赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用及其分子机制

目的:探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用,阐明RHL治疗大鼠胆汁淤积性肝纤维化的分子机制。方法:将35只大鼠分为对照组、模型组、35和70mg·kg-1 RHL治疗组及赖氨酸组,每组7只大鼠。通过胆总管结扎(BDL)方法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型。使用全自动生化分析仪检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性以及总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL)水平;HE染色对肝脏组织行病理学检查;Masson三色染色观察肝组织纤维数量;使用试剂盒通过酶标仪测定肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)水平;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布;Western blotting法检测α-SMA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平升高(P<0.05);肝组织肝小叶结构被破坏,纤维异常增生,Hyp水平亦升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多;Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠α-SMA表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,35和70mg·kg-1RHL治疗组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平明显降低(P<0.05)。肝脏病理组织学,与模型组比较,35和70mg·kg-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中纤维成分数量减少,Hyp水平降低(P<0.05);免疫组织化学和Western blotting法,与模型组比较,35和70mg·kg-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中α-SMA表达减少(P<0.05)。结论:RHL能抑制肝星形细胞激活、肝脏纤维变性和蓄积以发挥对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏的保护作用,RHL有望成为治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。

赖氨大黄酸通过调控miRNA表达水平抑制HBV增殖

目的研究赖氨大黄酸在体外对乙型肝炎病毒(HBV)增殖及病毒抗原表达的影响及分子机制,为研究赖氨大黄酸抗HBV作用机制奠定初步的实验依据。方法将HepG2.2.15细胞分为实验组(分别加入5、10、20、40、80μmol/L赖氨大黄酸)及不加赖氨大黄酸的对照组,分别培养24、48h收获上清液,采用四唑氮化合物(MTS)法检测细胞的增殖活性,采用ELISA法检测HBsAg和HBeAg的表达水平,实时定量PCR(RT-PCT)检测其中HBV DNA的拷贝数及miR-210、miR-185、miR-199a-3p、miR-370、miR-196a、miR-184、miR-217的表达水平。miR-210、miR-185、miR-199a-3p、miR-370、miR-196a、miR-184、miR-217反义链(ASO)分别转染HepG2.2.15细胞后,MTS法检测细胞的增殖活性,ELISA法检测HBsAg和HBeAg的表达水平。结果在没有对HepG2.2.15细胞的增殖活性产生影响的情况下,赖氨大黄酸抑制了HBsAg的产生和HBV的增殖。20μmol/L的赖氨大黄酸明显促进了miR-210、miR-185、miR-199a-3p的表达,而抑制了miR-370的表达,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论赖氨大黄酸可能通过影响细胞内miRNA的表达抑制HepG2.2.15细胞中HBV的增殖和HBsAg的产生。

力达霉素联合硼替佐米的抗骨髓瘤作用及对

目的研究力达霉素(lidamycin,LDM)联合硼替佐米(bortezomib,BZM)的抗骨髓瘤作用及对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)的影响,并探讨MAPKs在两药联合抗骨髓瘤中的作用。方法选取适当的药物浓度和通路抑制剂浓度,MTS法检测细胞增殖情况;Western blot检测相关蛋白及蛋白磷酸化水平。结果 BZM能增强LDM对骨髓瘤细胞的增殖抑制作用,LDM激活c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)、p38 MAPK的表达和细胞外信号调节激酶(Extracellular signal regulated rotein kinase,ERK),两药联合后可使JNK和p38 MAPK的激活显著增强,而ERK的激活显著下降。JNK抑制剂(SP600125)、p38抑制剂(SB203580)和MEK抑制剂(U0126)3种抑制剂单独作用对细胞的增殖抑制作用均不明显,但SP600125或SB203580分别与LDM联合BZM合用后均降低了两药联合对细胞的增殖抑制作用,而U0126与LDM联合BZM合用后提高了两药联合对细胞的增殖抑制作用。结论 LDM通过进一步激活JNK、p38 MAPK和降低ERK的激活来增强BZM抗骨髓瘤敏感度。

赖氨大黄酸对糖尿病大鼠肝脏的保护作用及其机制

目的:探讨赖氨大黄酸(RHL)对糖尿病模型大鼠肝脏的保护作用,阐明RHL对肝脏的保护作用机制。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型。将40只大鼠随机分为对照组、糖尿病模型组、25和50mg·kg-1 RHL治疗组,每组10只。采用硫代巴比妥酸法检测肝脏组织中丙二醛(MDA)水平,联苯三酚自氧化法和NADPH偶联法分别检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;HE染色观察肝脏组织病理学变化;Nile red染色观察肝脏组织脂肪水平;Western blotting法检测脂肪合成相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,糖尿病模型组大鼠体质量减低,血糖、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平升高(P<0.05),肝脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),肝脏组织出现大量脂肪空泡和脂肪蓄积。糖尿病模型大鼠脂肪合成信号通路ERK1/2-SREBP-1c被激活;与模型组比较,25和50mg·kg-1 RHL治疗组大鼠脂肪合成信号通路被抑制。与模型组比较,RHL治疗组大鼠体质量无显著变化,但血糖、TG和TC水平显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,RHL治疗组大鼠肝脏组织中的脂肪空泡和脂肪蓄积明显减少。结论:RHL能抑制氧化应激、肝脏脂肪变性和脂肪蓄积从而发挥对糖尿病大鼠肝脏的保护作用。

