山茱萸水提物对Aβ_(25-35)诱导阿尔茨海默病小鼠脑损伤和神经炎症的作用

探究山茱萸水提物对β-淀粉样蛋白片段_(25-35)(β-amyloid protein_(25-35),Aβ_(25-35))诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)小鼠脑损伤和神经炎症的作用,为山茱萸治疗AD提供实验依据。将60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药石杉碱甲组(0.2 mg·kg^(-1))以及山茱萸水提物低(1.3 g·kg^(-1))、中(2.6 g·kg^(-1))、高(5.2 g·kg^(-1))剂量组,除假手术组外,其他组采用Aβ_(25-35)侧脑室注射的方法构建AD动物模型,之后灌胃给药24 d。在动物解剖前1周进行行为学检测;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察海马区神经元形态;流式细胞术检测小鼠原代海马细胞凋亡水平;ELISA试剂盒检测小鼠脑组织中β-淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ1-42)及磷酸化微管相关蛋白Tau(phosphorylated microtubule-associated protein Tau,p-Tau)的水平;免疫荧光及Western blot检测小鼠脑组织中相关蛋白的表达;MTT法检测山茱萸中化合物对Aβ_(25-35)诱导N9细胞损伤的作用;分子对接分析咖啡酸、反式对羟基桂皮酸、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚与Aβ前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)之间的相互作用。山茱萸水提物通过增加Aβ_(25-35)诱导小鼠自主活动时间、自主交替率、偏好系数和辨别系数改善了其学习记忆能力,并通过升高脑组织中白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达水平,降低Aβ1-42、p-Tau、IL-6、TNF-α、胱天蛋白酶3(cysteine aspartate-specific protease 3,caspase-3)、胱天蛋白酶9(cysteine aspartate-specific protease 9,caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平,减少胶质细胞活化数量,显著减轻了Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤和神经炎症。细胞实验结果显示马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚可改善Aβ_(25-35)诱导N9细胞损伤,分子对接结果表明咖啡酸、反式对羟基桂皮酸、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚与APP有较好的结合活性,与IL-6、TNF-α结合较弱。山茱萸水提物通过减少脑内细胞凋亡和胶质细胞活化数量,降低炎症因子表达水平来改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的认知功能障碍和脑损伤。其中咖啡酸、反式对羟基桂皮酸、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚可能是山茱萸发挥抗AD作用的物质基础。

基于线粒体融合分裂探究山茱萸及Cornuofficinaliside G对Aβ_(25-35)诱导AD小鼠神经元突触损伤的影响

目的:探究山茱萸及化合物Cornuofficinaliside G(CorG)对β淀粉样蛋白片段25-35(Aβ_(25-35))见图18。诱导阿尔茨海默症(AD)的干预作用。方法:MTT法检测不同浓度山茱萸提取物和化合物CorG对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的影响;体外实验选用雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、石杉碱甲组(0.2 mg/kg)、山茱萸组(2.6 g/kg)、CorG组(20 mg/kg)。除对照组采用脑部注射0.9%氯化钠溶液,其余组脑部注射Aβ_(25-35)(200μmol/L)构建AD模型;灌胃24 d后,检测行为学指标,观察小鼠海马神经元、突触和线粒体病理变化;检测脑组织氧化应激相关指标和海马突触和线粒体融合分裂相关蛋白的表达。结果:山茱萸提取物和化合物CorG能显著增加Aβ_(25-35)诱导PC12损伤细胞的细胞活力;并且山茱萸和CorG显著增加AD小鼠的认知功能;减缓神经元固缩、丢失和线粒体及突触损伤;改善氧化应激及线粒体融合分裂蛋白表达。结论:山茱萸和CorG可能通过调节线粒体融合分裂和氧化应激来改善Aβ_(25-35)诱导AD小鼠的认知功能障碍和突触损伤。