浅谈实验诊断学课程实践的几点体会

实验诊断学是利用免疫学、生物化学、细胞遗传学等原理技术对各种人体标本,包括血液、尿液、浆膜腔积液、分泌物、粪便等进行分析,从而对疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及预后等做出评价。是医学生从基础理论迈向临床实践的桥梁课程,但是因其课时少,内容多,难掌握,使该课程的教学实施面临一些挑战。本文从实验诊断学的教学内容、教学师资及教学形式等方面进行了一些思考与探索,以期提高实验诊断学教学质量。

粘液型溶血葡萄球菌表型及基因组特征分析

目的:对引起中枢神经系统感染的一株罕见粘液型溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)表型及基因组特征进行分析。方法:收集一株导致中枢神经系统感染粘液型溶血葡萄球菌,通过生物膜形成实验、药敏实验分析生物膜形成和耐药表型,全基因组测序分析其耐药等基因特征。结果:本例溶血葡萄球菌呈粘液型,可见拉丝现象,属于苯唑西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCoNS),同时对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星耐药,对万古霉素、利奈唑胺敏感,比普通非粘液型溶血葡萄球菌更易形成生物膜,MLST显示该菌为ST1型,携带mecA、aph(3′)-IIIa、aac(6′)-Ie、aph(2″)-Ia等8种耐药基因,mecA基因由类似Tn6191的转座子所携带。结论:呈粘液型菌落特征的溶血葡萄球菌在临床上极为罕见,该变异体比通常的非粘液型菌落更易形成生物膜且呈现出多重耐药现象。临床上应关注此类葡萄球菌的粘液变异体,这有助于其早期识别和感染防控。

高毒力肺炎克雷伯菌的微生物学特征与毒力因子研究进展

高毒力肺炎克雷伯菌(hvKp)能够引起健康个体的社区获得性感染,比经典的肺炎克雷伯菌更具毒性。hvKp在亚洲首次被发现,是化脓性肝脓肿的主要原因。除肝脓肿外,hvKp与肺炎克雷伯菌的不同之处在于其具有很强的转移能力,包括肺、眼和中枢神经系统。由于导致高毒力的遗传决定因素通常在毒力质粒及染色体移动遗传元件上,该文对其与毒力相关的微生物学特征与毒力因子的研究进展进行综述,以期为高毒力肺炎克雷伯菌的早期识别、感染控制和新型治疗药物的研发提供线索。

急性白血病患者外周血HMGA1基因的表达

目的:检测急性白血病(AL)患者外周血高迁移率蛋白A1(HMGA1)基因表达水平。方法:采用SYBR Green I RQ-PCR检测30例AL,包括25例AML(M2～M7)和5例ALL(AL组),25例非白血病患者(对照组)外周血HMGA1 mRNA表达水平。结果:AL组HMGA1 mRNA表达明显高于对照组,ALL和AML间HMGA1 mRNA表达水平无显著差异;AML中M7的HMGA1 mRNA表达水平高于M2～M5。结论:HMGA1 mRNA在AL患者外周血高表达,其中M7水平最高,可作为白血病基因治疗的新靶点及M7的鉴别诊断指标。

免疫组化检测急性白血病HMGA1表达情况及临床意义探讨

目的通过免疫组化的方法来研究急性白血病骨髓细胞高迁移率蛋白A1（HMGA1）的表达情况并探讨其临床意义。方法建立免疫组化检测HMGAI蛋白的方法：采用HMGA1蛋白特异性抗体与相应抗原反应，加生物素化的二抗及酶标底物显色。观察染色情况并比较各组细胞阳性率的差异。结果急性白血痛（AL）组HMGA1多呈阳性表达（阳性率86．7％），非白血病（对照）组多呈阴性表达（阳性率15％），两组比较有显著性差异（P〈0．01）；AL各组以M7原始巨核细胞表达阳性率最高（47．8±12．0％，P〈0．05），其它各组比较差异无显著性（P〉0．05）。结论HMGA1蛋白在急性白血病患者中呈过度表达，尤其在M7中表达率最高，可作为M7的鏊别诊断指标。