黄连汤加味治疗消化性溃疡的疗效观察

目的:观察黄连汤加味对消化性溃疡黏膜的保护和修复作用。方法:搜集2020年1月—2022年12月64例门诊消化性溃疡患者,通过辨证,属于上热下寒证,以随机数表法分为对照组和治疗组,每组32例。对照组给予口服艾司奥美拉唑肠溶胶囊、对有幽门螺杆菌阳性者采用标准四联方案加服阿莫西林胶囊、甲硝唑片,胶体果胶铋胶囊连续用药两周。治疗组运用黄连汤加味治疗,两组均以5周为1个疗程,比较两组临床疗效,以及中医证候积分。结果:治疗组治愈19例,有效8例,无效5例,总有效率84.37%(27/32);对照组治愈8例,有效11例,无效13例,总有效率59.38%(19/32);在治疗后两组临床主要症状严重程度积分比较,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。结论:黄连汤加味治疗胃、十二指肠溃疡,疗效确切。

miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的:利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法:实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR(miR-205互补位点)点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mutYES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果:与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组(P<0.05);YES1-3′UTR与miR-205mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组(P<0.01);YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组(P<0.05)。结论:miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。

赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化大鼠Smad2、Smad3表达的影响

目的探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠Smad2、Smad3表达的影响。方法采用胆总管结扎(BDL)的手术方法建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、赖氨酸组、低剂量RHL组[35mg/(kg·d)]、高剂量RHL组[70mg/(kg·d)]。应用实时荧光定量PCR的方法检测大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA的相对表达量。Western blot的方法检测Smad2、Smad3蛋白时相对表达量的变化。结果与模型组大鼠比较,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组大鼠相比,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白的相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RHL能够抑制肝纤维化的发展,可能是通过抑制Smad2、Smad3mRNA和蛋白的表达,阻断TGF-β1/Smads信号传导通路实现的。

重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用

目的构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能。方法扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按p Adeno X试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用p AdenoⅩ-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况。结果经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中。转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011PFU。感染了p AdenoⅩ-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。随着p AdenoⅩ-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多。结论人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老。

赖氨大黄酸减轻百草枯中毒小鼠心脏损伤

目的观察赖氨大黄酸(RHL)对百草枯中毒小鼠心脏损伤的保护作用及其机制。方法小鼠随机分为对照组、百草枯模型组(腹腔注射百草枯建立活性氧自由基引起心脏损伤的小鼠模型)及RHL治疗组(造模前1周给予RHL(50 mg/kg)。用硫代巴比妥酸法检测心脏组织MDA含量,用联苯三酚自氧化法检测SOD活性,用NADPH偶联法检测GSH-Px活性。HE染色及DCFH-DA染色分别观察心脏病理改变及活性氧水平;Western blot检测心肌衰老相关基因的表达。结果与对照组相比,百草枯模型组小鼠心脏组织SOD和GSH-Px活性下降(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05),RHL能减轻百草枯的作用(P<0.05);百草枯引起心肌结构破坏,心肌组织活性氧水平升高,RHL减轻上述变化(P<0.05)。百草枯能够降低SIRT1的表达,增加P53的乙酰化及P53和P66的表达。RHL减轻上述变化(P<0.05)。结论 RHL可以减轻百草枯中毒后所致的小鼠心脏损伤。

唐山市犬、猫肠道寄生虫感染情况调查

随机收集唐山市犬、猫粪样,采用直接涂片法和饱和盐水浮聚法查肠道寄生虫虫卵或卵囊。共收集粪便标本100份,包括犬粪82份,猫粪18份。其中家养犬、猫粪37份,流浪犬、猫粪21份,宠物市场犬、猫粪42份。结果犬、猫粪阳性27份,检出肠道寄生虫7种,犬、猫感染率分别为38.10%和33.33%。其中家养犬、猫感染率为13.51%,流浪犬、猫感染率28.57%,宠物市场犬、猫感染率38.10%。调查结果显示唐山市犬、猫肠道寄生虫感染率较高,人群存在潜在人兽共患寄生虫病危害。