RIA和ELISA检测血清乙酰胆碱受体抗体对重症肌无力诊断的准确性和一致性

目的研究放射免疫沉淀法(radioimmunoprecipitation assay,RIA)和酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定乙酰胆碱受体抗体(anti-acetylcholine receptor antibody,AChR-Ab)对诊断重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的敏感度和特异度,并对不同方法检测AChR-Ab的一致性进行检验。方法本研究采用回顾性的方法,收集在北京协和医院神经科MG专科门诊诊断的未行免疫治疗的MG和非MG对照血清,应用RIA和ELISA检测AChR-Ab,对两种检测方法的敏感度和特异度进行验证,评估两种方法的相关性和一致性。结果共募集120例MG,其中眼肌型54例,全身型66例;非MG对照102例,其中其他神经肌肉病43例,自身免疫病9例,健康体检者50名。MG诊断方面,RIA和ELISA的灵敏度分别为75.00%和71.67%,特异度分别为99.01%和96.08%,阳性预测值分别为98.9%和95.56%,阴性预测值分别为77.09%和74.24%。Spearman检验显示两种方法的相关性良好(r=0.86,P<0.001),Kappa一致性检验显示一致性较好(κ值=0.804,P<0.001)。结论应用RIA和ELISA检测AChR-Ab均对MG具有较好的诊断灵敏度和诊断特异度,且一致性良好。

重视IgG指数和Reiber图对寡克隆区带的补充及其在神经免疫疾病诊治中的作用

临床医生常常高度关注寡克隆带在多发性硬化(MS)中的诊断意义,但寡克隆区带(OCB)在亚洲人群的灵敏度远低于西方国家,仅关注OCB不足以满足日益增长的神经免疫疾病的诊断需求。临床医生可以使用多维度的生物标志物补充OCB的不足。IgG指数是鞘内合成免疫球蛋白G(IgG)的定量指标,成本较低且易于获取。但IgG指数因其基于脑脊液血浆浓度商之间是线性关系的假设,在血脑屏障(BBB)受损时,阴性率高,诊断价值降低。Reiber图是基于大样本研究提出的浓度商双曲线,建立在非线性关系之上,虽然国内鲜有报道,但是在国外评价颇高。在缺乏OCB阳性的情况下,通过IgG指数和Reiber图评估患者BBB的完整性和鞘内合成,无论对MS诊断的时间多发性确定还是其他神经免疫疾病的诊断和治疗方案都具有指导的意义。

急性缺血性脑血管病患者TXB2、6-keto-PGF1α、oxLDL和Lp(a)水平分析

目的观察急性缺血性脑血管病患者血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素1α(6-keto-PGF1α,6-k)及TXB2/6-ketoPGF1α比值(T/6-k)、氧化型低密度脂蛋白(ox LDL)和脂蛋白(a)[LP(a)]水平,为临床积极干预提供参考依据。方法纳入急性短暂性脑缺血发作患者(TIA)70例,急性脑梗死患者(AIS)80例,健康对照者(NC)120例;用ELISA双抗体夹心法测定ox LDL、Lp(a)、TXB2,用ELISA竞争抑制法测定6-k;分别测定TIA和AIS患者发病24 h、7 d、14 d时的血浆TXB2、6-k及T/6-k、ox LDL和Lp(a),将3个时间状态值与健康人对照组进行统计分析。结果 TIA组和AIS组,发病24 h、7 d、14 d的血浆ox LDL、Lp(a)、TXB2及6-k水平均高于健康人对照组(P均<0.01)。TIA组和AIS组患者发病24 h、7 d、14 d相互比较:TXB2水平发病24 h、7 d时差异均无统计学意义(P均>0.05),发病14 d时TXB2比较差异有统计学意义(P<0.01);6-k水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);T/6-k水平发病7 d、14 d比较差异均有统计学意义(P均<0.05);ox LDL水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);Lp(a)水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 TXB2、6-k、ox LDL和Lp(a)检测对于TIA患者积极预防进一步发展为脑梗死有重要的警示价值,且对于防止AIS患者再次发作,积极进行二级预防有重要意义。

中枢神经感染患者脑脊液免疫指标分析

目的分析中枢神经感染患者脑脊液的免疫指标。方法聚丙烯凝胶电泳银染法测定寡克隆区带,火箭免疫电泳法同时测定IgG和白蛋白,计算血脑屏障通透性、IgG指数、IgG合成率。结果正常血脑屏障和异常血脑屏障时均有较高水平鞘内IgG的合成。结论中枢神经感染患者中枢神经组织内的体液免疫反应发挥着重要作用。

