葶苈大枣泻肺汤通过ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴对心梗后心衰模型大鼠心室重构的影响

目的探讨经方葶苈大枣泻肺汤对心肌梗死后心力衰竭模型大鼠心室重构的作用机制。方法应用左冠状动脉前降支结扎术构建心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,分8组:假手术组、模型组、A779组(1 mg/kg)、A779(1 mg/kg)+葶苈大枣泻肺汤等效剂量组(0.8 g/kg)、A779(1 mg/kg)+葶苈大枣泻肺汤高剂量组(1.6 g/kg)、葶苈大枣泻肺汤等效剂量组(0.8 g/kg)、葶苈大枣泻肺汤高剂量组(1.6 g/kg)和氯沙坦钾组(10 mg/kg),各组分别给予等体积蒸馏水或者相应的药物,灌胃4周。采用Masson染色法测定大鼠心肌组织中胶原纤维分布;采用碱水解法测定心肌组织羟脯氨酸(Hyp)含量;采用免疫组化法检测心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)的表达水平;采用酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、可溶性致瘤性抑制因子2(sST-2)等心肌纤维化相关指标;采用Western blot法检测心肌组织中血管紧张素转换酶2-血管紧张素-(1-7)-Mas[ACE2-Ang-(1-7)-Mas]轴相关蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组、A779组心肌细胞排列紊乱,胶原纤维沉积明显增多,心肌纤维化明显,Hyp含量和MMP-2、MMP-9、sST-2水平显著升高,COLⅠ、COLⅢ阳性表达显著增强,TIMP-1水平和ACE2、Ang-(1-7)、Mas蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,葶苈大枣泻肺汤等效剂量组和高剂量组上述指标均可得到不同程度的改善。与A779组比较,A779+葶苈大枣泻肺汤等效剂量组及A779+高剂量组心肌排列及胶原分布可一定程度地改善,Hyp含量和MMP-2、MMP-9水平降低,COLⅠ、COLⅢ阳性表达显著减少(P<0.05),但Ang-(1-7)和Mas蛋白表达水平未显著升高。结论葶苈大枣泻肺汤可通过提高ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴蛋白的表达改善心肌梗死后心力衰竭模型大鼠的心室重构。

加参方浸膏对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的干预作用研究

目的:观察加参方浸膏对过氧化氢(H_2O_2)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的干预作用,并探讨其作用机制。方法:采用MTT法,考察400、200、100、50、25μmol/L的H_2O_2与3.0、1.8、0.9、0.3、0.1 mg/m L加参方浸膏对H9c2心肌细胞活性的影响。将H9c2心肌细胞分为正常组、模型组、加参方组,除正常组细胞加入相应培养基外,模型组、加参方组细胞均采用50μmol/L H_2O_2处理以诱导细胞发生氧化应激损伤,加参方组在模型组基础上加入0.3 mg/m L加参方浸膏干预处理。采用DAPI染色法,在荧光显微镜下观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用荧光定量逆转录-聚合酶链式反应法测定细胞中胱天蛋白酶3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2 m RNA表达水平,Western Blot法测定Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果:50μmol/L为H_2O_2最适造模浓度,0.3 mg/m L为加参方浸膏最适药物干预浓度。与模型组比较,加参方组细胞的形态改善,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);Caspase-3、Bax m RNA及蛋白表达水平显著降低,Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:加参方浸膏对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与下调细胞中Caspase-3、Bax表达,上调Bcl-2表达有关。

血管紧张素Ⅱ对原代培养大鼠心肌成纤维细胞增殖及转分化的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)对原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及转分化的影响,摸索合适的AngⅡ浓度。方法应用胰蛋白酶消化出生1d^3d乳鼠心脏,差速贴壁法分离培养心肌成纤维细胞,免疫荧光法鉴定心肌成纤维细胞波形蛋白(vimentin)表达;用不同浓度的AngⅡ作用于心肌成纤维细胞,MTT法检测AngⅡ对心肌成纤维细胞增殖影响;免疫荧光技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)荧光含量;Westernblot技术检测α-SMA蛋白表达量变化。结果不同浓度AngⅡ作用于心肌成纤维细胞,10^(-6)、10^(-7) mol/L AngⅡ能促进成纤维细胞增殖增加;10^(-5)、10^(-6)、10^(-7) mol/L AngⅡ能促进α-SMA荧光强度增加;10^(-6) mol/L AngⅡ可引起α-SMA蛋白表达量增加,且差异具有统计学意义。结论 AngⅡ可引起心肌成纤维细胞增殖;同时可诱导α-SMA表达量增加。

