生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷

目的建立检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量的生物发光方法,并利用该方法检测红细胞和不同再灌注处理心肌细胞内ATP的含量. 方法制备所需测定的细胞ATP提取液,采用荧光素-荧光素酶检测系统检测ATP含量,ATP的含量与系统中所发射的光子数成正比,发光强度越大,ATP含量越高,通过检测发光强度计算ATP的含量.结果通过对红细胞内ATP含量的测定,确定了测定细胞内ATP的最佳反应条件:pH=7.8,温度20～25 ℃,荧光素酶浓度3.0 mg/ml .利用确定的最佳条件对各种不同处理的心肌细胞内ATP浓度进行了检测,ATP检测结果与心肌功能的实验观察结果符合. 结论生物发光方法测定ATP含量方法简单、结果可靠,可以在短时间内得到检测结果,是一种检测细胞内ATP的有效方法.

核苷酸切除修复基因表达水平与肺癌易感性的关系

[目的 ]探讨核苷酸切除修复基因表达水平与肺癌易感性关系。 [方法 ]采用病例 对照分子流行病学方法 ,以RT PCR技术检测 98例原发性肺癌患者和 112名健康者外周血淋巴细胞核苷酸切除修复基因 (XPB、XPC、XPG、ERCC1)表达水平 ,比较基因表达水平与肺癌易感性的关系。 [结果 ]肺癌病例组 4种基因的表达水平均低于健康对照组 ,其中XPB和XPC表达水平在两组之间有显著性差异 ,吸烟人群中病例与对照组基因表达水平差异大于非吸烟人群与对照组的差异 ,低表达XPB和XPC的人群患肺癌的相对危险度分别是高表达人群的 2 .0 6和 2 .2 7倍。 [结论 ]低表达XPB和XPC的人群肺癌发病风险增高。

铸造工艺及合金元素对气缸套切削性能的影响

为提高铸铁气缸套的内在质量,改善其切削性能,降低加工成本,采用5t水冷冲天炉熔炼铁液,电炉保温的双联熔炼工艺,并采用合金光谱快速分析仪对铁液化学成分进行实时监控;利用金相显微镜对气缸套的原辅材料各合金元素对材质的微观组织和宏观特性的影响进行了分析。结果表明:调质过程中加入一定配比的Cr(0.25%)、Mo(0.40%)和Cu(0.3%)等合金元素,促使组织细化,可达到提高增碳率的目的;金属型离心铸造气缸套时铸件质量与水冷时间应相适宜限制了组织中D、E型石墨的形成;含钡孕育剂能够获得分布均匀,形态细长的A型石墨。原辅材料、铸造工艺、合金元素等是造成气缸套加工性能差异很大的主要因素。

活塞环槽的激光表面硬化研究

对活塞环槽表面的激光热处理工艺与机理进行了试验研究。结果表明:激光热处理后活塞表面硬度可达58HRC,使用寿命提高1.5倍以上,认为晶粒细化、马氏体高密度位错和固溶含碳量是获得活塞环槽超高硬度的主要原因。该工艺无需淬火介质,加工速度快、变形小,耐磨性好,易实现计算机控制,可进行大型零件局部表面及复杂零件和槽、孔、洞等特殊部位处理。

表面冶金形成低合金高速钢及其性能研究

为在低碳钢表面形成钼铬型低合金高速钢,用等离子表面冶金方法对低碳钢进行表面处理,获得了所希望的合金层表面,并对合金层表面成分、硬度、摩擦系数进行分析。结果表明:其表面成分接近冶金高速钢;深冷处理的试样表面硬度明显高于未经过深冷处理的合金层表面硬度;不同深冷处理试样的滑动摩擦因数基本相同,经深冷处理的试样比原试样的摩擦因数降低大约15%,且合金层中的碳化物细小、均匀、弥散,没有粗大的共晶莱氏体组织。

气缸套等离子多元共渗“等耐磨”处理可行性研究

基于对内燃机基本工作原理、机械设计优化理论知识以及对气缸套磨损主要失效形式较为深入的了解和分析可知,气缸套内表面上、下部位的实际磨损情况差别非常大。为使气缸套表面磨损均匀化,便于气缸套的维护维修,对气缸套等离子多元共渗"等耐磨"处理进行了试验研究。结果表明:改变扫描处理速度、距离、电流、时间等参数,可达到"等耐磨性"处理的目的。该工艺可提高处理速度而不降低处理质量,成本低,热变形小。

