柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白Et RON2 L1-2特性与功能初步分析

为研究柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(RON2)同源分子——Et RON2 L1-2的分子特性与功能,利用实时荧光定量PCR、Western blot、入侵抑制试验、间接免疫荧光试验以及双分子荧光互补实验(BiFC)等方法分析其生物学特征。结果发现Et RON2 L1-2蛋白序列与Et RON2仅有29.69%的同源性,转录水平和蛋白水平均在第二代裂殖子阶段最高。抗r Et RON2 L1-2抗体对子孢子入侵细胞有明显抑制作用。Et RON2 L1-2蛋白主要分布于经PBS孵育子孢子的胞质和表面,并分布于经完全培养基孵育或入侵DF-1细胞后2 h子孢子的顶端;其表达量在滋养体和未成熟裂殖体增加,且在带虫空泡膜也有分布;在第二代裂殖子中主要分布于整个胞质。Et RON2 L1-2与柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原4(AMA4)之间存在互作关系。

分光光度法与活菌计数法测定副鸡禽杆菌菌液浓度的相关性研究

为建立一种快速测定副鸡禽杆菌菌液浓度的方法,本研究选取副鸡禽杆菌血清A、B和C型代表性菌株(CVCC254株、CVCC257株和CVCC256株),培养制备菌液,分别在450、540、600、650 nm波长测定其吸光度值(OD值),同时测定活菌计数值。回归分析两组数据,获取回归方程及标准曲线,分析回归方程的测定系数(R^(2))和标准曲线的点线离散度,确定最适测定波长。再选取不同培养时间点(10、12、14、16、18、20 h)的菌液,在最适波长下测定其OD值并代入回归方程获取活菌数,同时采用活菌计数法获取活菌计数值,将两组数据使用SPSS 17.0软件进行统计分析,进一步验证分光光度法与活菌计数法测定菌液浓度的相关性。结果显示,3株菌液在600 nm波长测定的OD值与活菌计数值之间均呈最佳的线性关系,确定其菌液浓度最适测定波长均为600 nm,其回归方程分别为y=14.302x-0.1441(R^(2)=0.9962)、y=14.464x-0.2746(R^(2)=0.995)和y=14.681x-0.01326(R^(2)=0.9989),y为活菌计数值(×10^(8)CFU/mL),x为OD600值。3株培养至衰退期前的菌液在600 nm波长测定的OD值代入回归方程计算获得的活菌数值与其活菌计数值无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,衰退期前副鸡禽杆菌菌液的分光光度法与活菌计数法具有良好的相关性。因此,该分光光度法可用于快速测定衰退期前副鸡禽杆菌菌液浓度。

四川省炉霍县牦牛源蜱传斑点热群立克次体和无形体分子检测及遗传进化分析

【目的】了解四川省炉霍县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体(Spotted fever group Rickettsia,SFGR)和无形体的感染情况。【方法】在炉霍县6个乡采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后提取蜱基因组DNA,采用PCR技术分别扩增蜱ITS⁃2、SFGR OmpB和无形体16S rRNA基因部分片段,对阳性产物进行测序、比对及构建进化树,从而确定蜱的种类及其SFGR和无形体的感染情况。【结果】在820份蜱样本中,只包含青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensisus,29/820)和微小扇头蜱(Rhipicephalus micro⁃plus,791/820)。总共有408份蜱样本被检出SFGR,只检出Candidatus Rickettsia longicornii 1种SFGR,总感染率为49.8%(408/820)。本次调查的6个乡均检出SFGR,不同乡之间SFGR感染率的差异极显著(χ^(2)=111.524,P=0.000<0.01)。青海血蜱和微小扇头蜱的SFGR感染率分别为44.8%(13/29)和49.9%(395/791),差异不显著(χ^(2)=0.292,P=0.589>0.5)。有5个乡检出无形体,共检出Anaplasma bovis、A.marginale、A.platys和A.phagocytophilum 4种无形体,总感染率为30.9%(253/820),不同乡之间蜱样本无形体感染率差异极显著(χ^(2)=139.825,P=0.000<0.01)。青海血蜱和微小扇头蜱的无形体感染率分别为6.9%(2/29)和31.7%(251/791),差异极显著(χ^(2)=8.087,P=0.004<0.01)。SFGR与无形体混合感染率为18.8%(154/820)。【结论】炉霍县存在青海血蜱和微小扇头蜱,还携带SFGR和多种无形体,应做好当地蜱传斑点热群立克次体和无形体的防治工作。