多发性硬化患者脑脊液血清配对标本蛋白质系列指标的分析

目的 分析蛋白系列指标，判断血脑屏障通透性，明确 Ｉｇ Ｇ 来源。方法 用考马斯亮蓝 Ｇ２５０ 法测定总蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法测定寡克隆区带，火箭免疫电泳法同时测定 Ｉｇ Ｇ 和白蛋白， Ｃ Ｓ Ｆ Ａｌｂ／ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂ 比值判断血脑屏障通透性。结果 ３０ 例多发性硬化患者 ２２ 例血脑屏障通透性正常，其蛋白系列指标阳性率： Ｏ Ｃ Ｂ 为 ５４．５％ ， Ｉｇ Ｇ 合成率为 ６３．６％ ， Ｃ Ｓ Ｆ Ｉｇ Ｇ／ Ｃ Ｓ Ｆ Ａｌｂ 比值为 ４０．９％ ， Ｃ Ｓ Ｆ Ｉｇ Ｇ／ Ｃ Ｓ Ｆ Ｔ Ｐ 为 ４５．５％ ， Ｃ Ｓ Ｆ Ｉｇ Ｇ 为 ４５．５％ ， Ｏ Ｃ Ｂ＋ Ｉｇ Ｇ 合成率为 ８１．８％ 。结论 在判断清楚血脑屏障通透性是正常还是异常的前提下再分析蛋白系列指标，并且以寡克隆区带和 Ｉｇ Ｇ 合成率为主要指标，只有血脑屏障通透性正常而寡克隆区带和 Ｉｇ Ｇ 合成率又异常时，才能肯定的认为有中枢鞘内 Ｉｇ Ｇ（抗体）的合成。

格林—巴利综合征患者的空肠弯曲菌抗体及意义

目的 :用纯化的脂多糖抗原 (CJ LPS)和全菌抗原 (CJ T)检测格林—巴利综合征 (GBS)患者血清的空肠弯曲菌(CJ)抗体 ,并用 2种抗原检测到的抗体阳性率和阳性病例的符合率的差别来推测CJ的LPS是否为诱发CJ抗体的抗原表位。方法 :取GBS患者分离的 15株不同Penner血清型的CJ ,用酚 水法提取的CJ LPS抗原 ,以热稳定成分为CJ T抗原 ,以ELISA间接法检测 81例GBS患者、3 4例其他神经疾病对照和 63例正常对照的血清CJ抗体。结果 :CJ LPS为抗原 ,CJ感染阳性率为5 1 9% ,CJ T检测的阳性率为 5 6 8% ,与其他神经疾病对照和正常对照的差异均有显著性。 2种抗原检测得到的阳性率之间差异没有显著性 ,阳性病例的符合率之间差异没有显著性。结论 :我国GBS患者的CJ近期感染阳性率较高 。

急性脑血管病患者血浆血栓素B_2和6-酮-前列环素的动态分析

目的动态测定急性脑血管病患者血浆中的血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素(6-keto-PGF1α)及TXB2/6-keto-PGF1α(T/6-K)比值,为临床积极干预提供参考依据。方法急性脑血管病患者300例,分为3组:CI组205例、TIA组70例、CH组25例,正常对照组120例。ELISA双抗体夹心法测定TXB2,ELISA竞争抑制法测定6-keto-PGF1α。测定急性脑血管病患者发病24h内、1周时、2周时的血浆TXB2、6-酮-前列环素1α及TXB2/6-K比值,同时将其动态值变化与正常对照组进行统计分析。结果 3组患者发病24h内、1周时、2周时的血浆TXB2、6-keto-PGF1α的含量均高于正常对照组(P<0.01),TXB2到一周时最高,到二周时下降,6-keto-PGF1α逐渐增高,到2周时最高。3组患者TXB2/6-K在发病24h内、1周时均高于正常对照组(P<0.01),1周时最高,CI组,TIA组到2周时下降基本和正常对照组相似(P>0.05),CH组下降比正常对照组低(P<0.01)。结论维持TXB2/6-keto-PGF1α的平衡有助于血流通畅,TXB2、6-keto-PGF1α水平可反映急性脑血管患者血小板活化功能状态和血管内皮细胞损伤情况。临床常规测定有助于急性脑血管病事件的综合评估。对于TIA患者患者进一步发展为脑梗死有重要的警示价值。

