蒲公英内生真菌的抗菌活性物质筛选

蒲公英中获得强抗菌活性的内生真菌,分析其次级代谢产物的化学结构,为新颖抗菌活性天然产物的发现奠定基础。通过滤纸片法筛选获得抗菌活性目标菌株,采用形态学和分子生物学方法鉴定真菌的种属,并采用质谱-分子网络技术预测真菌的次级代谢产物的化学结构。从21株形态各异的蒲公英内生真菌中筛选获得了1株抗菌活性较好的菌株2-7,粗提物对4种金黄色葡萄球菌在10μg/片浓度下抑菌圈为10.82~17.58 mm,其种属鉴定为Alternaria sp.,该真菌可代谢产生黄酮、甾体、生物碱、脂肪酸、丁内酯、萜类等化合物,其中黄酮分子簇中的部分母离子可能为潜在的新化合物。

一株海洋真菌与细菌共培养次级代谢产物的研究

对海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 43300共培养的次级代谢产物进行分离纯化与结构鉴定,综合运用多种色谱方法从共培养发酵产物中分离得到5个化合物,采用NMR等光谱方法并参照文献将其分别鉴定为吲哚-3-乙酸(1)、青霉酸(2)、diorcinol(3)、orcinol(4)和paraherquanide N(5)。同时采用质谱-分子网络及GNPS平台技术鉴定了3个吲哚生物碱类化合物notoamide B(6)、paraherquanide F(7)和paraherquamide E(8)。该研究表明,共培养是激活微生物沉默基因簇,发现抗生素类化合物的一种有效方法。

海洋真菌Talaromyces sp.HK1-18的嗜氮酮类化合物化学多样性研究

基于GNPS的质谱-分子网络策略是快速识别已知天然产物和发现新颖化合物的有效方法。本文利用分子网络技术研究了海洋真菌Talaromyces sp.HK1-18发酵产物中的嗜氮酮类化合物的化学多样性。综合采用硅胶柱色谱和高效液相色谱等色谱分离技术以及核磁共振和高分辨质谱等波谱解析技术从真菌HK1-18发酵产物中分离并鉴定了3个线型三环嗜氮酮化合物sequoiamonacins A~C (2a、2b、1);继而以其质谱为指导,从该真菌的全分子网络中提取了sequoiamonacin类嗜氮酮化合物的分子聚簇;通过解析该聚簇中各母离子的MS/MS (二级质谱)碎片,成功预测了7个嗜氮酮化合物的化学结构(3~9),其中sequoiamonacins E~J (4~9)为新化合物,并揭示了该类化合物的MS/MS裂解规律。化合物1具有一定的抗炎活性,其能抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中白细胞介素1α (IL-1α)的产生,质量浓度为12.5μg·mL^(-1)时,抑制率达29%。

1株海洋真菌Talaromyces sp.HK1-18次级代谢产物及其抗菌活性研究

目的研究1株分离于海南东寨港红树林自然保护区海桑(Sonneratia caseolaris)根际土壤的真菌Talaromyces sp.HK1-18的次级代谢产物及其抗菌活性。方法利用正、反相硅胶柱层析、凝胶柱层析和半制备高效液相色谱等色谱分离方法,对该菌的次级代谢产物进行分离纯化;利用核磁共振波谱以及查阅参考文献等方法,鉴定化合物的结构;采用最小抑菌浓度(MIC)法对化合物进行抗菌活性评价。结果从该真菌中分离获得8个化合物(1~8),结构分别鉴定为penicillide(1)、purpactin A(2)、vermistatin(3)、deoxyfunicone(4)、dankasterone A(5)、fortisterol(6)、过氧化麦角甾醇(7)、radiclonic acid(8)。结论化合物6为首次从Talaromyces属真菌中分离得到。化合物1和8对多药耐药金黄色葡萄球菌(S.aureus ATCC 43300)显示出较强的抑制活性,MIC值均为0.78μg/mL。化合物6对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(S.aureus ATCC 33591)显示出较强的抑制活性,MIC值为0.78μg/mL。

一株蒲公英内生真菌Epicoccum sorghinum 1-2次级代谢产物研究

运用硅胶柱、凝胶柱和半制备高效液相色谱等方法对一株蒲公英内生真菌Epicoccum sorghinum 1-2发酵产物中的次级代谢产物进行分离纯化,通过核磁共振谱(NMR)及质谱(MS)等现代波谱分析方法进行化合物的结构解析,并采用滤纸片法测定化合物的抗菌活性。最终从E.sorghinum 1-2的发酵产物中分离鉴定了7个化合物,分别为(4R*,5R*,6S*)-4,5-二羟基-6-(6'-甲基水杨酸氧基)-2-甲氧基甲基-2-环己烯-1-酮(1)、(4R*,5R*,6S*)-4,5-二羟基6-(6′-甲基水杨酸氧基)-2-甲基-2-环己烯-1-酮(2)、(4R,5R,6S)-4,5-二羟基-6-(6′-甲基水杨酸氧基)-2-羟基甲基-2-环己烯-1-酮(3)、(-)-gabosine E(4)、theobroxide(5)、3-氯代龙胆醇(6)和3-羟基苯甲醇(7)。其中化合物1~5是顶环氧菌素类化合物,化合物6和7是苯酚类化合物。化合物1和2为首次报道的新化合物,化合物6对金葡菌具有显著的抑菌作用。

2株海洋真菌共培养产青霉酸及其抗菌活性研究

目的研究2株海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6与Trichoderma reesei HK1-12共培养体系中的次级代谢产物变化及其抗菌活性。方法采用代谢组学方法分析共培养中的差异化合物,采用高效液相法对共培养中的青霉酸进行定性及定量分析,采用带毒培养基法和滤纸片法评价青霉酸的抗真菌及抗人类致病细菌活性。结果有97个差异化合物仅在真菌HK1-6与HK1-12共培养体系产生;真菌HK1-6在共培养刺激下分泌青霉酸的产量增加,较HK1-6纯培养时提高约1.2倍;青霉酸对真菌HK1-12和5株人类致病细菌均具有较强抗菌作用。结论共培养策略可以激活真菌某些沉默的代谢途径或提高某些代谢产物的产量,是挖掘海洋真菌次级代谢产物的有效途径。