基于Nrf2通路探讨环黄芪醇调控H_(2)O_(2)致HT22细胞氧化应激损伤的作用

目的:探讨环黄芪醇对H_(2)O_(2)处理的HT22细胞氧化应激损伤的保护作用,并对其潜在机制进行研究。方法:首先采用MTT法检测经不同浓度环黄芪醇处理的HT22细胞活性差异,对环黄芪醇的有效浓度进行筛选。将细胞分为5组,其中空白组和H_(2)O_(2)组不加入环黄芪醇,其余3组根据筛选结果分别加入不同浓度的环黄芪醇(50、75、100μmol/L)培养24 h。然后除空白组外,其余4组均加入H_(2)O_(2)作用4 h。采用DCFH-DA活性氧探针检测各组细胞中ROS的生成水平;免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的入核情况;蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果:本实验中,使用环黄芪醇作用于细胞的有效浓度分别为50、75、100μmol/L。随着环黄芪醇浓度的增加,环黄芪醇的保护作用也随之增强。环黄芪醇可抑制细胞中ROS的产生,促进Nrf2的入核,降低凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax的表达,增加CleavedCaspase-3、Bcl-2的表达,减少细胞色素C的释放,并表现出浓度依赖性。结论:环黄芪醇对H_(2)O_(2)导致的HT22细胞的氧化应激损伤呈现出保护作用,这种保护作用可能是通过激活Nrf2通路来实现的。

哈巴俄苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻神经炎症诱导的神经元损伤

目的研究哈巴俄苷对神经炎症诱导神经元损伤的作用。方法采用MTT检测血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)和哈巴俄苷对小鼠小胶质BV2细胞活性的影响;观察BV2细胞的形态变化;检测细胞上清液中炎症因子水平;采用免疫荧光检测核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)核易位以及CD86、髓系细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)的表达;采用Western blotting检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(molecule myeloid differentiation factor 88,MyD88)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达。分别使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和TLR4抑制剂(TAK-242)进一步验证哈巴俄苷的作用机制。建立BV2-HT22细胞共培养模型,检测线粒体膜电位、细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达,研究哈巴俄苷对神经炎症引起的神经元损伤的影响。结果Ang II显著上调BV2细胞TLR4、My D88、IL-1β、TNF-α和iNOS蛋白表达(P<0.01、0.001),促进NF-κB p65入核(P<0.001),调节小胶质细胞表面炎症标志物CD86和TREM2的表达(P<0.05)。哈巴俄苷和TAK-242可逆转Ang Ⅱ或LPS诱导的BV2细胞的作用(P<0.05、0.01、0.001)。此外,哈巴俄苷可显著下调BV2-HT22共培养模型HT22细胞中凋亡相关蛋白的表达(P<0.01、0.001),抑制HT22细胞凋亡(P<0.05、0.001)。结论哈巴俄苷可能通过抑制Ang Ⅱ诱导的BV2细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活来减轻炎症反应,进而缓解炎症引起的神经元细胞的凋亡。

补肾调经方在种植窗期经STAT3信号通路改善超促排卵小鼠胚胎着床的作用及机制

目的观察补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠种植窗期子宫内膜信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响,探讨其改善胚胎着床的作用及机制。方法昆明小鼠60只,随机分为模型组、补肾调经方组和正常组,每组20只。妊娠第4天每组处死10只小鼠,放射免疫法检测血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平,Western blot法检测子宫内膜白血病抑制因子(LIF)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(P-STAT3)蛋白的含量,免疫组化法检测子宫内膜瘦素及瘦素受体(OB-R)的表达。妊娠第8天处死各组剩余小鼠,观察平均胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠血清E_2降低(P<0.05),P升高(P<0.01);子宫内膜LIF、P-STAT3的含量下降(P<0.01),内膜上皮细胞瘦素及OB-R蛋白的表达降低(P<0.01);平均胚胎着床数减少(P<0.01)。与模型组比较,补肾调经方组小鼠血清P降低(P<0.05);子宫内膜LIF、P-STAT3蛋白的含量升高(P<0.01),内膜上皮细胞瘦素表达增加(P<0.05);平均胚胎着床数增多(P<0.01)。结论补肾调经方可改善COH小鼠胚胎着床,其机制可能与调控种植窗期子宫内膜STAT3信号通路相关蛋白有关。