中年和老年人脑梗死患者脂蛋白(a)的分析

目的 分析中老年脑梗死患者脂蛋白 (a)的含量并探讨其意义。方法 采用ELISA法测定了 6 2例中年人和 6 6例老年人脑梗死患者血清中的脂蛋白 (a)的水平。结果 中年组和老年组的阳性率、男性和女性及年龄比较均无显著性统计学意义。结论 脂蛋白 (a)的测定对于预防和诊治脑梗死具有重要的参考价值 ,并建议做为血栓前状态的指标。

肌萎缩侧索硬化患者脑脊液免疫指标检测的意义

目的分析肌萎缩侧索硬化患者血脑屏障通透性、IgG合成率、IgG指数、寡克隆区带等免疫指标变化。方法选择1996-01/2002-12北京大学第一医院神经免疫研究室脑脊液和血配对标本库中筛选确诊的肌萎缩侧索硬化患者29例,男24例,女5例。同期选择本院神经系统非炎症性疾病患者35例和32例骨科腰部疾患或下肢部位手术腰部麻醉者为对照组,男42例,女25例。所有患者同时采静脉血和脑脊液各2mL,检测两组患者血脑屏障通透性异常阳性率(<7×10-3为异常)、IgG合成异常率(<7mg为异常)、IgG指数异常率(<0.7为异常)和寡克隆区带的异常率(以脑脊液中有不同于血清的条带为阳性)。结果对照组67例和肌萎缩侧索硬化组29例患者均进入结果分析。对照组血脑屏障通透性异常阳性率、IgG合成率异常阳性率、IgG指数异常阳性率、寡克隆区带阳性率均为阴性。肌萎缩侧索硬化组分别为21%(6/29),69%(20/29),83%(24/29),41%(12/29),两组比较均有显著性意义(χ2=27.845,67.379,73.149,31.770,P<0.05)。结论肌萎缩侧索硬化患者中枢神经组织有免疫介导损伤的血脑屏障破坏和免疫反应异常。

乳酸丙酮酸测定对筛选线粒体肌肉疾病的临床应用

用Barker法测乳酸,2,4—二硝基苯肼法测丙酮酸。对18例正常、17例肌肉疾病对照、19例线粒体肌肉疾病患者进行静态、运动后即刻及第10min血乳酸、丙酮酸的测定。结果显示:在3种状态下,3组样本的丙酮酸比较,无统计学意义(P>0.05);线粒体肌肉病组较对照组乳酸对应偏高,但仍无统计学意义(P>0.05);乳酸/丙酮酸比值运动后即刻值显著增高(P<0.05)。提示:乳酸/丙酮酸比值是筛选线粒体肌肉病的主要参考依据。

不同储存条件和反复冻融对血清和血浆乙酰胆碱受体抗体水平的影响

目的探讨不同储存条件和反复冻融对血清和血浆乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)水平的影响。方法将1例重症肌无力患者的血清和血浆标本分成数等份,置于不同储存条件下(常温、4℃或-80℃)并经过不同次数的冻融,不同等分的样本使用同一批次商品化ELISA试剂盒双平行孔检测AChRAb水平。计算各种条件下血清和血浆标本AChRAb抑制率的变异系数(CV),比较不同处理条件下的抑制率以及同一条件下血清和血浆标本的抑制率。结果除常温条件下血浆标本CV>10%外,其余条件下CV均<10%。4℃条件下血清AChRAb的抑制率显著高于其他条件下血清的抑制率(P<0.05),4℃和常温条件下血浆的抑制率显著低于其他条件下血浆标本的抑制率(P<0.05)。4℃条件下血清和血浆标本AChRAb抑制率差异有统计学意义(P<0.05),而冷冻保存后经过多达5次冻融两者的抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 -80℃直接储存的血清和血浆标本,即使经过多次冻融,AChRAb水平检测结果仍可较为一致。血清标本在常温、4℃或冷冻保存,血浆标本低温冷冻保存,数日内完成检测结果具有一致性。