基于气缸套等离子多元共渗工艺试验研究

用高能等离子束在常压下快速扫描涂敷合金渗剂的柴油机气缸套内表面,可实现多元共渗+自激冷淬火复合硬化,并获得所希望的总硬化层深度和硬化层显微硬度;经磨损对比试验,等离子多元共渗气缸套的耐磨性以及配副活塞环耐磨性比硼铸铁气缸套都有显著提高。

S195球铁凸轮轴金属型铸造工艺

为切实解决好金属型寿命和铸件白口问题,研究制订了金属型铸造球铁凸轮轴工艺。实验表明,通过严格控制化学成分,采用自制的金属型涂料和采取必要的铸件出型缓冷措施,能够获得所希望的金相组织和力学性能,并有效地提高了金属型使用寿命。

双酚A对人胚肝细胞L-02的毒性作用研究

[目的]探讨双酚A对肝细胞L- 0 2的毒性作用及可能损伤机制。[方法] 1、10、5 0、10 0 μmol/L浓度的双酚A作用肝细胞L 0 2后,检测双酚A对肝细胞L-0 2的存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化、细胞凋亡及凋亡相关基因P5 3、caspase3mRNA表达的影响。[结果]双酚A处理后,肝细胞L 0 2的存活率随着双酚A浓度的增加而下降,在≥5 0 μmol/L浓度,细胞的存活率显著降低(P <0 .0 1)。双酚A诱导肝细胞L -0 2中的SOD含量降低(P <0 .0 1) ,GSH和MDA含量在1μmol/L明显降低(P <0 .0 5 ) ,而后随着剂量的增加升高明显(P <0 0 1)。CAT水平先随着剂量的增加而升高到10 μmol/L的(10 5 .68±9.63 )U/g蛋白,而后随着剂量的增加而显著降低(P<0 .0 1)。≥5 0 μmol/L浓度的双酚A能明显诱导肝细胞L 0 2凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升高(P <0 .0 1)。凋亡率从对照组的(8.16±0 .0 7) %上升到10 0 μmol/L的(17.2 0±1.2 5 ) % ,5 0、10 0 μmol/L浓度P5 3和caspase3mRNA表达分别是对照组的(1.42±0 .2 5 )、(1.65±0 .13 )、(1.41±0 .12 )和(1.77±0 .0 6)倍。[结论]双酚A对肝细胞L 0 2具有细胞毒性和氧化损伤作用,并能诱导肝细胞L 0 2发生凋亡和P5 3。

分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中三种氟喹诺酮类抗生素残留

采用沉淀聚合法,以诺氟沙星为模板分子,合成了对氟喹诺酮类(FQs)抗生素特异性识别的分子印迹聚合物(MIPs),其印迹因子为3.17,亲和位点总数为3.27μmol/g。以该MIPs做为固相萃取柱填料,建立了分子印迹固相萃取-高效液相色谱检测蜂蜜中三种FQs抗生素残留的方法。与Oasis HLB固相萃取柱相比,该分子印迹固相萃取柱(MISPE)具有更好的净化能力和更高的富集效率。最佳条件下,三种FQs抗生素的线性范围为0.125～12.5mg/kg,相关系数均大于0.999。方法的检出限(S/N=3)为9～12μg/kg,三种FQs抗生素的加标回收率为96.5%～104.1%,相对标准偏差不高于6.2%(n=5)。该方法有望用于蜂蜜中FQs抗生素残留的常规检测。

苏丹红Ⅰ分子印迹聚合物的制备及其性能评价

以苏丹红Ⅰ为模板分子,通过沉淀聚合法制备了一种对苏丹红Ⅰ具有特异性吸附的分子印迹聚合物。通过选择性评价和前沿色谱实验,评价了致孔剂的选择和用量、功能单体和模板分子的物质的量比对分子印迹聚合物识别性能的影响。实验结果表明:当以甲醇和乙腈的混合液(体积比为30∶10)为致孔剂,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,且功能单体和模板分子的物质的量比为8∶1时,分子印迹聚合物的印迹因子为2.32,亲和位点总数(Bt)为0.50μmol/g;将其作为固相萃取柱填料用于辣椒粉样品中痕量苏丹红Ⅰ的净化和富集,结果表明:苏丹红Ⅰ浓度在10～500μmol/L范围内时,呈现良好的线性关系(r=0.999);检出限为3.3μmol/L,加标回收率为95.87%～98.41%,相对标准偏差低于3.1%。该方法有望用于辣椒粉样品中苏丹红Ⅰ添加剂的常规检测。

