兽药产品批准文号药学研究资料常见问题浅析

本文通过对已审药学资料的审查分析,从产品信息、处方、工艺、质量标准、稳定性研究等方面对药学申报资料的常见问题加以分析总结并提出了针对性建议,旨在规范药学研究资料编写,以期对兽药产品批准文号申请有所帮助。

麻芩清热止咳合剂对靶动物鸡的安全性试验

为评估麻芩清热止咳合剂对肉鸡的安全性,选择120只平均17日龄健康肉鸡,随机分为1倍剂量组(0.36 g/kg·bw)、3倍剂量组(1.08 g/kg·bw)、5倍剂量组(1.80 g/kg·bw)和空白对照组,试验组混饮给药10 d,停药后继续观察10 d。每天观察记录试验鸡的一般临床表现,在给药前(第1天)、给药结束(第11天)和试验结束(第21天)称重,检测第1天和第11天血液学常规指标和血液生理生化指标,第11天和第21天对5倍剂量组和空白对照组的主要脏器进行组织病理学检查。结果显示,各剂量组临床状态均正常;血液学常规和血液生理生化检测显示,5倍剂量组红细胞数量显著高于空白对照组和1倍剂量组(P<0.05),其他各项指标均未见异常;组织病理学结果显现未发现病变。结果表明,麻芩清热止咳合剂对肉鸡用药安全。

板青颗粒对靶动物猪的安全性试验

【目的】评估板青颗粒对猪的安全性,为临床合理用药提供参考依据。【方法】选择32头110日龄左右健康猪,随机分为4组,板青颗粒1倍(100 mg/kg BW)、3倍(300 mg/kg BW)、5倍(500 mg/kg BW)剂量组和空白对照组,每组8头。试验组饮水给药14 d,停药后继续观察10 d;空白对照组正常饲养,不给药。每天上午、下午逐头观察并记录试验猪的临床表现,在给药前(试验第0天,D0)、给药结束(试验第15天,D15)、观察结束(试验第25天,D25)称重,并在空腹称重后采血,检测血液常规指标和生化指标。分别在给药结束和观察结束时对5倍剂量组和空白对照组猪进行组织病理学检查。【结果】试验期间各剂量组试验猪精神状态、食欲、二便均表现正常,生长性能指标差异均不显著(P>0.05);血液常规指标检测结果显示,试验猪红细胞数量、血红蛋白含量两个指标均随着给药剂量的增加而升高,但均在正常范围内波动,其余个别指标虽具有显著差异但不具有剂量相关性,且指标数值均在正常范围内。血液生化指标检测结果显示,试验猪血清总蛋白随着给药浓度的增加而升高,血糖含量随着给药浓度的升高而降低,但均在正常范围内波动,其余个别指标虽具有显著差异但不具有剂量相关性,且指标数值均在历史资料的参考范围内。组织病理学观察结果显示,5倍剂量组试验猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各组织器官结构清晰,层次分明,发育正常,未发现与中药制剂作用有关的细胞变性、坏死及炎性细胞浸润等病理性变化,各组织与空白对照组相比均未见明显的差异。【结论】板青颗粒5倍剂量(500 mg/kg BW)对猪用药安全。

探析中兽药治疗动物淋证的用药规律

本文旨在为兽医临床治疗淋证遣方用药和新方创立提供参考,搜集整理《中兽医名著与方剂》中治疗淋证的方剂,经过药名规范、数据清洗后,运用古今医案云平台系统和SPSS软件,采用数据挖掘方法,对治疗动物淋证的方剂进行组方规律分析,包括高频药物、高频药对和关联规则等。结果显示,筛选出78个治疗淋证的处方;使用频次在15次及以上的中药有9味,其中,滑石、甘草、泽泻和车前子使用频次达25次以上;所有中药中甘味和寒性药物出现频次最高,归于肺经的药物最多;常用高频药对(共现次数≥15次)共5对,其中,滑石-泽泻、车前子-甘草、甘草-滑石3个药对处于强联系。本文统计分析所得高频药物体现了中兽医药治疗淋证多采用清热泻火、利尿通淋的治则。

