数字人平台在解剖学翻转课堂教学中的应用

随着我国信息化教学水平不断提升,南京中医药大学购入了“中国数字人解剖系统”,数字人教学软件将解剖的三维结构由横断面中的解剖结构经过三维重建得来,所有的解剖结构都可以任意角度旋转,透明化,可以转变视角、多方位观察,还可以组合和拆分结构[1],学生能更直观、更形象地观察和学习;数字人平台上还有微课模块和自主学习模块,学生观察解剖结构后可以观看解剖学微课,便于进一步理解所学内容,自主学习模块可以让学生多加练习,巩固所学知识。

耳蜗前体细胞体外培养和诱导分化的实验研究

目的通过体外定向诱导耳蜗前体细胞分化,明确耳蜗前体细胞的位置取材,来源及增殖分化特性,建立完善的耳蜗前体细胞的培养体系。方法取耳蜗的Corti器位置,利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用神经巢蛋白(nestin)、溴脱氧尿嘧啶(Brdu)、MyosinⅦA、P27KIP1等免疫荧光方法,鉴定耳蜗前体细胞和由耳蜗前体细胞分化而来的内耳毛细胞和内耳支持细胞。同时进行细胞计数。结果从新生大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,诱导分化后的细胞经免疫荧光双标实验可表达Brdu、MyosinⅦA和P27KIP1阳性。流式细胞仪细胞计数后,发现前体细胞向内耳毛细胞诱导分化的数量较少,向支持细胞分化的较多。结论从新生大鼠耳蜗分离的细胞是具有自我更新和分化潜能的前体细胞,可诱导分化为内耳毛细胞和内耳支持细胞。

耳蜗提取液诱导海马神经干细胞分化的实验研究

为探讨新生鼠耳蜗提取液对于诱导海马神经干细胞分化为内耳毛细胞的影响,采用无血清和单克隆培养方法,将新生鼠耳蜗部位的提取液加入离体的海马神经干细胞的培养液中。应用nestin、BrdU、NF200、GFAP、MyosinⅦA和P27KIP1免疫荧光染色,观察神经干细胞的形态及分化而来的神经元、神经胶质细胞、内耳毛细胞和内耳支持细胞的形态,并检测由海马神经干细胞分化而来的细胞数量。结果表明海马神经干细胞在无血清培养下,可形成nestin阳性细胞球。但在诱导液中加入耳蜗提取液后,免疫荧光染色可见NF200、GFAP、MyosinⅦA和P27KIP阳性细胞。结果提示在耳蜗微环境的作用下海马神经干细胞除了向神经元和神经胶质细胞方向分化外,还可向内耳毛细胞和支持细胞方向分化。

当归补血汤对感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后细胞凋亡的影响

目的探讨感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后干细胞凋亡的时程特点及当归补血汤的抗凋亡作用。方法分离胚胎大鼠Corti器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定。建立感音神经性聋大鼠模型,将其分为耳蜗干细胞移植组(45只)、当归补血汤干预组(45只)及对照组(35只),分别将耳蜗干细胞悬液、含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液和生理盐水移植入三组大鼠耳蜗鼓阶,于移植后1、3、5、10、15天采用原位末端标记法结合流式细胞仪及免疫荧光方法对三组动物干细胞凋亡情况进行定量分析。结果移植后1、3、5、10、15天耳蜗干细胞移植组的耳蜗干细胞凋亡率分别为27.84%、49.37%、44.78%、39.37%、34.82%,当归补血汤干预组分别为18.35%、26.92%、23.18%、21.38%、18.19%,细胞凋亡在移植后3～5天达到高峰;当归补血汤干预组各时间点凋亡率均明显低于耳蜗干细胞移植组(P<0.05)。结论感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后3～5天是干细胞凋亡的高峰期;当归补血汤具有抗移植耳蜗干细胞凋亡的作用。

当归补血汤含药血清体外诱导耳蜗干细胞的增殖分化

目的：观察当归补血汤对耳蜗干细胞体外诱导分化的影响,并探讨浓度对其的影响。方法：分离新生大鼠Corti器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定。采用不同剂量当归补血汤进行诱导分化后,采用MyosinⅦA、P27^(KIP1)免疫荧光方法,鉴定内耳毛细胞和支持细胞,并进行细胞计数。结果：当归补血汤细胞诱导分化的内耳毛细胞和内耳支持细胞数量明显较对照组多,其中剂量为0．5 g/ml组向内耳毛细胞的分化比例最高。结论：当归补血汤可以提高耳蜗干细胞体外分化为内耳毛细胞和支持细胞的数量。其中剂量0．5 g/ml组向内耳毛细胞的分化数量较高。