中医药改善心肌线粒体能量代谢的研究进展

慢性心力衰竭是各类心血管疾病最终的临床表现,是心血管领域的一个难题。心衰的发展过程是线粒体功能紊乱的过程,保护线粒体结构和功能以防治心衰成为当下的研究热点。本文就中医药抑制、血管紧张素Ⅱ及提高心肌细胞线粒体呼吸酶复合物活性、心肌线粒体跨膜电位(MMP)、心肌Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性4方面保护心肌线粒体作用机制进行探讨。

中医药抑制心脏脂肪酸代谢的研究进展

慢性心力衰竭(CHF)是一种由各种心脏疾病导致心功能不全的复杂临床症候群,是各种心脏疾患的终末状态。能量代谢障碍是心衰的原因,也可作为心衰的继发后果。21世纪,以心肌代谢重构为靶点的心肌代谢疗法成为治疗热点,也是治疗理念的一大转变,针对慢性心力衰竭,中医药在控制症状﹑改善预后﹑减少西药毒副反应﹑调整病人机体的免疫功能﹑减少心衰复发和提高病人生活质量等方面具有独特的疗效优势,因此,慢性心衰是心血管领域中医药防治的优势病种,以抑制心脏脂肪酸代谢为切入点,开展中医药调控心肌能量代谢防治慢性心力衰竭具有广阔前景和应用价值。

大鼠H9c2心肌细胞有氧氧化及无氧酵解的影响因素探讨

目的利用细胞能量代谢检测系统(seahorse XF analyzer)探讨H9C2大鼠心肌细胞能量代谢的影响因素。方法 H9c2大鼠心肌细胞贴壁培养后以不同细胞密度接种于Seahorse XF24孔板,利用糖酵解压力试剂盒检测糖酵解压力曲线;以105/mL密度接种细胞,以不同浓度碳酰氰-4-三氟甲氧基苯胺(FCCP)刺激细胞,利用线粒体有氧氧化试剂盒检测线粒体功能。结果各密度下细胞反应良好,以2×104细胞数对寡霉素刺激后的速率数值较好,为50～400范围,是较合适的细胞密度;2μmol/L FCCP能刺激最大反应,为合适的FCCP浓度。结论细胞密度和FCCP浓度是影响心肌细胞有氧氧化及无氧酵解功能测定的主要因素,H9c2心肌细胞以2×104/孔细胞密度接种,FCCP浓度2μmol/L刺激细胞将适合细胞线粒体功能的检测。

黄芪治疗心力衰竭的研究进展

介绍黄芪改善心肌细胞的能量代谢、强心作用、利尿作用、对血管的保护作用,分析黄芪有效成分皂苷类、黄酮类、多糖类等多种化学成分对心力衰竭的影响。

参松养心胶囊联合胺碘酮治疗冠心病心律失常疗效及安全性的Meta分析

目的:系统评价参松养心胶囊联合胺碘酮治疗冠心病心律失常的疗效与安全性。方法:检索建库以来到2019年3月1日Pubmed、Web of science、Cochrane Library、万方、维普、中国知网等电子数据库所有应用参松养心胶囊联合胺碘酮治疗冠心病心律失常的临床随机对照试验(RCT),排除不符合标准的资料后,应用RevMan 5.3软件对符合标准的资料进行Meta分析。结果:参松养心胶囊联合胺碘酮对比单用胺碘酮临床疗效(RR=1.22,95%Cl[1.17,1.27],I 2=0%,P<0.00001),心电图疗效(RR=1.27,95%Cl[1.16,1.40],I 2=0%,P<0.00001),血流动力学疗效:血细胞沉降率(MD=-4.38,95%Cl[-5.13,-3.64],I 2=0%,P<0.00001),红细胞比容(MD=-11.14,95%Cl[-12.04,-10.24],I 2=0%,P<0.00001),纤维蛋白原(MD=-17.80,95%C l[-40.18,4.58],I 2=94%,P=0.12),血浆比黏度(MD=-0.75,95%Cl[-0.96,-0.55],I 2=86%,P<0.00001),不良反应发生率(RR=0.46,95%Cl[0.32,0.65],I 2=5%,P<0.00001)。结论:相比于单用胺碘酮,参松养心胶囊联合胺碘酮治疗冠心病心律失常疗效显著且安全性更高。

