30的人SK-HEP1肝癌细胞株。通过迁移实验、侵袭实验和CCK8实验对比检测了过表达SMP30组与对照组肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖的情况;同时还检测了细胞的葡萄糖吸收、乳酸排出的情况。结果显示,与对照组相比,SMP30对SK-HEP1肝癌细胞株的迁移、侵袭有明显的抑制作用(p<0.01);对细胞的增殖作用不明显(p>0.05)。过表达SMP30对肝癌细胞的葡萄糖吸收和乳酸排出作用不显著(p>0.05)。SMP30对肝癌细胞SK-HEP1的迁移、侵袭有一定的抑制作用,但这种作用与糖代谢关系不明显。