多发性硬化患者实验室辅助检查分析

目的 分析诊断多发性硬化 (MS)患者的实验室检查指标。方法 寡克隆区带的测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法 ,IgG合成率的测定采用琼脂糖凝胶免疫火箭电泳法。 结果 寡克隆区带 54 .5 % ,IgG合成率 67.3 % ,寡克隆区带合并IgG合成率81 .8% ,VEP为 62 .2 % ,BAEP为 63 .2 % ,SEP为 64 .5 % ,VEP、BAEP及SEP三者均异常为 48.3 % ,MRI为 73 .5 % ,CT为 8.3 % ,实验室各项指标联合分析 ,阳性率为 96 .4%。结论 无论从实验室支持诊断MS ,还是从病因和发病机制的角度去认识MS ,IgG合成率和寡克隆区带的同时测定 ,更有其深远的意义。

眼睑下垂重症肌无力患者视频眼像测算系统的分析

目的应用测量新斯的明注射后重症肌无力(MG)眼睑下垂程度变化,为临床诊断提供客观、精确和规范化的测量方法。方法本文研究包括34名MG病例、30例非MG患者及30名正常健康个体。注射新斯的明试验前和试验后,测量MG组、非MG对照组和正常对照组病人睑裂大小,分析MG组和对照组的多次测量值和显效时相对值,计算多次测量值的敏感度、特异度和约登指数。结果 MG组患者、非MG对照组和正常对照组平视睑裂大小多次测量值的平均数±标准差分别为2.621±0.376mm、0.823±0.266mm和0.853±0.254mm。MG组与非MG组和正常组间差异有统计学显著意义(P<0.05)。多次测量值的灵敏度、特异度和约登指数分别96.7%、100%、和0.967。结论应用视频眼像测算系统进行新斯的明试验辅助诊断MG,是客观、精确和规范化的测量方法 。

重症肌无力患者乙酰胆碱酯酶抗体的测定

纯化人脑组织中的乙酰胆碱酯酶为抗原包被免疫板，建立血清中乙酰胆碱酯酶抗体测定的ＥＬＩＳＡ法。探讨了检测方法的特异性和可重复性，并对３组样本进行了测定。证明此方法特异、灵敏、可重复。提示对重症肌无力的研究可能提供１个新的实验室检测指标。

Alzheimer病皮肤血管β-淀粉样蛋白免疫组化标记及应用价值

目的 标记阿尔茨海默病皮肤血管β－淀粉样蛋白，寻找其特异性的实验室诊断指标。方法 选用链霉素化过氧 化酶标记物，使用合成的β－淀粉样蛋白免源性抗血清和天然的β－淀粉样蛋白单抗，采用ＳＡＢＣ法分别对年龄相匹配的８ 例老年性痴呆，８例多梗塞性痴呆和１２例非痴呆患者皮肤血管中的淀粉蛋白进行免疫组化标记。结果三组样本中淀粉蛋白 沉积的阳性率ＡＤ ６２．５％，ＭＩＤ３７．５％，ＮＤＣ８．３％。ＡＤ组较ＮＤＣ及ＡＤ组合并ＭＩＤ组较ＮＤＣ组有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。 结论 标记皮肤β－淀粉样蛋白可以为两种常见的老年期痴呆提供实验室诊断依据，但作为Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的特异性诊断指标， 尚待加大样本数量进一步探讨。

“新义考、新课标”背景下小学体育教师体能教学能力提升的培训策略

北京教育学院小学体育教师体能教学能力提升专题培训班在北京市密云区选取31位小学体育教师,针对小学生体能发展练习,基于新课标理念,结合新义考内容与要求,以体能专业理论学习、小学体能学练策略实践、小学体能课堂运用为主,加强对小学生体能学练的内容进行合理设计,开发良好的学练内容,加强学生综合体育与健康素养发展,培养不同的针对性练习策略,突出课堂内外的学练实效,全方位提升小学教师体能教学能力。

皮肤血管β-淀粉样蛋白免疫组化标记及应用价值

目的 :标记皮肤血管 β -淀粉样蛋白 ,寻找其对阿尔茨海默病的特异性实验室诊断指标。方法 :选用链霉素化过氧化酶标记物 ,使用合成的 β -淀粉样蛋白兔源性抗血清和天然的 β -淀粉样蛋白单抗 ,采用SABC法分别对年龄相匹配的 8例老年性痴呆 ,8例多梗死性痴呆和 12例非痴呆患者皮肤血管中的淀粉蛋白进行免疫组化标记。结果 :三组样本中淀粉蛋白沉积的阳性率AD6 2 5 % ,MID37 5 % ,NDC8 3 %。AD组较NDC及AD组并MID组较NDC组有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,MID组较NDC组及AD组较MID组无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 :标记皮肤血管 β -淀粉样蛋白可为两种常见的老年期痴呆提供一个实验室诊断指标 ,但作为阿尔茨海默病的特异性诊断指标 ,尚待探讨。