葶苈大枣泻肺汤加减治疗心力衰竭疗效与安全性的Meta分析

目的系统评价葶苈大枣泻肺汤加减治疗心力衰竭的临床疗效与安全性。方法检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台(WangFan)、维普中文科技期刊全文数据库(VIP)、PubMed、Web of Science、Cochrane Library数据库,检索时间为自建库至2019年5月1日,获得所有应用葶苈大枣泻肺汤加减治疗心力衰竭临床随机对照试验(RCT),严格根据纳入与排除标准进行筛选,应用Review Manager 5.3软件对纳入文献进行Meta分析。结果最终纳入6篇文献,涉及病例472例,试验组与对照组各236例。Meta分析结果表明:与对照组相比,试验组葶苈大枣泻肺汤加减治疗可提高心力衰竭临床疗效[OR=2.53,95%Cl(1.37,4.66),P=0.003],改善心功能[OR=3.17,95%Cl(1.09,9.25),P=0.03],均具有统计学意义。与对照组相比,试验组可提高左室射血分数[MD=2.06,95%Cl(-2.49,6.61),P=0.37],降低不良反应发生率[OR=0.53,95%Cl(0.13,2.10),P=0.37],差异均无统计学意义。结论现有证据表明,在常规治疗基础上,加用葶苈大枣泻肺汤可提高心力衰竭临床疗效,但其安全性有待进一步研究。

基于网络药理学研究葶苈大枣泻肺汤治疗心力衰竭的作用机制

目的通过网络药理学方法研究葶苈大枣泻肺汤的活性成分、作用靶点及治疗心力衰竭可能的作用机制。方法采用TCMSP数据库及Swiss Target Prediction数据库获得葶苈大枣泻肺汤的活性成分及作用靶点,通过Uniprot数据库对靶点进行标准化,通过GeneCard、OMIM数据库获得心力衰竭的疾病靶点。将药物的作用靶点与疾病靶点进行交集,获得药物-疾病共同靶点。应用STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用网络图(PPI),并应用R语言对核心靶点进行筛选。采用Cytoscape 3.7.2软件绘制出药物活性成分-心力衰竭靶点网络。最后运用R语言对共同靶点进行基因本体(GO)生物过程分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果本研究共预测到葶苈大枣泻肺汤共39个活性成分,122个与心力衰竭共同的靶点。PPI网络中核心靶点为信号传导及转录激活蛋白-3(STAT3)、蛋白激酶(AKT1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等。GO生物过程结果显示与细胞间信号传导、分子与蛋白结合过程及体内酶活性调节等相关。KEGG通路富集分析结果显示主要涉及AGE-RAGE信号通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)、流体剪切应力与动脉粥样硬化(Fluid shear stress and atherosclerosis)及MAPK信号通路等方面。结论葶苈大枣泻肺汤治疗心力衰竭具有多成分、多靶点、多通路的特点。该研究为进一步探讨该药治疗心力衰竭的作用机制提供了参考。

中医药改善心脏葡萄糖代谢的研究进展

慢性心力衰竭是各种循环系统疾病的终末期,是当前心血管领域研究的热点与难点。随着研究的进展,能量代谢疗法已成为治疗心衰的新靶点,而中医药已经证实可多靶点、多环节、多途径改善心肌能量代谢,延缓心衰的进展。文章就中医药通过多途径改善葡萄糖代谢,优化心肌能量代谢的研究进展做一综述。

槲皮素通过ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴对AngⅡ诱导下大鼠心肌收缩蛋白表达的影响

目的:探讨槲皮素(Que)通过血管紧张素转换酶2-血管紧张素-(1-7)-Mas轴[ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导下原代大鼠心肌收缩蛋白表达的影响。方法:取1~2 d日龄大鼠的心肌组织,分离、培养原代心肌细胞,并构建心肌细胞ACE2基因沉默模型。实验分为12组,其中AngⅡ组、AngⅡ+小干扰RNA(siRNA)组、AngⅡ+A779组为模型组,AngⅡ+氯沙坦组为阳性对照组,AngⅡ+Que40组、AngⅡ+Que80组、AngⅡ+siRNA+Que40组、AngⅡ+siRNA+Que80组、AngⅡ+A779+Que40组、AngⅡ+A779+Que80组为实验组,另设空白组、siRNA组。其中AngⅡ终浓度为1×10^(-6) mol/L,siRNA终浓度为50 nmol/L,Que终浓度分别为40、80μmol/L,A779(Mas受体拮抗剂)终浓度为1μmol/L,氯沙坦终浓度为1×10^(-4) mol/L。分别检测各组心肌细胞中ACE2、Ang-(1-7)、Mas的mRNA和蛋白表达水平,以及Na^(+)/Ca^(2+)交换通道(NCX)、钙泵(SERCA2a)、磷蛋白(PLB)等3种心肌收缩蛋白的表达水平。结果:与AngⅡ组比较,AngⅡ+Que80组细胞中的Mas mRNA表达水平升高(P<0.05);AngⅡ+氯沙坦组细胞中的ACE2、Mas mRNA表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+Que40组细胞中的ACE2、Ang-(1-7)蛋白表达水平升高(P<0.05);与AngⅡ+siRNA组比较,仅AngⅡ+siRNA+Que40组Ang-(1-7)蛋白表达水平升高(P<0.05);与AngⅡ+A779组比较,仅AngⅡ+A779+Que40组Ang-(1-7)蛋白表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+Que40组NCX蛋白表达水平降低(P<0.05),AngⅡ+氯沙坦组NCX蛋白表达水平降低(P<0.05);与AngⅡ+A779组比较,AngⅡ+A779+Que80组NCX蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Que一定程度上提高了AngⅡ诱导大鼠心肌细胞模型中ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴的表达,从而调节心肌收缩蛋白。