新疆一枝蒿不同部位水提物的体外抗炎效果

为了探究新疆一枝蒿不同部位水提物的体外抗炎效果,本试验在体外用脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬白血病细胞(RAW264.7)构建炎症模型,采用水提法对新疆一枝蒿不同部位(叶、茎、花)进行提取,运用噻唑蓝(MTT)法检测新疆一枝蒿不同部位水提物对细胞活力度的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其对炎症相关基因TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响,Western blot检测其对TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达的影响。结果显示,新疆一枝蒿叶、茎、花水提物分别在0.078~1.250、0.078~5.000和0.078~1.250 mg/mL的浓度范围内对RAW264.7细胞活力度无显著抑制作用。与LPS模型组相比,新疆一枝蒿叶、茎、花水提物浓度范围在0.313~1.250、0.625~2.500和0.625~1.250 mg/mL时,细胞活力度分别提高了23.12%~28.14%(P<0.01)、10.88%~18.62%(P<0.01)和16.13%~16.76%(P<0.05)。浓度为1.250 mg/mL的叶水提物可以极显著降低TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白表达(P<0.01);浓度为0.625和1.250 mg/mL的茎水提物可以极显著降低IL-1β的mRNA和蛋白表达(P<0.01),以及IL-6和TNF-α的mRNA表达(P<0.01);浓度为0.625 mg/mL的花水提物可以极显著降低IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结果表明,新疆一枝蒿不同部位(叶、茎、花)水提物均有抗炎效果,本试验结果可为新疆一枝蒿的兽医临床应用提供参考依据。

宠物淋证的中兽医临床诊断

目前,淋证在中兽医学临床上缺乏科学、合理的诊治规范,诊断方法较为单一,阻碍了淋证诊治水平的提高。宠物淋证是宠物临床常见疾病,近年来这类病例有增多的趋势。但该证诊断体系尚未发展成熟,不能形成一个完善的辨证论治体系。本文依据中医和中兽医淋证相关内容,结合兽医临床实际诊断和用药观察,对宠物淋证进行辨证诊断,为宠物淋证的中兽医诊断提供参考,以期提高临床治疗效果。

槟榔提取物的生物学活性及其在动物生产中的应用

在动物养殖过程中,抗生素添加易产生微生物耐药性和药物残留问题,已引起广泛关注。开发毒副作用小、不易产生耐药性且无有害物质残留的新型绿色饲料添加剂,已成为我国动物饲料添加剂学科发展的重要方向。槟榔作为一种重要的中草药,具有多种生物学活性,在我国传统医学中已被广泛应用。研究表明,槟榔提取物具有提高动物生产性能的作用。因此,本文总结归纳了槟榔提取物的主要活性成分及其抗氧化、抗炎、抗寄生虫和抗微生物活性,并进一步讨论其在动物生产中的应用,旨在为槟榔提取物作为动物饲料添加剂的开发提供理论依据。

固相萃取-高效液相色谱法测定禽类可食性组织和蛋中氨丙啉残留

该文建立了固相萃取-高效液相色谱法检测鸡、鸭、鹅的可食性组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪)和蛋中氨丙啉残留的分析方法。样品中的氨丙啉经三氯乙酸-乙腈溶液提取,固相萃取柱净化。色谱柱为亲水性C18色谱柱,使用甲醇-乙腈-6mmol/L1-庚烷磺酸钠溶液为流动相进行等度洗脱,检测波长为268nm。氨丙啉在0.1~10μg/mL呈良好的线性关系,r^(2)为0.999。该方法对鸡、鸭、鹅的肌肉中氨丙啉的检出限为150μg/kg,定量限为250μg/kg;鸡、鸭、鹅的肝脏、肾脏、脂肪、蛋中氨丙啉的检出限为250μg/kg,定量限为500μg/kg。这些空白组织中添加水平分别为定量限0.5倍、1倍、2倍最大残留限量时,各组织中氨丙啉的平均回收率在74.65%~96.24%之间,其日内和日间相对标准偏差分别小于15%。该方法准确度和精密度高,适用于禽类可食性组织和蛋中氨丙啉残留的检测,为日常工作中食品质量控制提供了一种可行的方法。