双酚A对人胚肝细胞DNA损伤和修复功能的影响

[目的]研究双酚A(BisphenolA,BPA)对人肝L-02细胞DNA损伤修复功能的影响。[方法]分别以1、10、50、100μmol/LBPA和100μmol/LBPA+30μg/LVitC处理L-02细胞,比较处理和未处理的人胚肝L-02细胞在DNA损伤程度、切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、错配修复hMSH2基因(hMSH2)、DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)及O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)表达水平的差异。每组细胞数均为1×106个/ml。[结果]BPA处理后,彗星试验显示BPA在低剂量(10μmol/L)时即具有DNA损伤作用(P<0.05),随着剂量增大,DNA损伤效应增加。100μmol/LBPA+30μg/LVitC组DNA损伤效应降低,显示抗氧化剂VitC可减缓BPA所致的DNA损伤效应,氧化损伤是BPA所致DNA损伤的方式之一。5种DNA损伤修复酶表达水平在1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L剂量组依次降低,在100μmol/L、100μmol/L+VitC组依次增加,50μmol/L组各种DNA损伤修复酶表达水平最低。BPA50μmol/L组与溶剂对照比较,5种DNA损伤修复酶均有明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。100μmol/L组的表达水平均高于50μmol/L组,100μmol/L+VitC组均高于100μmol/L组。除DNA-PKcs与hMSH2外,其他DNA损伤修复酶在100μmol/L+VitC组与溶剂对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。[结论]BPA对L-02细胞具有氧化损伤作用,并可导致DNA损伤,多种DNA损伤修复酶参与修复双酚A所导致的DNA损伤。VitC可减缓双酚A的DNA损伤作用。

髓过氧化物酶基因多态性与肺癌遗传易感性的研究

背景与目的:髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)基因启动子区域-463bp处存在G/A多态位点,国外研究表明此位点与肺癌遗传易感性有关,但中国人MPO基因型与肺癌易感性关系尚未见报道,本研究拟对此问题作一探讨。方法:采用病例-对照分子流行病学方法,以PCR-RFLP技术检测98例原发性肺癌和112名健康对照MPO基因型,通过比较不同基因型者的比值比(oddsratio,OR)及其95%可信区间(confidenceinterval,CI)分析基因多态性与中国人肺癌易感性的关系。结果:正常人群G/G、G/A、A/A基因型频率分别为47.3%、42.9%和9.8%,肺癌病例组分别为63.3%、33.7%和3.0%,杂合子G/A在两组人群中分布无显著性差异(P>0.05),但病例组A/A基因型频率显著低于对照组(P<0.025)。携带至少一个等位基因A者患肺癌的风险是基因型为G/G者的52.0%(95%CI0.29～0.93)。在吸烟人群中,等位基因A对肺癌易感性的保护作用有显著性意义(OR=0.41,P<0.025),而在非吸烟人群,这种保护作用无显著性意义(P>0.25)。结论:本研究人群MPO基因多态与肺癌遗传易感性相关,等位基因A对吸烟人群的肺癌易感性有保护作用。

尿中8-羟基脱氧鸟苷作为肿瘤疗效评价生物标记物的研究

目的探讨尿中8-羟基脱氧鸟苷（80HdG）作为肿瘤手术治疗和化疗效果监测与评价生物标记物的可行性。方法建立了两种测定尿中80HdG的分析方法：气相色谱／质谱法（GC／MS）和毛细管电泳法（CE），比较了二者的定量分析特性及其相关性。利用建立的GC／MS法检测了4例癌症患者和2例正常对照者尿中80HdG的排放水平；利用建立的CE法，测定了28例肿瘤患者和9例正常对照者尿中80HdG的排放水平，并监测手术前后、化疗前后患者尿中80HdG排放水平的变化。结果两种方法的定量分析特性都能满足临床分析的需要，且两者的相关性很好。肿瘤患者尿中80HdG的排放水平[（35．26±27．96）nmol／L]明显高于正常对照组[（13．51±5．08）nmol／L，P〈0．053，手术后尿中80HdG的排放水平[（21．34±14．17）nmol／L]与未手术[（41．78±19．96）nmol／L]相比显著减低（P〈0．05），与正常对照组相接近。化疗后2～6d患者尿中80HdG的排放水平[（97．13±31．24）nmol／L]显著高于化疗前[（34．45±21．46）nmol／L]，而化疗后30d左右患者尿中80HdG的排放水平[（30．24±19．35）nmol／L]已经明显降低，略低于化疗前的排放水平。结论尿中80HdG有望作为肿瘤患者早期诊断和手术治疗效果评价及监测的生物标记物。