重症肌无力患者血清学标志物检测及临床意义

目的探讨血清抗乙酰胆碱受体(ACh R)抗体、抗连接素(Titin)抗体和抗Ryanodine受体(Ry R)抗体对重症肌无力的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验分别检测182例重症肌无力患者(MG组)、105例其他神经系统疾病患者(OND组)和62例正常对照者(对照组)血清抗ACh R抗体、抗Titin抗体和抗Ry R抗体水平。结果重症肌无力患者血清抗ACh R抗体、抗Titin抗体和抗Ry R抗体阳性率分别为68.13%(124/182)、64.29%(117/182)和67.03%(122/182),高于OND组(均P=0.000)和对照组(均P=0.000);3种血清学标志物同时阳性,诊断重症肌无力的灵敏度为41.21%,特异度达99.40%。其中,早发型与晚发型重症肌无力亚组血清抗ACh R抗体、抗Titin抗体和抗Ry R抗体阳性率差异无统计学意义(均P>0.05);伴胸腺瘤的重症肌无力亚组仅血清抗ACh R抗体阳性率高于不伴胸腺瘤的重症肌无力亚组(P=0.004),而抗Titin抗体和抗Ry R抗体阳性率差异无统计学意义(均P>0.05);不同改良Osserman分型亚组中仅全身型重症肌无力(Ⅱa和Ⅱb型)血清抗ACh R抗体阳性率高于眼肌型重症肌无力(Ⅰ型;P=0.005,0.012),而抗Titin抗体和抗Ry R抗体阳性率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论血清抗ACh R抗体、抗Titin抗体和抗Ry R抗体均有助于诊断重症肌无力,对于3种生物学标志物同时呈阳性的患者,应高度怀疑重症肌无力,其中,眼肌型重症肌无力患者血清抗ACh R抗体水平较高,有可能进展为全身型重症肌无力,应积极治疗。

槲皮素逆转白血病细胞系K562/A多药耐药性及相关基因表达的研究

本课题研究槲皮素(quercetin,Q ue)对白血病细胞系K562/A多药耐药的影响及机制。体外培养的K562和K562/A细胞经不同浓度的Q ue处理,采用MTT法检测Q ue对细胞的生长抑制率及对阿霉素(adriam ycin,ADR)的增敏倍数;流式细胞术检测Q ue作用后细胞内ADR浓度的变化,Annex in V/PI双染色法观察细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR基因芯片检测药物转运蛋白基因及凋亡相关基因表达的变化。结果表明,Q ue在5-160μm o l/L的浓度范围内对K562和K562/A细胞均有剂量依赖性的生长抑制作用,低毒剂量的Q ue使K562/A对ADR的敏感性显著增强;在ADR为5μm o l/L时,Q ue与细胞共培养2小时细胞内ADR浓度则明显增加;Q ue可剂量依赖性地诱导K562和K562/A细胞的凋亡;Q ue可下调ABC、SLC家族药物转运蛋白相关基因的表达,并可调节BCL2-、TNF等凋亡相关基因的表达。结论:Q ue可通过多种机制逆转白血病细胞系K562/A的多药耐药性,逆转效果与剂量呈正相关。

多发性硬化患者抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体的检测及其意义

目的 检测多发性硬化 (MS)患者抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体并探讨其意义。方法 采用EL ISA方法测定 5 6例多发性硬化患者急性期血清和脑脊液配对标本的抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MOG)抗体 ,30例其它神经疾病 (OND)患者为对照。结果 MS患者血清和脑脊液均可测到抗 MOG抗体 ,血清抗 MOG抗体阳性率为 35 .7% ,脑脊液抗 MOG抗体阳性率为 4 2 .8% ,OND组血清和脑脊液抗 MOG抗体阳性率均为 6 .7% ,与 OND组比较均有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ,但血清和脑脊液比较无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 多发性硬化患者血清和脑脊液中均可检测到抗 MOG抗体 ,可为临床诊断和治疗提供指导。