高效液相色谱法测定天然植物饲料原料中绿原酸含量

本文旨在建立一种高效液相色谱法测定天然植物饲料原料中绿原酸含量的分析方法。样品用甲醇水溶液(1:1,V/V)提取后,滤过,高效液相色谱法测定。色谱柱为岛津InertSustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%醋酸溶液为流动相,梯度洗脱。柱温25℃,流速1.0 mL/min,检测波长330 nm。结果表明:该方法在0.025~0.5 mg/mL内线性良好,R^(2)=0.999 9;该方法具有较好的重复性、准确度和精密度,加样回收率为93.08%~104.86%,相对标准偏差(RSD)小于3.07%,可用于测定天然植物饲料原料中绿原酸含量。

基于网络药理学与分子对接探究中兽药复方乳康颗粒治疗奶牛乳房炎的作用机制

【目的】探究中兽药复方乳康颗粒(RKG)治疗奶牛乳房炎的作用机制。【方法】通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)、中医药百科全书(ETCM)平台获取中兽药复方乳康颗粒中黄芪、王不留行、益母草的有效成分及靶点,利用Cytoscape v 3.7.2构建中兽药复方乳康颗粒中药-成分-靶点网络图,从NCBI、OMIM、GeneCards、MalaCards平台获取奶牛乳房炎靶点,使用Cytoscape v 3.7.2中的Bisogenet插件对中兽药复方乳康颗粒成分靶点及奶牛乳房炎的靶点进行综合分析,构建蛋白互作(PPI)网络图,并使用DAVID进行GO功能和KEGG通路富集分析,探讨其治疗奶牛乳房炎的作用机制。采用分子对接对网络药理学预测结果进行初步验证。【结果】通过网络药理学筛选出槲皮素、山奈酚、异鼠李素等23个中兽药复方乳康颗粒相关的活性成分,文献检索得到奶牛乳房炎相关靶点有肿瘤坏死因子(TNF)、Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素17A(IL17A)等49个,通过Bisogenet插件对其进行PPI分析后得到中兽药复方乳康颗粒作用于奶牛乳房炎的关键靶点77个,涉及到靶点肿瘤蛋白P53(TP53)、核因子κB P65(RELA)及乳腺癌1号基因(BRCA1)等。GO功能富集分析结果表明,生物过程富集在DNA修复、蛋白质泛素化等;主要通过泛素蛋白连接酶结合、ATP结合等分子功能发挥作用;细胞组分条目涉及胞浆、细胞质和细胞核等。KEGG通路富集分析结果表明,中兽药复方乳康颗粒主要调节丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、PI3K-Akt等信号通路。分子对接结果表明,槲皮素、山奈酚、异鼠李素与BRCA1、RELA和TP53之间均形成了氢键,且结合能<-3 kJ/mol,其中RELA与上述成分亲和力最强。【结论】网络药理学分析表明,中兽药复方乳康颗粒主要通过槲皮素、山奈酚、异鼠李素等有效成分作用于TP53、MAPK、BRCA1、RELA等靶点,调节MAPK、PI3K-Akt等信号通路,从而达到治疗奶牛乳房炎的作用。

基于数据挖掘分析含苍术防治瘟疫病方剂的用药规律

通过数据挖掘方法,对书籍资料中防治瘟疫病的方剂进行整理并分析其用药规律,以期为中药苍术的临床应用及新型中药制剂开发提供参考与借鉴。收集书籍资料中含苍术防治瘟疫病的处方,利用统计分析、关联规则分析和聚类分析等数据挖掘方法,对处方所涉及药物的用药频次、四气、五味、归经、关联规则等用药规律进行分析。结果:共收集65首处方,涉及中药195味,药性以温性为主,药味以辛为主,归脾、胃、肺经;高频中药由苍术、甘草、厚朴等11味中药构成;核心用药与高频中药一致。瘟疫病治疗时需根据病情合理用药施治,本研究得到的核心用药组合与瘟疫病上中下三焦对应,符合瘟疫病发生发展的规律,为苍术在临床中防治瘟疫病方面的应用提供了一定的参考。