分子印迹固相萃取-高效液相色谱法用于奶粉样品中痕量三聚氰胺的残留检测

目的以三聚氰胺为模板分子,制备一系列三聚氰胺分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers,MIPs),将MIPs作为固相萃取吸附剂,与高效液相色谱联用检测奶粉样品中残留的痕量三聚氰胺。方法采用沉淀聚合法依次优化致孔剂种类、功能单体与模板分子之间的摩尔比、交联剂的用量,得到对三聚氰胺具有特异性识别能力和高吸附容量的分子印迹聚合物,对60mL奶粉样品提取液中痕量三聚氰胺进行净化和富集。结果萃取回收率为85.1%～99.7%,固相萃取过程不但可以避免繁琐的样品浓缩过程,缩短了样品前处理时间,而且降低了二次污染。方法的加标回收率为89.7%～100.6%,相对标准偏差(RSD)不高于3.1%。与国家标准方法(GB/T 22388-2008)所用的萃取柱(MCX)相比,MIPs萃取柱表现出更好的净化和富集效果。结论建立了一种奶粉样品中痕量三聚氰胺的残留检测方法,为监控食品样本中痕量三聚氰胺残留检测提供有力的技术支持。

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用

[目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用。[方法]观察5、 10、25 mg/L的LSPC与200 mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24 h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6- 甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较。[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73．14%上升到84．79％和90．52％,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P<0．01),MDA含量减少(P<0．01);有效降低细胞DNA损伤程度(P<0．05)。5 mg/L的 LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P<0．01),但对MGMT的表达无影响(P>0．05), 10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变。[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用。

二噁英的毒性与生物学检测研究进展

本文通过对二噁英毒性、致毒机制分析 。

顺铂对A549细胞DNA修复酶MGMT和DNA-PKcs表达的影响

[目的]探讨在DNA损伤剂顺铂作用下 ,A549细胞内DNA修复基因六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)和DNA依赖的蛋白激酶复合物催化亚单位 (DNA_PKcs)的表达变化。[方法]MTT法分析顺铂对A549细胞生存力的影响 ;彗星实验研究顺铂对DNA损伤的程度 ;RT_PCR分析不同顺铂作用时间修复酶mRNA水平的变化。[结果]顺铂对A549细胞的生长有明显的抑制作用 ,且为剂量依赖性。低浓度 (IC20 剂量 )顺铂作用下 ,DNA损伤程度的变化与作用时间成正比 ,且伴随MGMT和DNA_PKcs的表达上升。停止作用后 ,DNA损伤程度减轻 ,修复基因的表达也逐渐恢复至正常水平。

二噁英对HepG2和SPC-A1细胞P53和P38 MAPK基因表达的影响

[目的 ]探讨二英 (TCDD)对人体肝癌细胞株 (HepG2 )和肺腺癌细胞株 (SPC A1)中P5 3基因和P3 8MAPK基因表达的影响 ,并研究剂量与效应的关系。 [方法 ]用常规的细胞培养方法 ,利用RT PCR方法对 2种基因进行表达 ,并以 β actin作为内对照。对基因表达的强度进行比较分析。[结果 ]P3 8MAPK基因在 2种细胞中都有表达 ,在HepG2中 ,P3 8MAPK基因表达随浓度 1、5、10、2 0nmol/L增加先抑后扬 (表达值分别为 0 .90 0、0 .82 0、1.2 60、0 .898,P <0 0 5 ) ,而在SPC A1中差异无显著性 (表达值分别为 0 .898、 0 .919、 0 .80 8、 0 .846,P >0 0 5 )。P5 3基因在人体肝癌细胞株(HepG2 )中有表达 ,并随浓度增加而上调 (表达值分别为 0 .764、0 .890、1.0 99、1.2 18、1.40 5 ,P <0 .0 5 )而在肺腺癌细胞株(SPC A1)中未见表达。 [结论 ]二英对人体肝癌细胞株 (HepG2 )中P5 3基因和P3 8MAPK基因有诱导作用 ,在肺腺癌细胞株 (SPC A1)中仅见对P3 8MAPK基因有诱导作用 ,P5

胆固醇MIPs的合成及其免疫吸附性能评价和应用

分别采用热和紫外光辐射引发合成胆固醇的非共价型M IPs,评价了不同M IPs的吸附特性,以合成的2种M IPs为免疫吸附剂,优化吸附和洗脱条件,对血液、蛋黄、牛奶等生物样品进行免疫吸附。结果表明,M IPs可有效萃取3种生物样品中的胆固醇,其中对血清的效果最好,蛋黄的效果最差。紫外光引发M IPs对胆固醇的回收率明显高于常规的C18柱萃取法。