梅毒患者外周血Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及临床意义

为探讨Th1和Th2类辅助性T细胞在梅毒发病中的作用，我们以IFN-γ和／L-2代表Th1类细胞因子，IL-4和IL—10代表Th2类细胞因子，通过RT—PCR方法检测了一、二期梅毒患者和正常对照组外周血单个核细胞（PBMC）中Th1和Th2类细胞因子mRNA表达水平。

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及耐药性分析

肠杆菌科细菌是临床上较常见致病菌，通过产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）及AmpC酶等达到多重耐药的效果，目前亚胺培南、厄他培南等碳青霉烯类抗生素属于治疗该类细菌较为有效的抗菌药物，也被称为最后一道防线。耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（carbapenem—resistant Enterobacteriaceae，CRE）的出现突破了最后防线，延长了患者住院时间，提高了死亡风险，严重威胁着人类的生命健康。

2017年山东省千佛山医院临床病原菌分布和耐药性分析

目的:了解2017年山东千佛山医院临床细菌分离株的分布及耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据.方法:通过Bruker MALDI-TOF、Walkaway 96 plus或VITEK-2 Compact自动化细菌鉴定仪进行细菌鉴定,纸片扩散法、Walkaway 96 plus或VITEK-2 Compact自动化药敏系统进行药物敏感性测定.药敏按照2016年CLSIM100中规定的折点,使用WHONET 5.6软件分析数据.结果:2017年1月~12月共检出6511株临床分离株,其中革兰氏阴性菌和革兰阳性球菌分别占74.5%和25.5%.前五种病原体分别是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和金黄色葡萄球菌.对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分离率分别为25.5%和77.6%.没有检测到对万古霉素,替考拉宁或利奈唑胺耐药的葡萄球菌.4.3%的屎肠球菌菌株对万古霉素耐药.分离出239株耐碳青霉烯的肠杆菌科细菌,占所有肠杆菌科分离株的8.5%.不动杆菌属对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为81.7%和83%.铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为34.2%和32.4%.结论:我院的多重耐药细菌形势严峻,应加强医院感染控制和抗菌药物临床使用管理,保持良好的细菌耐药性监测.

聚合酶链反应检测麻风分枝杆菌的研究进展

麻风的早期诊治对减少疾病传播、预防疾病进展和致残起重要作用。本文对PCR技术在检测麻风杆菌中的应用作一综述。

血清肌酸激酶同工酶CK-MB活性高于肌酸激酶的病例分析及消除巨肌酸激酶干扰的初步探索

目的:为探讨血清心肌型肌酸激酶同工酶(creatine kinase-ME,CK-MB)活性高于总肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性现象产生的原因及其与疾病的关联,并对如何消除血清巨肌酸激酶(macro-CK)干扰进行初步探讨。方法:筛选2021牟9月-2022年9月期间本院住院患者血清CK-MB活性高于总CK活性的319例标本进行回顾性研究;以热失活法结合葡萄球菌SpA蛋白血清吸附实验对巨CK血清进行鉴定。结果:血清CK-MB活性高于血清总CK的患者主要集中在60~79岁的老年患者中,而20~39岁的青年患者占比最小;其中,有54.86%的患者被诊齢为恶性肿瘤,血液系统恶性肿瘤、肝癌、肺癌、胃癌和结肠癌是後常见的5种恶性肿瘤;此外,恶性肿瘤患者的CK-MB/CK比值显著高于非恶性肿瘤患者;发现3例患者血清中存在巨CK,其中2例非肿瘤患者血清中存玉IgG结合的I型巨CK,1例结肠癌患者血清中可能存在II型巨CK。结论:CK-ME/CK比值作为一种有效易得的实验室指标,在辅助筛查恶性肿瘤中可能具有重要的诊断价值,需要引起实验室及临床重视;此外,利用SpA对疑似巨CK血清进行吸附沉淀,可以成为消除巨酶对血清检测带来的干扰的一种简单可行的方法。