不同区域鸡大肠杆菌对抗菌药的耐药性比较

从山东省9个地区、河北省青县和辽宁省本溪市肉鸡病料中分离鉴定出了264株大肠杆菌,并测定了它们对29种抗菌药的耐药性。结果显示,3个区域中以山东省鸡大肠杆菌的耐药种类最多,为29种,辽宁省最少,为23种;3个地区的致病菌株对土霉素、酒石酸泰乐菌素、磺胺-6-甲氧嘧啶、氨苄西林钠、阿莫西林5种药物的耐药率均达到了90.0%以上;另外,山东和辽宁两地分离菌株对硫酸链霉素和盐酸金霉素、山东和河北分离株对甲砜霉素、河北和辽宁分离株对恩诺沙星和磷霉素钠、辽宁分离株对甲磺酸达氟沙星和延胡索酸泰妙菌素的耐药率几乎均达到了80.0%以上。表明,3个区域的鸡大肠杆菌对大部分临床常用抗菌药产生了耐药性,但耐药种类和耐药程度有一定的差异。

基于UHPLC-QE-Orbitrap-MS技术的深加工槟榔籽的成分分析

本研究以槟榔深加工过程中产生的副产物槟榔籽为研究对象,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道肼高分辨质谱法(UHPLC-QE-Orbitrap-MS)对槟榔籽的成分进行分析鉴定。采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃,进样体积10μL,使用电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z为100~1200,Full MSddMS2检测模式,正负离子同时采集。利用Compound Discoverer 3.3软件对原始数据进行分析,通过本地数据库和mzCloud在线数据库对化合物进行结构鉴定。试验鉴定出85种存在于槟榔籽中的成分,分别为生物碱类化合物3种、黄酮类化合物24种、有机酸类化合物15种、酚类化合物7种、萜类化合物7种、氨基酸类化合物6种、糖类化合物4种、酯类化合物4种、酰胺类化合物2种、鞘脂类化合物2种、类固醇衍生物1种、苯丙素类化合物1种、香豆素类化合物1种、其它8种。UHPLC-QE-Orbitrap-MS检测技术可以对槟榔深加工副产物槟榔籽中的成分进行快速识别,本研究为槟榔资源进一步综合利用,开发高附加值产品提供科学依据。

Fe^(3+)选择性吸附碳量子点抑制细菌生长和细菌生物膜生成

为了有效抑制细菌感染,寻找新的抗生素增效作用剂协助抗生素治疗,本试验通过一步水热法,以柠檬酸和聚赖氨酸制备了碳量子点(CDs),使用紫外-可见分光光度计和成像仪对CDs进行表征,采用微量肉汤稀释法、棋盘法和结晶紫染色法检测CDs对细菌生长和细菌生物膜生成的影响,通过细胞毒性和溶血活性试验评估CDs的体外生物相容性。结果显示,CDs在345 nm处可观察到明亮蓝色荧光,可选择性吸附作为生物膜必要元素之一的Fe^(3+),对Fe^(3+)的响应浓度为1 mmol/L,且CDs在日光条件下的10 h内保持荧光稳定;CDs对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、革兰阳性菌(金黄色葡萄球菌,S.aureus)和革兰阴性菌(大肠埃希菌,E.coli)的最小抑菌浓度(MIC)分别是256、128和256μg/mL;CDs联合头孢噻肟可有效抑制革兰阴性菌生长[分级抑菌浓度(FIC)=0.07];CDs(62.5μg/mL)对MRSA和E.coli的生物膜抑制率分别为64.4%和57.4%;且CDs(1000μg/mL)没有细胞毒性(细胞活性>100%)和溶血活性(<1%)。结果表明,CDs具有作为抗生素增效剂的潜力,可与抗生素联合使用治疗革兰阴性菌引起的感染。

体内外环境对PLGA微球形态的影响

为了解聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球在体内外环境中形态的差异,进一步解析PLGA微球体内外环境对药物释放的影响,本试验采用乳化法制备PLGA微球,荧光标记后,采用光学显微镜、荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜和苏木精-伊红染色法分别观察PLGA微球在不同介质、体外细胞环境和小鼠体内环境中形态的变化。结果显示,制备的PLGA微球为透明且表面光滑的球形,在水、PBS和血清中保持球形,膨胀率分别为23.7%、13.1%和0.5%;在0、24、48和72 h时,PLGA微球在血清中泄露分别是PBS中的6.54倍、8.66倍、4.67倍和3.61倍;PLGA微球在体外细胞环境中为半透明球形;PLGA微球在小鼠体内环境条件下前2天保持球形,第3天PLGA微球的形态发生变化。PLGA微球表面和内部结构在体外和体内环境中的差异表明PLGA微球中的药物在体外和体内环境中释放也存在差异。本试验发现体外和体内环境条件下PLGA微球形态会发生变化,可作为合理设计静脉注射用PLGA微球的参考,为进一步改善PLGA微球中药物释放提供数据支持。