四川畜间布鲁氏菌病流行形势与防治策略

布病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。为保护人民群众身体健康,保障畜牧业生产健康发展,进一步加大动物布病防治工作力度,提高防治能力和科学防治水平,本文对当前四川省布病流行情况、存在问题等进行全面、系统分析,提出科学的防治对策。

四川部分地区鸡球虫流行病学调查及虫种鉴定

为了解四川省部分地区养鸡场鸡艾美耳球虫的感染现状,于2021-2022年在四川省凉山州普格县、甘洛县、宁南县、喜德县、雷波县、西昌市太和镇以及资中、德阳、绵阳9个县市18个养鸡场内采集152份粪便样品,通过显微镜检查出球虫阳性样品10份,阳性率为0.07%.利用传统形态学鉴定和PCR等方法对出现球虫阳性的10个样品进行鉴定.结果显示,10个阳性样品均有多个引物扩增出阳性条带,其中除MY3和DY外,其余样品均与4株柔嫩艾美耳球虫分离株18S rRNA基因同源性关系最近,聚成一大支.所采集样品地区的养鸡场感染情况总体良好,个别鸡场出现阳性病例,均呈混合感染.

四川九龙县牦牛源蜱感染SFGR分子流行病学调查

为了解四川省九龙县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体(SFGR)的感染情况。采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后,提取蜱总DNA,PCR扩增蜱ITS-2基因及SFGRompA、ompB基因,并对扩得的阳性产物进行测序和构建进化树分析,从而确定蜱及其携带SFGR的种类。在九龙县3个乡镇共采集到蜱585只,其中微小扇头蜱占52.65%(308/585)、卵形硬蜱占32.99%(193/585)、锐跗硬蜱和西藏革蜱分别占8.89%(52/585)和5.50%(32/585)。所有蜱中有374只检出SFGR,总感染率为63.93%(374/585),其中半农牧区(70.60%)的感染率极显著的高于纯牧区(45.10%)(P<0.01)。本研究首次对九龙县牦牛体表寄生的蜱虫种类及SFGR流行情况进行了调查,蜱传SFGR感染率较高且感染的SFGR主要为饶氏立克次体。

牛羊细粒棘球蚴病现场快速检测方法的建立及应用

建立了一种基于恒温隔绝PCR(Insulated isothermal PCR,ii PCR)技术现场检测牛羊包虫病的方法.结果显示,该方法只能检出细粒棘球绦虫,对多房棘球绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、前后盘吸虫、日本血吸虫、金黄色葡萄球菌、伪结核杆菌无关病原不检出;检测下限为100个拷贝,重复性好.对55份牦牛源包囊样本和70份羊源包囊样本的检出率分别为61.8和4.3%,与文献报道的检测方法的符合率分别为100%;本研究建立的ii PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,从核酸提取到报告检测结果仅需1小时,操作方便,可现场使用,为牛羊包虫病的现场快速诊断提供有力的工具.