蒺藜皂苷诱导SD新生大鼠海马神经干细胞分化的实验研究

目的探讨蒺藜皂苷对于诱导SD新生大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响作用以及蒺藜皂苷培养液浓度变化对其的影响。方法采用无血清和单克隆培养方法,将蒺藜皂苷加入离体的海马NSCs的培养液中,应用Nestin、BrdU、NF200、GFAP免疫荧光染色观察NSCs的形态及分化而来的神经元、神经胶质细胞形态,并检测由海马NSCs分化而来的细胞的数量。结果海马NSCs在无血清培养下,可形成Nestin阳性细胞球。在诱导分化后,免疫荧光染色可见NF阳性细胞、GFAP阳性细胞,而其中20mg/kg蒺藜皂苷干预组海马NSCs向神经元的分化比例最高。结论在蒺藜皂苷的作用下,海马NSCs向神经元分化的数量增多。

当归补血汤对耳蜗干细胞鼓阶内移植治疗药物性感音神经性耳聋大鼠增效作用研究

目的:观察当归补血汤对耳蜗干细胞移植治疗感音神经性耳聋大鼠增效作用。方法:感音神经性耳聋大鼠分为耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组和空白对照组3组。体外培养耳蜗干细胞进行内耳移植,耳蜗干细胞移植组将耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,当归补血汤组将含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,空白对照组移植生理盐水。分别于术后1、3、6和12个月采用听觉脑干诱发电位方法检测模型大鼠的听力恢复情况,处死大鼠,通过免疫荧光染色方法观察移植的耳蜗干细胞在内耳存活、分化和迁移情况。结果:从E14大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化悬浮生长的Nestin阳性细胞团,Brdu表达阳性,说明是具有自我更新和增殖潜能的干细胞。免疫荧光检测发现在耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组在移植针道两侧可见移植的干细胞,有些还迁移到基底膜区。存活的细胞部分呈My-osinⅦA阳性染色。与耳蜗干细胞移植组比较,当归补血汤组MyosinⅦA阳性染色细胞数量较多,差异有统计学意义(P<0.05)。听觉脑干诱发电位结果显示当归补血汤组的感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复情况较耳蜗干细胞移植组和对照组好,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经体外培养的耳蜗干细胞移植入内耳鼓阶后能够存活和迁移,并分化为内耳毛细胞;当归补血汤可以提高耳蜗干细胞分化为内耳毛细胞的比例,并促进感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复。

帕金森病大鼠移植神经元存活与白藜芦醇浓度的量效作用

目的:观察经白藜芦醇培养的胚鼠腹侧中脑组织移植至帕金森病大鼠模型脑纹状体神经元的凋亡情况,同时探讨白藜芦醇浓度的影响。方法:实验于2004-03/2006-01在南京中医药大学解剖实验室完成。①用神经毒剂6-羟基多巴胺单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区和黑质致密部建立帕金森病动物模型。②实验分为白藜芦醇培养组和对照组。白藜芦醇培养组又分为3个亚组:20,40,60mg/L组,每组各9只,分别将胚鼠腹侧中脑组织预置于20,40,60mg/L白藜芦醇培养液中;对照组9只,将腹侧中脑组织预置于DMEM营养液中。③预置12h后移植至大鼠左侧纹状体尾壳核头部。④于移植后5,10,15d将动物处死,采用原位末端标记法结合流式细胞术及免疫组织化学方法对移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析。结果:①脑纹状体组织观察酪氨酸羟化酶免疫组织化学结果:白藜芦醇培养组和对照组纹状体移植针道和针道周围都可见大量酪氨酸羟化酶阳性细胞;细胞计数显示白藜芦醇培养组的酪氨酸羟化酶阳性细胞数量较对照组多(P<0.01);白藜芦醇培养组中,40mg/L白藜芦醇组中的存活的酪氨酸羟化酶阳性细胞数量较20mg/L组和60mg/L组多([5d:(4804.77±427.37)比(3069.89±148.95),(3038.20±118.95)个/200倍视野;10d:(4608.97±274.64)比(2850.83±48.06),(2875.92±210.54)个/200倍视野;15d:(4217.42±325.93)比(2623.39±350.68),(2568.39±49.67)个/200倍视野;P<0.01]。②脑纹状体组织观察原位末端标记法结果:白藜芦醇培养组较对照组移植神经元凋亡细胞数减少;白藜芦醇培养组中,40mg/L白藜芦醇组中的凋亡细胞数量少于其他两组(P<0.01)。③脑纹状体组织流式细胞仪检测结果:白藜芦醇培养组较对照组移植神经元凋亡率降低。结论:白藜芦醇具有促移植神经元存活作用,作用效果与培养液中白藜芦醇含量有关。

人体解剖学混合教+学模式教学设计应用与实践

在中医院校护理专业学生人体解剖学教学中进行混合式教学模式的探索和改革,借助数字人信息平台,微课视频,临床案例分析等多种方式实施混合教+学模式,教学设计以病例引入,进而划分为5大知识点引导学生进行自主学习,探索混合式教学改革的效果同时进行效价分析,研究一个适合中医院校实际情况的高素质医学人才的解剖学教学培养模式。

