恶性B淋巴细胞性淋巴瘤克隆性重排检测研究

目的 对恶性 Ｂ淋巴细胞性淋巴瘤进行克隆性研究。方法 用免疫组化法标记筛选恶性 Ｂ淋巴细胞性淋巴瘤，用针对 Ｉｇ Ｈ 单轮扩增引物进行多聚酶链反应扩增检测克隆性基因重排。结果 在 １２６ 例恶性 Ｂ细胞性淋巴瘤中，免疫组化标记与 Ｉｇ Ｈ 基因克隆性重排符合率为 ９７％ ，其中， Ｉｇ Ｈ 基因克隆性重排阳性 ８３ 例（６６％ ），３ 例见 Ｔ Ｃ Ｒβ交叉阳性，在 １ 例病理诊断为颈淋巴结反应性增生病例中出现 Ｉｇ Ｈ克隆性重排，在其它 ２２ 例非淋巴组织和良性淋巴组织疾患中均未见阳性。在 １８ 例临床诊断有争议的病例中１１ 例出现 Ｉｇ Ｈ 克隆性重排。结论 克隆性重排检测对恶性 Ｂ淋巴细胞性淋巴瘤有一定的辅助诊断作用。

200例乳腺疾病针吸细胞学雌、孕激素受体表达研究

目的研究乳腺疾病针吸细胞学标本雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）表达的应用价值。方法采用酶联亲和组织化学法检测２００例乳腺病的ＥＲ和ＰＲ表达情况。结果在良、恶性乳腺疾病中，ＥＲ的表达无显著差异（６３．５％和６０．２％，Ｐ＞０．０５），ＰＲ的表达则有显著差异（５７．９％和４７．３％，ＰＭ＜０．０５）。乳腺病患者绝经前后ＥＲ、ＰＲ表达无显著差异（Ｐ＞０．０５）。伴有局部淋巴结转移的乳腺癌患者，ＥＲ和ＰＲ表达率明显低于无淋巴结转移者（Ｐ＜０．００１）。结论针吸细胞学标本酶联亲和组织化学法检测ＥＲ和ＰＲ表达，可以帮助判断有淋巴结转移的乳腺癌患者的预后和指导内分泌治疗。

P53蛋白在原发性肺癌中过表达的临床病理意义

运用免疫组织化学方法研究原发性肺癌中P53蛋白过表达的临床病理意义。结果发现112例肺癌中有50例表达P53蛋白（45％），鳞癌中的表达率明显高于腺癌，分别为59％和32％（P＜0.05）。伴淋巴结转移的肺癌P53蛋白表达率为46％，明显高于无淋巴结转移的肺癌组（37％，P＜0．05）。结果提示不同组织学类型的肺癌发生学机制可能不同，而且P53蛋白表达状态可能也是估计肺癌预后的一个重要参数。

胎盘部位中间型滋养细胞肿瘤

人们对二型滋养层、细胞滋养层和合体滋养层以及相应的疾病,如水泡状胎块、侵蚀性葡萄胎和绒癌已有清楚的认识。近年来,光镜、电镜和免疫组化研究证实了还存在第三种中间型滋养层细胞(Inter-mediate cell,IT),它是正常胎盘的组成成份。

滋养细胞肿瘤PP_（11）、PP_（19）、PP_（25）和PP_（26）的免疫

通过免疫组织化学方法研究了４种胎盘蛋白（ＰＰ１１、ＰＰ１９ＰＰ２５和ＰＰ２６）在滋养细胞肿瘤中的表达情况。发现ＰＰ１１在恶性葡萄胎中的表达明显低于葡萄胎（Ｐ＜０．０５），ＰＰ２５和ＰＰ２６在绒癌中的表达低于葡萄胎（Ｐ＜０．０５），ＰＰ１９在各种滋养细胞肿瘤中皆有强表达，提示联合检测４种胎盘蛋白有助于滋养细胞肿瘤间的鉴别诊断。ＰＰ１９还是中间型滋养细胞肿瘤的优良标志物。