79例慢性乙型肝炎患者重叠HCMV感染T细胞亚群结果分析

目的研究慢性乙型肝炎重叠人巨细胞病毒感染情况下T细胞表面抗原CD3、CD4、CD8变化。方法检测HBV重叠HCMV感染组与单纯HBV感染组的T细胞亚群。结果慢性乙型肝炎重叠感染HCMV与慢性乙型肝炎无重叠感染HCMV的T细胞亚群。结果重叠感染组的CD3、CD4明显低于无重叠感染组,CD8高于无重叠感染组。结论HCMV的重叠感染会加剧抑制慢性乙型肝炎患者的T淋巴细胞免疫功能,致T淋巴细胞表面抗原表达更加紊乱。

基于压电陶瓷变压器与冷等离子体射流的痤疮治疗装置设计

痤疮是常见的好发于青春期的毛囊皮脂腺慢性炎症性皮肤病,易诊而难治。提出了一种轻便而代价低的冷等离子体源设计方案,制作了一套人机友好的医用装置,可在大气压下电极间隙外的开放空间中产生稳定的冷等离子体,达到可快速杀灭痤疮内的痤疮丙酸杆菌的设计目标。研制了基于压电陶瓷变压器的微型化高频高压电源和等离子体发生器,采用惰性气流以及在窄小电极间隙上施加强电场的方法,使产生的等离子体从气孔中喷出并在非电极间隙的开放空间产生冷等离子体射流。以这种类似于气流形式的新型气体放电源处理痤疮丙酸杆菌。通过多组、不同方式的实验室样本以及志愿者人体实验对照验证,所设计的冷等离子体射流装置对痤疮杆菌具有明确的治疗效果。

2019年山东省千佛山医院临床病原菌分布和耐药性分析报告

目的:了解2019年山东千佛山医院临床细菌分离株的分布及耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据.方法:通过Bruker MALDI-TOF、Walkaway 96 plus或VITEK-2 Compact自动化细菌鉴定仪进行细菌鉴定,纸片扩散法、Walkaway 96 plus或VITEK-2 Compact自动化药敏系统进行药物敏感性测定.药敏按照2019年CLSI M100中规定的折点.使用WHONET 5.6软件分析数据.结果:2019年1月~12月共检出7634株临床分离株,其中革兰氏阴性菌和革兰阳性菌分别占70.5%和27.4%.前五种病原体分别是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及鲍曼不动杆菌.甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)占比分别为22.1%和31%.没有检测到对万古霉素,替考拉宁或利奈唑胺耐药的葡萄球菌.0.7%的屎肠球菌菌株对万古霉素耐药.分离出239株耐碳青霉烯的肠杆菌科细菌,占所有肠杆菌科分离株的7.6%.不动杆菌属对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为72.2%和71.9%.铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为17.3%和14.3%.结论:我院的多重耐药细菌较前两年呈下降趋势,但形势仍较严峻,医院应做好抗菌药物临床使用管理,加强感染控制措施的落实,同时保持良好的细菌耐药性监测.

甲亢患者血浆Fib、APTT和D-D水平检测及意义

目的探讨甲状腺功能亢进(甲亢)患者血凝状态。方法检测41例初诊甲亢患者(甲亢组)血浆纤维蛋白原(Fib)、APTT及D-二聚体(D-D)水平,以甲状腺功能正常体检者作为对照组。结果甲亢组血浆APTT水平显著低于对照组[(23.8±4.5)svs.(34.7±5.6)s],Fib、D-DI水平显著高于对照组[(2.8±0.8)g/Lvs.(2.5±0.5)g/L],[(0.45±0.16)g/Lvs.(0.22±0.13)g/L](P<0.05)。结论甲亢患者处于相对高凝状态,此增加了血栓形成风险。