四川红原县牦牛隐孢子虫感染情况分子流行病学调查

为调查红原地区牦牛隐孢子虫感染情况,采用巢式PCR对采自红原县的216头份牦牛粪便进行了检测(其中包括腹泻粪便样本18份)。该地区牦牛隐孢子虫总感染率为14.8%,其中Cryptosporidium bovis感染率为3.7%,C.ryanae感染率为5.1%,C.andersoni感染率为6.0%,而腹泻样本并未检出隐孢子虫。以上结果表明,牦牛是隐孢子虫的天然宿主,但该实验中未见隐孢子虫和牦牛腹泻间存在明显相关性,隐孢子虫和牦牛腹泻之间的关系需要后续研究来进一步阐明。

气相色谱-串联质谱法测定鱼肉中毒死蜱及其代谢产物3,5,6,-三氯-2-羟基吡啶的残留量

采用气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）测定鱼肉中毒死蜱及其代谢产物3,5,6,-三氯-2-羟基吡啶（TCP）残留量。样品经1mol·L^-1盐酸-乙腈（1＋99）混合液提取,提取液于-20℃冷冻去除脂肪,浓缩近干,残渣用乙酸乙酯溶解后与N-甲基-N-叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺进行衍生反应,产物经净化后采用GC-MS/MS测定。毒死蜱和TCP的线性范围分别为2.0~2 000,1.0~1 000μg·L。鱼肉中毒死蜱和TCP的检出限（3S/N）分别为0.5,0.3μg·kg-1,测定下限（10S/N）分别为1.7,1.0μg·kg-1。加标回收率分别为84.6%~95.6%,73.8%~82.7%,测定值的相对标准偏差（n=6）分别小于10%,13%。

四川炉霍县牦牛源蜱种类的形态学及分子生物学鉴定

为鉴定采自炉霍县牦牛体表的蜱种类,使用体视显微镜观察蜱的形态特征,结合文献资料对蜱作形态学初步鉴定;提取蜱组织DNA,用PCR扩增蜱ITS2基因,将阳性产物测序、比对,构建分子进化树对蜱作分子生物学鉴定,运用SPSS软件对数据进行统计学分析。形态学和分子生物学鉴定结果表明,采集自炉霍县牦牛体表的蜱种类为微小扇头蜱和青海血蜱。

应用荧光定量PCR对日本血吸虫miRNAs表达量的研究

近来通过Solexa高通量测序鉴定出了大量日本血吸虫的miRNAs序列,为确定这些miRNAs在日本血吸虫不同生活史阶段的表达量,采用SYBR染料法和Race试剂盒相结合的荧光定量方法对虫卵、尾蚴、14d童虫、雄虫、雌虫阶段的m iRNAs表达量进行了检测分析,发现虫体不同阶段miRNAs表达差异巨大,其中虫卵阶段表达量最低,而虫体其他阶段有着各自的表达特点,同时也用Northern对荧光定量结果进行了进一步的验证。结果表明,这些miRNAs可能在日本血吸虫不同发育阶段的基因转录调控中起着重要作用。

应用荧光定量PCR对细粒棘球绦虫miRNAs在虫体不同发育阶段表达量的研究

为确定通过Solexa高通量测序鉴定出的大量细粒棘球绦虫miRNAs序列在不同生活史阶段的表达量。采用SYBR染料法和Race试剂盒相结合的荧光定量方法对原头节和生发层阶段的miRNAs表达进行了检测分析。结果表明:两阶段miRNAs表达差异较大,其中mir-71、mir-7、mir-1和mir-19在生发层阶段表达量较高,而let-7则在原头节阶段表达较高。说明这些miRNAs可能在细粒棘球绦虫发育阶段的基因转录调控中起着重要作用。

日本血吸虫内源性siRNAs的研究

为鉴定日本血吸虫体内是否存在内源性siRNA,采用生物信息学方法对成虫和14d童虫Solexa测序后得到的序列进行了分析,发现成虫和童虫中确实存在内源性siRNAs,而且所占比例和m iRNAs相当,说明内源性siRNAs可能对日本血吸虫基因转录起着重要调控作用。