中医论治冠心病的研究进展

冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)作为心血管临床常见多发疾病,发病凶险,死亡率高,严重威胁人们的身体健康与生命安全。中医学对冠心病的认识已有数千年历史,历代医家通过对该病病因病机、辨证分型、治法方药、预防调控等方面的不断探索,逐步形成了较为完善的中医学理论体系。当代医家在此基础上进一步创新发展,形成各自的论治特色。通过对历代医家及当代名中医对冠心病的论治进行综述,以期更好地指导临床治疗。

黄芪治疗病毒性心肌炎的研究进展

病毒性心肌炎（VMC）是由病毒及其毒素经血液循环直接侵犯心肌,引起局灶性或弥漫性心肌间质炎性渗出和心肌纤维变性或坏死,导致心功能障碍和全身症状的疾病。其临床表现以神疲乏力、面色苍白、心悸胸闷、气短多汗、四肢欠温为特征,是临床常见的心血管疾病。中医认为VMC属于＂心悸＂＂怔忡＂＂胸痹＂等范畴~,多由于温热邪毒侵犯心肌,与痰浊、瘀血相互搏结,久之心之气阴亏损,则无力营运全身血脉。

葶苈大枣泻肺汤通过ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴调节心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌收缩蛋白的作用机制

目的:研究葶苈大枣泻肺汤通过ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴调节心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌收缩蛋白的作用机制。方法:结扎大鼠LAD建立心肌梗死合心力衰竭模型。分8组:假手术组、模型组、A779组、A779+葶苈大枣泻肺汤等效剂量组、A779+葶苈大枣泻肺汤高剂量组、葶苈大枣泻肺汤等效剂量组、葶苈大枣泻肺汤高剂量组、氯沙坦钾组,给予相应药液灌胃治疗4周。ELISA法检测脑钠肽(BNP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)含量;Western Blot检测NCX、SERCA2a、PLB、PI3K、p-AKT和p-eNOS的蛋白表达;RT-PCR检测血管紧张素转换酶2(ACE2)、血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]、Mas mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组、A779组BNP、AngⅡ、ALD含量明显升高,NCX蛋白表达明显升高,SERCA2a、PLB、p-AKT、p-eNOS蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,葶苈大枣泻肺汤明显降低BNP、AngⅡ、ALD含量和NCX蛋白表达,提高SERCA2a、PLB、p-AKT蛋白表达(P<0.01,P<0.05),且高剂量组效果优于等效剂量组;与A779组比较,A779+等效剂量组、A779+高剂量组降低BNP、AngⅡ、ALD含量,提高p-AKT蛋白表达(P<0.01,P<0.05),且A779+高剂量组效果优于A779+等效剂量组,但效果不及等效剂量组、高剂量组。结论:葶苈大枣泻肺汤可通过ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴及PI3K/AKT信号通路调节心肌收缩蛋白表达,增强心肌收缩力,效果以高剂量为优。