致关节感染皮疽诺卡菌的耐药表型及全基因组测序分析

目的对临床分离的致关节感染的两株皮疽诺卡菌(Nocardia farcinica)进行全基因组测序并分析其耐药性。方法2020年1月收集两株导致老年患者膝关节感染的皮疽诺卡菌菌株,采用全基因组测序对细菌进行鉴定,根据CLSI M24推荐的微量肉汤稀释法和E‑test法进行药物敏感性分析,通过ABRicate工具比对获得性耐药和毒力基因,Snippy等生物信息学工具进行同源性等基因特征分析。结果本研究的临床分离株均为皮疽诺卡菌,对头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑(TMP/SMX)耐药,对亚胺培南、利奈唑胺和含有酶抑制剂类抗生素阿莫西林/克拉维酸敏感。携带A类β内酰胺酶基因far‑1、RNA聚合酶结合蛋白基因RbpA、多耐药外排泵转录激活因子基因MtrA和调节转录因子基因vanR‑O,分别介导对β内酰胺抗生素、利福平、大环内酯类药物和万古霉素的耐药性。不含有获得性TMP/SMX耐药基因,二氢叶酸还原酶家族基因存在多个错义突变,均携带与结核分枝杆菌同源的icl、mbtH、phoP、relA毒力基因,SNP同源分析表明两株皮疽诺卡菌具有很近的亲缘关系,两株菌仅存在10个SNP位点、6个复合基因和1段基因缺失变异。结论全基因测序技术有助于研究诺卡菌的分子特征和耐药机制;皮疽诺卡菌对TMP/SMX耐药现象需要重视,参与二氢叶酸代谢途径的酶基因突变有可能是TMP/SMX耐药的原因之一。

山东省46家医院临床分离真菌的耐药性监测

目的了解山东地区临床分离真菌的菌株分布以及对常用抗真菌药物的耐药性,促进抗真菌药物的合理选择。方法依托于山东省儿童细菌&真菌耐药监测研究协作网,收集2018年1月1日至12月31日山东省46所医院1030例患者的标本,剔除痰液和咽拭子标本,共1030株真菌。分析菌株来源和类型,并采用微量稀释法进行抗真菌药物敏感性试验。采用Whonet 5.6和SPSS 22.0对数据进行分析。结果所有真菌中,主要菌株为白假丝酵母菌(38.74%,399/1030)、热带假丝酵母菌(16.99%,175/1030)及近平滑假丝酵母菌(16.41%,169/1030)等。儿童患者的主要真菌为白假丝酵母菌为(52.50%,63/120)、近平滑假丝酵母菌为(12.50%,15/120)和热带假丝酵母菌(9.17%,11/120)等。成人患者的主要真菌为白假丝酵母菌(36.37%,331/910),热带假丝酵母菌为(17.03%,155/910)和近平滑假丝酵母菌(15.27%,139/910)等。主要假丝酵母菌在1至3月和8至12月的分离率远高于其他月份。白假丝酵母菌对氟康唑和伏立康唑的耐药率分别为7.14%和7.43%,对伊曲康唑的耐药率为50.44%。热带假丝酵母菌对氟康唑、伏立康唑和伊曲康唑都有较高的耐药率,分别为29.05%、23.29%和48.65%。近平滑假丝酵母菌对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑的敏感率分别为93.06%、93.75%、94.44%。光滑假丝酵母菌对氟康唑表现出2.33%的剂量依赖性敏感率。对244株血液真菌分析显示,非白假丝酵母菌菌血症占比为70.08%,在涵盖92.22%的病原谱中,氟康唑的敏感率为64.65%,伏立康唑的敏感率为68.88%,两性霉素B的敏感率为88.75%,量化后获得氟康唑、伏立康唑和两性霉素B临床治疗真菌菌血症的有效率分别为70.10%、74.69%和96.23%,其中热带假丝酵母菌对伏立康唑的敏感率低于氟康唑。结论主要的真菌为假丝酵母菌属,热带假丝酵母菌对唑类抗真菌药物的耐药率呈上升趋势,其他假丝酵母菌对临床常用抗真菌药物的敏感度基本稳定。