运用Solexa高通量测序法鉴定日本血吸虫miRNAs

运用Solexa高通量测序法对日本血吸虫成虫以及14 d童虫小RNA进行测序,结果共鉴定出34条miRNAs,其中保守miRNAs16条,日本血吸虫特有的miRNAs 18条。该法避免传统克隆方法烦琐的程序,具有成本低,效率高的特点。

细粒棘球绦虫miRNAs的鉴定及分析

细粒棘球绦虫具有复杂的基因调控模式,在中间宿主和终末宿主体内具有截然不同的生物学特性。miRNA是真核生物内存在的非常重要的调控因子,本研究采用Solexa高通量测序技术,对G1株原头蚴mi-croRNAs进行了鉴定和分析,总共发现了108条miRNAs,其中26条属于保守家族,82条是细粒棘球绦虫特有。

普境安对细粒棘球绦虫虫卵的作用效果

为研究环境改良剂普境安对细粒棘球绦虫虫卵的作用效果,采用不同剂量组/时间段对阳性犬粪样本进行了处理。结果表明,100g·m^-2作用12h和24h对虫卵抑制效果最明显。结合四川省甘孜州自然环境特点,建议采用100g·m^-2作用24h,可显著抑制虫卵活力,降低人畜感染包虫风险。

南宁地区水牛球虫感染情况调查

为调查南宁地区水牛场中水牛球虫流行状况,通过对粪便中卵囊计数,对感染率和感染强度2项指标进行计算。调查结果显示,巴氏艾美耳球虫、牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫感染率较高,说明上述3种球虫感染较为普遍;而巴氏艾美耳、椭圆艾美耳以及阿拉巴马艾美耳球虫感染强度较高。调查结果对于研究制订水牛球虫病的预防和治疗措施有重要意义。

猪源结肠小袋纤毛虫培养、分子鉴定和显微观察

小袋纤毛虫病是一种人畜共患寄生虫病。本研究从浙江地区病猪盲肠内分离到了一株结肠小袋纤毛虫,通过RPMI1640培养基对其进行了体外培养,结肠小袋纤毛虫在28℃和37℃均能良好生长,在培养后第5天和第4天分别达到高峰值,虫体密度分别为1.60×104和2.31×104个·m L-1。显微镜下滋养体胞口、胞肛和食物泡结构明显,DAPI染色后大核明显呈哑铃型,且滋养体有大小差别明显的2种类型。18S r RNA基因PCR扩增、测序和聚类分析结果显示,猪源结肠小袋纤毛虫分离株存在2条明显不同的18S r RNA基因序列,序列间趋异性为0.6%,且该分离株序列与国外分离株间存在显著差异,在进化树上形成一独立的亚枝。在高倍显微镜下,滋养体内常见有许多生物活动,种类不明,16S r RNA基因PCR扩增到3条未知细菌序列,未知细菌16S r RNA基因序列与结肠小袋纤毛虫内微生物间的确切关系有待研究。

兽医寄生虫学教学存在的问题与改进措施

兽医寄生虫学是预防兽医学和临床兽医学的主要基础课程。但是，随着高等教育的改革与发展，我国高等院校寄生虫学教学课时呈逐渐减少的趋势，有些医学院校甚至取消了寄生虫学课程。

穿孔艾美耳球虫、点滴复膜酵母与兔腹泻的关系

为探讨穿孔艾美耳球虫、点滴复膜酵母与兔腹泻病的关系，用实验室分离到的穿孔艾美耳球虫和点滴复膜酵母分别进行了动物感染试验。试验兔在接种穿孔艾美耳球虫后第4～6天，明显出现饮水、食料和排粪量减少，其中第3组在接种后第12～14天出现了腹泻和死亡，腹泻率为50％，死亡率为25％；而试验兔在接种点滴复膜酵母后表现正常，无腹泻和死亡现象。试验结果表明，穿孔艾美耳球虫具有致病性，是导致兔腹泻的重要病原之一，而点滴复膜酵母不具有致病性，非兔腹泻病原。