鸡IFITM3基因的序列分析和组织表达特征

目的:探讨干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)基因在鸡体内的表达与功能,为IFITM3的深入研究和禽流感的防治提供有价值的参考。方法:本研究通过搜索鸡的基因组数据获得鸡的IFITM3,使用生物信息学分析方法、荧光定量RT-PCR技术对鸡IFITM3基因的遗传进化、蛋白特性和组织表达分布进行了研究。结果:鸡的IFITM3蛋白序列全长113个氨基酸,含有两个长度相似的跨膜区和一个CD225结构域,二级结构与人的IFITM3相似,但N末端差异较大。S-棕榈酰化修饰对于IFITM3的抗病毒活性起着决定性作用。分析显示,鸡的IFITM3共含有4个潜在的S-棕榈酰化位点,即Cys45/49/53/89,意味着鸡的IFITM3蛋白也具有抗病毒活性。荧光定量RT-PCR结果显示,IFITM3在鸡的各组织表达广泛。在检测的17种组织中,仅血液没有表达。另外,IFITM3在以肺、脾为代表的非消化道组织表达量低,在以十二指肠、盲肠为代表的消化道组织和肝脏组织表达量高。鸡的IFITM3与人的IFITM3组织表达特征相似。结论:鸡的IFITM3基因对胃肠道免疫和肝脏免疫有重要作用。

江苏省南通地区丙型肝炎病毒的分子流行病学分析

目的 :调查南通地区丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的亚型分布特征。方法 :2012年5—9月间,在南通市第三人民医院收集到109例全血样本用以病毒的RNA提取,RT-PCR扩增和测序。所得的病毒序列与HCV参考序列构建系统发育树。结果:在收集到的109例HCV抗体(Anti-HCV Ig G)阳性样本中,有49例HCV RNA阳性,基于NS5B和C/E2片段构建的进化树显示,南通地区至少流行有1b、2a、3a、3b、6a 5个亚型病毒株。其中,1b是最主要流行的病毒株,占阳性样本中的63.3%;2a次之,占20.4%;3a、3b、6a 3个亚型分别占4.1%、8.2%和4.1%。相较于在普通人群中1b(68.9%)和2a(22.2%)为主要流行的病毒株,6a(50.0%)是静脉吸毒人群中最流行的亚型。结论:多个亚型的HCV病毒株共流行于南通地区,其中1b和2a是最主要流行的病毒株。

自表达SIRPα-Fc融合蛋白对T细胞功能的影响

探讨携带SIRPα-Fc(SF)融合基因蛋白基因的重组腺病毒Ad35-SF感染T细胞后对T细胞功能的影响。腺病毒Ad35-SF感染Jurkat T细胞后,通过Western blotting及ELISA方法检测细胞上清中SF融合蛋白的大小与表达量;通过流式分析技术检测细胞表面CD47的封闭情况;通过CCK8方法检测细胞的增殖与对肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明,Ad35-SF构建成功,其感染Jurkat T细胞后,能在其内表达并分泌产生大小约为48kD的SF蛋白,细胞上清中SF的表达量可到达19.1μg/mL。Ad35-SF(MOI=1)感染Jurkat细胞18h后,细胞CD47阳性比例从97.06%下降到15.32%;当Ad35-SF感染复数增加至5,10时,CD47阳性比率进一步降低至2.94%和1.73%。相对于空病毒对照组,Ad35-SF感染Jurkat细胞48h后其增殖效果提高了29%,对肝癌细胞株Hep 3B的杀伤作用提升25.6%(p<0.01)。结果表明构建的重组腺病毒Ad35-SF能有效感染Jurkat细胞并在其内表达分泌SF蛋白,封闭细胞表面的CD47,同时显著提高Jurkat细胞的增殖能力和对肝癌细胞的杀伤作用。