滋养细胞肿瘤核仁蛋白组成区研究

运用核仁蛋白组成区嗜银蛋白染色术检测了５例正常胎盘，１例合体细胞子宫内膜炎，２２例葡萄胎，１０例恶性葡萄胎，２例胎盘部位中间型滋养细胞肿瘤和１９例绒癌，发现恶性滋养细胞肿瘤的ＡｇＮＯＲ／核均数明显高于良性滋养细胞肿瘤（Ｐ＜０．００１），细胞滋养细胞中的ＡｇＮＯＲ／核均数亦明显高于合体滋养细胞（Ｐ＜０．００１）。同时发现良恶性滋养细胞肿瘤的ＡｇＮＯＲ颗粒分布类型也不同，良性病变以弥漫型为主，而恶性病变以颗粒型为主，表明主要用于细胞遗传学的ＡｇＮＯＲ技术在肿瘤病理学上有广泛的应用价值。

滋养细胞及其肿瘤的单克隆抗体研究进展

滋养细胞及其肿瘤的单克隆抗体研究进展郑颂国，许良中上海医科大学肿瘤医院病理研究室（上海２０００３２）滋养细胞及其肿瘤具有独特的内分泌功能，它们可以分泌各种酶、类固醇激素、糖蛋白，胎盘蛋白和结合蛋白等。根据形态和功能、滋养细胞可以分为细胞滋养细胞（Ｃｙ...

滋养细胞肿瘤中角蛋白和上皮细胞膜抗原的表达

应用抗上皮细胞膜抗原（ＥＭＡ）和角蛋白（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ，ＣＫ）等单克隆抗体对正常胎盘、葡萄胎、浸润性葡萄胎、胎盘部位中间型滋养细胞肿瘤（ＰＳＴＴ）和绒癌等进行免疫组织化学研究，结果发现 ＥＭＡ和 ＣＫ在正常滋养细胞及其肿瘤中皆有较高的表达，阳性率分别为９４％和 ９１％，并且在合体滋养细胞（ＳＴ）、细胞滋养细胞（ＣＴ）和中间型滋养细胞（ＩＴ）中皆有不同程度的表达，其中，ＥＭＡ的阳性表达在ＳＴ中９４％，ＩＴ中８９·６％，ＣＴ中９２．５％； ＣＫ的表达在ＳＴ中９１％、ＩＴ中５３．７％和ＣＴ中８５．１％，ＥＭＡ在ＩＴ的表达明显优于ＣＫ（Ｐ＜０．０１），提示ＥＭＡ是ＩＴ的优良标志物。

滋养细胞及其肿瘤的常用标志物

滋养细胞及其肿瘤的常用标志物郑颂国，朱雄增，许良中滋养细胞肿瘤分为水泡状胎块（ｈｙｄａｔｉｄｉｆｏｒｍｍｏｌｅ，ＨＭ），浸润性水泡状胎块（ｉｎｖａｓｉｖｅｍｏｌｅ，ＩＭ）、绒癌（ｃｈｏｒｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＣＣ）及胎盘部位中间型滋养细胞肿瘤（１）...

SRS淋巴瘤株癌基因表达筛选研究

研究ＳＲＳ鼠白血病／淋巴瘤克隆株（包括ＳＲＳ─８２亲系和ＳＡＣ─ⅡＢ２、ＳＡＣ─ⅡＣ３克隆株）癌基因和癌基因蛋白的表达，筛选此克隆株的癌基因表达谱型，为ＳＲＳ淋巴瘤株的实验性反义核酸治疗提供目标。用ＡＢＣ免疫组织化学方法筛选ＳＲＳ─８２亲系和ＳＡＣ─ⅡＢ２、ＳＡＣ─ⅡＣ３克隆株癌基因表达诺型。在ＳＲＳ克隆株中呈强表达的有ｃ─ｆｏｓ和ｃ─ｍｙｃ。ｃ─ｊｕｎ、ｒａｓ─ｐ２１和ｃ─ｅｒｂＢ─２呈中度表达，Ｐ５３和ｂｃｌ─２则不表达。同时用ＣＤ４和ＣＤ８细胞表面标记进研究，发现ＳＲＳ克隆株属于原始干细胞。结果提示：癌基因谱型的建立对ＳＲＳ淋巴瘤克隆株的实验性反义核酸治疗具有相当重要的作用，ｃ─ｆｏｓ和ｃ─ｍｙｃ可能是反义核酸治疗最好的癌基因靶。

PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌p53基因的突变

目的 分析原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ） 中ｐ５３ 基因第５ ～８ 外显子点突变发生及其意义。方法 运用聚合酶链反应－ 单链构象多态性分析方法（ＰＣＲＳＳＣＰ 分析法） 进行检测。结果 发现８ 例肺良性疾病均无点突变发生，４０ 例ＮＳＣＬＣ 中１９例（４７ ．５ ％ ） 有点突变发生，点突变发生与性别，年龄，组织学类型和组织学分级无明显相关性（ Ｐ＞ ０ ．０５） ，但与临床分期和淋巴结累及状态明显相关（ Ｐ＜ ０ ．０１ ，Ｐ＜ ０ ．０５） 。结论 结果表明ｐ５３ 基因点突变在ＮＳＣＬＣ 的发生和进展中起着相当重要的作用。

第五届全国临床细胞学学术会议在上海召开

第五届全国临床细胞学学术会议在上海召开中国抗癌协会临床细胞学专业委员会于１９９５年１０月９日至１２日在上海沪江饭店召开了“第五届全国临床细胞学学术会议”。上海医科大学附属肿瘤医院分子病理室主任、全国临床细胞学专业委员会主任委员许良中教授，副主任委员张...

健脾理气药诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的研究

目的观察健脾理气药的诱导凋亡效应,为其临床应用进一步提供依据。方法采用血清药理学方法研究中药的体外效应,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测含中药兔血清对肝癌细胞的抑制效应,以Annexin V标记法、DNA含量测定、电子显微镜方法检测含中药血清诱导凋亡及细胞周期阻滞效应。免疫组化法观察含中药血清对P53,P21^(WAF1)/CIP1)蛋白的影响,RT-PCR法观察含中药血清对P21^(WAF1/CIP1) mRNA表达水平的影响。结果含中药血清有一定的抑制肝癌细胞作用,其作用3d的抑制率为6.6％,作用6d的抑制率为36.2％。含中药血清作用2d诱导9.8％±4.0％的肝癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞于S期,并上调P53蛋白、P21^(WAF1/CIP1) mRNA及蛋白的表达。结论健脾理气药具一定的诱导凋亡及抑制肝癌细胞效应,上调p53,p21^(WAF1/CIP1)基因的表达为分子机制。

米非司酮对早孕蜕膜与绒毛转化生长因子β基因表达及血清肿瘤坏死因子α的影响

目的:了解米非司酮对早孕蜕膜和绒毛中转化生长因子β基因表达及血清肿瘤坏死因子α水平的影响,探讨来非司酮对母-胎界面及血清中细胞因子的调节作用。方法:应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定正常和服用米非司酮100 mg后的人早孕蜕膜和绒毛中转化生长因子β_1(TGF-β_1)及受体(TGF-β_1R)的基因表达;采用放射免疫法测定米非司酮应用前后血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:服药组蜕膜中TGFβ_1及受体的基因表达比对照组明显下降(P<0.05),而服药组绒毛中TGFβ_1及受体的基因表达与对照组比较没有显著差异(P>0.05)。服药后血清TNF-α水平明显高于服药前(P<0.05)。结论:米非司酮抗早孕作用是多环节的,可能通过多种机理协同参与促进流产的发生。其中,米非司酮通过降调节蜕膜中TGF-β_1与TGF-β_1R的转录,提高血清TNF-α的水平,从母-胎界面局部至外周,使免疫刺激和抑制失调,导致母体对胚胎排斥而不利于妊娠的维持。

原发性干燥综合征患者外周血CD4^+CD25^+CD127^(low/-) T细胞的检测及意义

目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血中调节性T细胞(Treg细胞)的表达,并对Treg细胞的新旧标记进行比较。方法采用流式细胞术检测25例未经治疗pSS患者和24例正常人外周血中CD4+CD25highT细胞、CD4+CD25+FOXP3+T细胞及CD4+CD25+CD127low/-T细胞的百分率,同时检测患者临床活动指标(如抗SSA和抗SSB抗体、免疫球蛋白、唾液和泪液流率、唇腺病理等)并进行相关性分析。结果未治疗pSS患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞和CD4+CD25+FOXP3+T细胞的百分率均显著低于正常对照组(均P<0.01),而CD4+CD25highT细胞水平与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);未治疗pSS患者和对照组外周血中,CD4+CD25+CD127low/-T细胞与CD4+CD25+FOXP3+T细胞的表达之间均存在显著正相关性(均P<0.01);这三群细胞均与患者的抗SSA和抗SSB抗体、免疫球蛋白水平无相关性(均P>0.05),与唾液和泪液流率也无相关性(均P>0.05),仅CD4+CD25+CD127low/-T细胞与患者的ESR水平呈正相关(r=0.594,P=0.025)。应用泼尼松(20mg/d)治疗3个月后这三群细胞的百分率均明显增加。结论pSS患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞的表达降低,并且与CD4+CD25+FOXP3+T细胞呈显著正相关性,提示CD127可能是pSS患者中Treg细胞研究中较好的表面标记。