微课在人体解剖学翻转课堂教学中的应用

随着信息化和网络技术的普及,针对中医院校学生人体解剖学教学中存在的问题,进行微课翻转课堂模式探索和改革,取得了良好的教学效果,并提高了学生的自主学习能力和创新能力。该文对此展开研究,以期助推高校未来发展。

丹参注射液促帕金森病移植神经元存活的实验研究

目的 研究丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。方法 用神经毒剂 6羟基多巴胺 ( 6 OHDA)单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区 (VTA)和黑质致密部 (SNC)建立动物模型。实验分胚鼠腹侧中脑组织 (VM)移植组、丹参注射液干预组和空白对照组。采用原位末端标记法 (TUNEL)结合流式细胞术及免疫组化方法 ,对 3组移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析 ,观察丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。结果 根据TUNEL、酪氨酸羟化酶 (TH)染色和流式细胞仪检测结果 ,丹参注射液干预组较VM移植组移植神经元凋亡率降低 ,凋亡细胞数减少 ,纹状体移植针道和针道周围都可见大量THir阳性细胞 ,而且THir阳性神经元数量明显增多。结论 丹参注射液对帕金森病移植神经元具有促存活作用。

大鼠胚肾组织促帕金森病移植神经元存活的实验研究

目的 :探讨大鼠胚肾组织对帕金森病移植神经元的促存活作用。方法 :用神经毒剂 6 OHDA单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区 (VTA)和黑质致密部 (SNC)建立动物模型。实验分 3组 :A组将胚鼠腹侧中脑组织 (VM )预置于胚肾组织培养液中 ;B组将VM组织预置于胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)营养液中 ;C组将VM组织预置于DMEM营养液中。 6h后移植 ,于移植后 1、4、7d将动物处死 ,采用原位末端标记法 (TUNEL)结合流式细胞术及免疫组织化学方法对 3组移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析。结果 :根据TUNEL、酪氨酸羟化酶 (TH)染色和流式细胞仪检测结果 ,A、B移植组较C移植组移植神经元凋亡率降低 ,凋亡细胞数减少 ,纹状体移植针道和针道周围都可见大量TH阳性细胞 ,而且TH阳性神经元数量明显增多。另外 ,A移植组和B移植组TH阳性神经元和凋亡细胞数比较也存在统计学差异。结论 :胚肾组织分泌物对帕金森病移植神经元具有促存活作用 ;胚肾组织培养液较单一生长因子作用好。

胚鼠腹侧中脑组织联合胚肾组织脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的 :观察胚肾组织对DA细胞的作用 ,为临床治疗PD提供实验依据。方法 :采用 6-OHDA损毁黑质区和腹侧被盖区制作成功的PD大鼠模型 46只。随机分组 :实验组 1:分为VM 1组 (胚VM组织和胚肾组织联合培养移植组 ;N =6)和VM2组 (单纯VM组织培养移植组 ;N =6)。分别取 14天和 18天大鼠胚VM和肾组织 ,制备成约 (1～ 1.5 )× 10 5个细胞的细胞悬液 ,植入PD大鼠毁损侧尾壳核内。移植后 1天 ,行TUNEL、TH染色和流式细胞仪检测。实验组 2 :分为VM单独移植组 (singleVM组 ,N =12 ) ;VM和胚肾组织联合移植组 (Co移植组 ,N =12 ) ;空白对照组 (N =10 )。取 14天和 18天的胚VM和肾组织 ,制备胚VM细胞悬液 ,同时将肾组织修成 0 .2mm3的组织块。singleVM组每只动物分两点植入 9μlVM细胞悬液 ;Co移植组每只动物亦植入 9μl的VM细胞悬液 ,留针 10分钟后再植入0 2mm3的胚肾组织块。动物分别存活 3、6个月 ,存活期间用APO诱导 ,观察旋转行为行TH和HE染色。结果 :实验组 1:TH染色显示 ,移植后 1天VM 1移植组和VM 2移植组纹状体针道部位有大量THir阳性细胞 ,前者较后者THir阳性细胞数显著增多 (P <0 .0 5 )。TUNEL法显示移植后 1天VM1移植组和VM2移植组纹状体针道部位有大量TUNEL阳性细胞。

盲推班解剖学教学方法初探

目前高等中医盲校学生基础解剖教育一直沿用西医基础课程教育的培养模式,但随着解剖课程的发展和解剖学分支的研究进展以及盲校学生自身的特点,课堂理论教育和实践教育都不再能满足现代中西医临床科学的迅猛发展,这已成为目前高等中医盲校解剖教育面临的严峻问题。文章针对中医药盲校高等解剖教育现状,提出一些新的观点和点滴体会,旨在为高等中医盲校解剖教育顺应时代及世纪跨越提供思路。

