NLRP3炎症复合体在高糖培养的肾小管上皮细胞中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究NLRP3炎症复合体在高糖培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法将NRK-52E细胞分为正常组、等高对照组、高糖组、高糖+阴性对照组及高糖+干扰组。培养48h后应用Western blot检测各组NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及天冬氨酸蛋白水解酶1、3(Caspase-1、3)的表达情况。细胞凋亡情况采用流式细胞仪检测。结果高糖刺激可上调NRK-52E细胞NLRP3炎症复合体的表达及Caspase-3的表达(P均<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);通过特异性的SiRNA抑制NLRP3蛋白质的表达后,细胞NLRP3炎症复合体及Caspase-3的表达均减少,细胞凋亡率下降(P均<0.05)。结论高糖促进NRK-52E细胞NLRP3炎症复合体表达,针对NLRP3的SiRNA通过减少NLRP3炎症复合体的表达从而抑制高糖诱导的细胞凋亡。

NALP3-siRNA对缺氧复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的通过构建NALP3-siRNA，观察其抑制大鼠。肾小管上皮细胞（NRK-52E）NALP3表达的作用，探讨其对细胞缺氧复氧（HR）损伤的保护作用。方法（1）利用三气培养箱调整氮气压力条件形成缺氧条件，缺氧1h，按复氧时间设复氧后1、2、4、8、16、24h组，分别检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）含量以及细胞NALP3蛋白的表达。（2）NRK-52E转染NALP3-siRNA质粒，Western印迹法检测转染细胞NALP3蛋白的表达。（3）将细胞分为正常对照组、HR组、无关siRNA转染组和NALP3-siRNA转染组。分别于缺氧1h、复氧4h检测培养液上清LDH的含量和细胞NALP3蛋白的表达。（4）采用Annexin V／PI染色结合流式细胞仪、Western印迹法、电泳迁移率实验（EMSA）分别检测细胞凋亡率、细胞IκB-α、Bax和Bel-2蛋白的表达以及NF-κBDNA结合活性。结果（1）与对照组相比，NRK-52E缺氧复氧后活细胞计数和细胞存活率显著下降（P〈0．05），细胞NALP3表达增加，在复氧4h达到高峰。（2）与无关siRNA转染组相比，NALP3-siRNA转染组NALP3蛋白表达水平显著下调（P〈0．05）。（3）缺氧复氧后，与无关siRNA转染组相比，NRK-52E细胞NALP3蛋白表达显著下降（P〈0．05）。（4）与对照组比较，HR后细胞IκB-d磷酸化和降解以及NF-κBDNA结合活性增加，细胞NALP3、Bcl-2和Bax蛋白的表达明显上调，而NALP3-siRNA转染组细胞IκB-α蛋白的降解，NF-κBDNA结合活性以及Bax／Bcl-2蛋白的比值均低于无关siRNA转染组（均P〈0．05）。同时，各组细胞凋亡率也明显增多，其中NALP3-siRNA转染组细胞凋亡率明显低于无关siRNA转染组（均P〈0．05）。结论NALP3-siRNA能够显著抑制肾小管上皮细胞内NALP3的表达，对肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NALP3表达，对NF-κB的活化以及Bcl-2和Bax蛋白表达的不同调控，减少细胞的凋亡。

NLRP3炎性小体在高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞炎性反应中的变化

目的观察高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)NLRP3炎性小体及炎症因子蛋白的表达,并通过转染NLRP3特异性小干扰质粒(siRNA)明确NLRP3炎性小体是否参与其炎症损伤。方法 (1)将NRK-52E细胞分为对照(NC)组及高糖(HG)6、12、24、48h组。用Western Blot检测NL-RP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)的表达。(2)根据上述结果分为NC组、HG组、HG+NLRP3-siRNA质粒组、HG+无关质粒组,培养48h后RT-PCR检测NLRP3mR-NA的表达;Western Blot检测NLRP3、ASC、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达。结果 (1)HG刺激后的NRK-52E细胞NLRP3、ASC蛋白表达逐渐增加,48h组最为明显(P均<0.05);caspase-1蛋白表达较NC组增高(P<0.05)。(2)HG组NLRP3、ASC、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达较NC组增高(P<0.05);HG+NLRP3-siRNA质粒组上述蛋白表达较HG组均下降(P<0.05)。结论 HG可诱导NRK-52E细胞NLRP3炎性小体活化,进而促进其下游炎症因子的表达和释放。推测NLRP3炎性小体可能参与了HG诱导的NRK-52E细胞的炎症损伤。