外源性TNF-α基因克服多药耐药性的初步研究

目的：探索外源性细胞因子 TNF-α基因克服多药耐药（ multidrug resistance,MDR）的新途径。方法：以重组逆转录病毒为载体，将 TNF-α基因导入具 MDR表型的人乳腺癌细胞系 MCF- 7/Adr，经 G418抗性筛选获阳性克隆 MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2。以 PCR和 ELISA法检测目的基因的整合与表达。细胞计数法观察细胞生长速度的改变 , MTT法检测外源性 TNF-α基因的逆转 MDR作用，流式细胞仪分析细胞内 ADR积累的变化。结果： MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2细胞中有 TNF-α基因的整合和表达，病毒上清中 TNF-α含量分别为 1 737 pg/ml（ 106 cells/48 h）、 2 875 pg/ml。与阴性对照细胞相比， MCF- 7/Adr- TNF1与 MCF- 7/Adr- TNF2细胞的生长速度明显减慢，生长抑制率分别为 32.4％、 54.8％，对 ADR的耐药性明显降低，耐药逆转倍数分别为 5.2倍、 19.3倍，细胞内 ADR的积累明显增加。结论：外源性 TNF-α基因的导入能有效克服耐药性，增加细胞内药物的积累为其逆转耐药性的主要机制。

原发性脑内淋巴瘤临床病理、免疫组化、基因重排分析

目的 :研究脑内原发性恶性淋巴瘤临床病理、免疫组化及克隆性基因重排特征。方法 :对 6例脑原发性恶性淋巴瘤作了临床病理形态观察和免疫组化分析 (S P法 ) ,并用PCR技术单轮及半巢式扩增法进行IgH及TCR β基因重排检测。结果 :6例皆为非霍奇金B细胞淋巴瘤。瘤细胞大部分是中心或中心母细胞型 ,常伴浆样分化 ,往往围绕血管排列。PCR克隆性基因重排 ,IgH单轮法 (2 / 6例 )阳性 ,半巢式 (6 / 6例 )阳性 ,TCR β皆为阴性。结论 :脑淋巴瘤有其独特的临床病理特征。免疫组化及基因重排是诊断脑淋巴瘤重要工具。基因重排半巢式比单轮法优越 。

转白介素 2 基因促使 S180 细胞的贴壁生长

目的研究转ＩＬ┐２基因对Ｓ┐１８０细胞贴壁生长的影响。方法光镜及扫描电镜观察细胞生长的特征。结果转ＩＬ┐２基因的Ｓ１８０细胞为扁平状，并有伪足伸出，微绒毛丰富明显变细变长，并可稳定传代。其余株仍为悬浮生长，细胞呈椭圆球状。结论原为悬浮生长的Ｓ┐１８０细胞，经转入ＩＬ┐２基因后，部分细胞伸出伪足及发生微绒毛变化，是细胞贴壁生长的形态基础。

康莱特诱导具多药耐药表型的人乳腺癌细胞MCF7^(adr)凋亡及周期阻滞的研究

目的:观察康莱特对耐药细胞的作用及分子机制。方法:以敏感型乳腺癌细胞株 MCF7为对照,四氮唑蓝(MTT)法检测康莱特对耐药细胞株 MCF7^(adr)的抑制作用。以 Annexin V 标记法、DNA 含量测定法及电镜观察康莱特的诱导耐药细胞 MCF7^(adr)凋亡及周期阻滞的作用。免疫组化法检测康莱特对 MCF7^(adr)细胞 p53、p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的影响,RT-PCR 法检测康莱特对 MCF7^(adr)细胞 p21^(WAF1/CIP1)mRNA 表达水平的影响。结果:康莱特对 MCF7^(adr)细胞的半数抑制剂量(IC_(50))为26μ1/ml,与其对敏感细胞 MCF7的 IC_(50)(21μ1/ml)差异无显著性(P>0.05)。康莱特能诱导 MCF7^(adr)出细胞凋亡及细胞周期阻滞(G_0/G_1及 G_2/M 期),使 p53蛋白、p21^(WAF1/CIP1)mRNA 及蛋白表达水平升高。结论:康莱特对耐药细胞同样有效,这为其临床应用于已产生耐药性的肿瘤提供了依据。