内耳干细胞分离培养及鉴定的实验研究

目的:明确内耳干细胞的取材、培养方法及鉴定方法,观察内耳干细胞的形态。方法:取前庭椭圆囊处上皮;大鼠内耳内螺旋沟;内耳的Corti器位置;利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用Nestin、Brdu免疫荧光方法,鉴定内耳干细胞。同时进行细胞计数。结果:从新生大鼠内耳分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,免疫荧光实验可表达Brdu阳性。其中内耳的Corti器位置取材组Nestin阳性细胞团的直径和其他两组存在统计学差异。而打散后的细胞团中Brdu阳性细胞数量较多,是内耳干细胞的最佳取材位置。结论:从新生大鼠前庭椭圆囊处上皮、大鼠内耳内螺旋沟、内耳的Corti器位置可分离出内耳干细胞,其中内耳的Corti器是内耳干细胞的最佳取材位置。

胚鼠腹侧中脑和胚肾联合移植治疗Parkinson病的实验研究

为了提高移植多巴胺(DA)能神经元的存活率和促进神经元生长,将胚鼠腹侧中脑和胚肾联合移植入Parkinson病(PD)模型大鼠脑内,检测胚肾对移植DA能神经元的影响。先用神经毒剂6 OHDA损毁大鼠左侧中脑被盖腹侧区和黑质致密部建立PD动物模型,再将胚脑的腹侧中脑(A组)、胚脑的腹侧中脑和胚肾(B组)分别移植入左侧纹状体尾壳核,C组为空白对照。于移植后3d、1月、3月将动物处死,采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化法观察3组动物移植部位DA能神经元的存活和生长状况。在移植部位可见B组较A组的TH阳性神经元和纤维的数量明显增多,C组的移植部位未见TH阳性神经元和纤维;A、B两组的移植针道及其周围也有TH阳性神经元和纤维;B组的TH阳性神经元数量、体积和神经纤维的密度均大于A组。移植1个月和3个月后,A、B两组大鼠的旋转行为均较C组减少(P<0. 05)。以上结果提示胚肾具有良好的神经营养作用,能促进移植DA能神经元的存活和生长。

双根清脑颗粒对VD模型大鼠行为学与脑微血管内皮细胞ICAM-1表达影响的实验研究

目的:观察双根清脑颗粒对VD模型大鼠行为学与脑微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响,探讨双根清脑颗粒治疗VD的机理。方法:从颈外动脉插管缓慢注入同种血栓栓子造成VD大鼠模型。中药组以双根清脑颗粒干预,模型组、对照组、正常组给予生理盐水。Moriss水迷宫观察隐匿平台获得时间与大鼠空间搜索时间;免疫组织化学方法检测大鼠脑微血管ICAM-1的表达。结果:Moriss水迷宫试验发现,与模型组相比,中药组隐匿平台获得时间明显缩短(P<0.05),大鼠空间搜索次数亦明显增多(P<0.05)。免疫组织化学检测表明:与模型组相比,无论是1天,还是3天、7天、14天组,中药组均能有效降低VD模型大鼠脑微血管ICAM-1的表达(P<0.01)。结论:双根清脑颗粒可改善VD模型大鼠的学习与记忆的功能,其机制与下调VD模型大鼠脑微血管内皮细胞ICAM-1表达有关。

混合式教学在系统解剖学神经系统中的实践

以“教为中心”的传统教学和“以学为中心”的现代教学各有优劣,混合式教学是一种将它们的优势有机结合的教学新模式。文章以系统解剖学的神经系统为例,依托知行医苑-“混合式教(导)+学”的智能教学平台,从课前设计、课堂教学和课后反馈三方面进行设计,不仅强化了学生对基础知识的应用,更能培养学生的临床思维能力、自主学习能力、实践操作能力、团队协作能力和语言表达能力等,值得推广。

青蒿鞣质抗单纯疱疹病毒机理初探

目的 探讨青蒿鞣质 (CTA)抗单纯疱疹病毒 2型 (HSV- 2 )的作用机理。方法 采用细胞病变效应 (CPE)抑制法和MTT法 ,以阿昔洛韦 (ACV)为阳性对照药物 ,研究青蒿鞣质在体外对HSV -2的直接杀灭、病毒感染阻断、不同时间感染后的CPE抑制效果。结果 CTA对病毒具有明显的直接杀灭作用 ,可以阻断病毒的吸附过程和抑制病毒在细胞内的复制 ,而且CTA对病毒的抑制作用受病毒吸附时间的影响很小 ,具有明显的治疗作用 ,其效果与阳性对照药物无环乌苷 (ACV)相当。结论 CTA体外抗HSV 2作用可以通过多种途径发挥作用。