阿尔茨海默病患者尿甲醛浓度与MMSE的相关性

目的比较65岁以上正常老人和阿尔茨海默病(AD)患者尿液甲醛浓度,并对不同程度AD患者尿液甲醛浓度与简短精神状态量表(MMSE)分数相关性进行分析。方法经筛查健康老人30例为正常组,AD的诊断采用世界卫生组织制订的国际疾病分类第10版(ICD-10)的标准。选用MMSE和临床痴呆评定(CDR)等量表进行认知功能评估。确定为AD患者后,再按MMSE得分高低将AD患者分成轻、中、重三组,每组30例。留取早晨空腹中段尿液20 ml备检。结果正常组与AD患者尿液甲醛浓度有明显差异(rs=-0.676,P<0.001)。MMSE分值在20～26分之间到轻度AD患者组(rs=-0.195)与正常组(rs=-0.173)中,尿液甲醛含量与MMSE分数无相关性(P>0.05)。MMSE分值在10～19分之间的中度AD患者组(rs=-0.467)和MMSE分值在0～9分之间的重度AD患者组(rs=-0.362),尿液甲醛含量与MMSE分数呈成负相关,均有统计学意义(P<0.05)。结论 AD患者尿甲醛浓度显著高于正常老年人,而且中、重度AD患者的尿甲醛浓度与MMSE分数负相关。提示尿甲醛浓度可能成为AD临床诊断的一项有用的生物学指标。

SCID与NOD/SCID小鼠部分免疫指标的比较

目的测定SCID和NOD/SCID小鼠的免疫器官质量、血常规指标以及部分血液生化指标（immunoglobulin G,IgG）,分析比较2个免疫缺陷小鼠在免疫方面的特点。方法对4~8、12~16和20~24周龄SCID与NOD/SCID小鼠眼眶静脉采血,测定血常规指标,剖取胸腺和脾脏进行称质量比较。对4~6、8~10、16~18周龄的SCID和NOD/SCID小鼠眼眶静脉采血,测定比较血清IgG含量。结果 a.同周龄SCID与NOD/SCID小鼠胸腺质量差异无显著性。3个年龄段（4~8、12~16和20~24周龄）的NOD/SCID小鼠脾脏显著低于各组SCID小鼠（P〈0.05）,SCID小鼠脾脏随年龄增加趋势明显;b.NOD/SCID小鼠白细胞数（white blood cell count,WBC）、淋巴细胞绝对值（lymphocytes,LYM#）、红细胞数（red blood cell,RBC）、血红蛋白含量（hemoglobin,HGB）及平均血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）显著低于同周龄SCID小鼠（P〈0.05）,高龄SCID小鼠白细胞水平和淋巴细胞百分比显著高于低龄（4~8周龄）SCID鼠（P〈0.05）。c.NOD/SCID小鼠血清IgG含量显著低于SCID小鼠（P〈0.05）。结论SCID与NOD/SCID小鼠部分免疫指标存在显著性差异。

艾灸抗肿瘤作用研究概况

艾灸具有提高机体免疫力、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖及转移等作用。艾灸对肿瘤的疗效广泛也是其对机体整体调节作用的体现。因肿瘤细胞的增殖及转移的机制比较复杂,且与肿瘤患者的预后有密切关系,故艾灸可能对肿瘤患者的预后有一定的改善作用。但偶有报道沿食管癌患者食管进行艾灸会加速肿瘤细胞的转移,古医籍中亦有不宜刺入瘤体内的记载。故能否在肿瘤局部艾灸还有待作进一步研究,以期使艾灸能在肿瘤治疗领域得到合理应用。

动物实验的生物安全防护初探

生命科学的许多研究领域都依赖于动物实验,动物实验也存在生物安全的危险,这种危险来自于动物性气溶胶、人畜共患病以及实验室获得性疾病感染。从事动物实验的工作人员应充分认识动物实验生物安全防护的重要性,加强生物安全防护知识和技能的培训,采取有效的管理和监督措施,减少或尽可能杜绝自身感染、环境污染以及实验室感染等事件发生。