参附益心颗粒对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌线粒体呼吸功能的影响

目的观察参附益心颗粒对心力衰竭大鼠线粒体呼吸功能的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法复制心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、参附益心颗粒(简称参附)常用剂量组[1.76 g/(kg·d)]、大剂量组[8.8 g/(kg·d)]和氯沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只,同时设假手术组10只。分别给予相应的药物或相同体积的蒸馏水灌胃4周。利用颈动脉导管法测量相关血流动力学指标:心率(HR)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室压最大上升和下降速率(±dp/dtmax);采用Seahorse法检测线粒体呼吸功能相关参数:基础呼吸、最大呼吸、态3呼吸(T3)、态4呼吸(T4)和控制率(RCR);Western Blot法检测心肌线粒体呼吸链复合酶Ⅰ~Ⅴ的蛋白表达量。结果与假手术组比较,模型组HR、LVEDP明显升高(P<0.01),LVSP、±dt/dpmax降低(P<0.05,P<0.01);T3、最大呼吸及RCR1、RCR2值均降低(P<0.01),T4明显升高(P<0.01);呼吸链复合酶Ⅲ和Ⅳ表达降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,各药物干预组LVEDP降低(P<0.01),±dt/dpmax升高(P<0.05,P<0.01),参附常用量和大剂量组LVSP增高(P<0.05,P<0.01),参附常用量组和氯沙坦组中HR降低(P<0.05);各药物干预组T3、最大呼吸和RCR值均上升(P<0.01),参附常用量组和氯沙坦组T4下降(P<0.05,P<0.01);各药物干预组呼吸链复合酶Ⅲ均升高(P<0.01,P<0.05),参附大剂量组和氯沙坦组中呼吸链复合酶Ⅳ升高(P<0.05)。结论参附益心颗粒能够改善心衰大鼠线粒体呼吸功能、增加心肌收缩力,其机制可能与抑制线粒体呼吸链复合酶Ⅲ和Ⅳ含量的降低有关。

参附益心方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能及能量代谢相关因子的影响

目的:从能量代谢方面探讨参附益心方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能的影响。方法:通过结扎前降支的方法建立心肌梗死后心力衰竭模型,彩色多普勒超声检测大鼠心功能,ELISA试剂盒检测大鼠血浆中BNP、COLⅠ、COLⅢ含量,Masson染色观察心肌组织胶原纤维及肌纤维的形态和分布,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位,RT-PCR检测线粒体功能相关因子ND-1、ND-2、COX、Tfam基因表达,Western blot方法检测高能磷酸盐代谢关键酶CK、ANT蛋白表达。结果:与模型组比较,参附益心方高剂量、辅酶Q10均可显著提高心肌梗死后心力衰竭大鼠LVEF和LVFS,减小LVESD,降低血浆BNP、COLⅠ、COLⅢ含量,提高线粒体膜电位,提高线粒体DNA相关因子ND-1、ND-2、COX、Tfam基因表达及高能磷酸盐代谢关键酶CK、ANT蛋白表达(P<0.05)。结论:参附益心方能够改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体结构和功能,提高线粒体氧化磷酸化能力及高能化合物生成,进而改善心功能。

葶苈大枣泻肺汤对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨葶苈大枣泻肺汤对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响。方法:结扎大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。分5组:假手术(A)组、模型(B)组、葶苈大枣泻肺汤等效剂量(C)组、葶苈大枣泻肺汤高剂量(D)组、氯沙坦(E)组。C组(0.8g·kg-1·d-1)、D组(1.6g·kg-1·d-1)、E组(10mg·kg-1·d-1)给予相应药物灌胃;A、B组给予等体积蒸馏水灌胃。给药4周,腹主动脉采血后处死大鼠取心脏缺血危险区组织,行Masson染色,观察大鼠心肌组织纤维化程度;免疫组化法观察大鼠心肌中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(COLⅠ、COLⅢ)表达;碱水解法检测大鼠心肌组织内羟脯氨酸(HYP)含量;ELISA法检测大鼠血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、半乳凝素3(Gal-3)、结缔组织生长因子(CTGF)含量。结果:与A组比较,B组心肌结构紊乱,胶原沉积程度重,COLⅠ、COLⅢ表达增高,HYP含量显著升高(P<0.01),TGF-β1、Gal-3、CTGF含量显著升高(P<0.01),心肌纤维化明显;与B组比较,各给药组胶原沉积程度减轻,COLⅠ、COLⅢ表达降低,心肌组织HYP含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、Gal-3、CTGF含量显著降低(P<0.01)。结论:葶苈大枣泻肺汤可降低胶原沉积,减轻心肌纤维化,提示在心肌梗死后早期抑制心肌纤维化的过程,能减慢心肌梗死后心力衰竭的进展。

参附益心颗粒对缺氧诱导的大鼠H_9C_2心肌细胞能量代谢的影响

目的探讨参附益心颗粒治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法以不同浓度(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 9、1. 2 mg/ml)的参附益心颗粒处理H_9C_2细胞24 h,MTT法检测细胞活性,筛选后续实验的药物浓度。将H_9C_2细胞分为正常组(正常培养)、模型组(缺氧6 h)、曲美他嗪组(1×10^(-4)mol/L曲美他嗪+缺氧6 h)、辅酶Q10组(1×10^(-4)mol/L辅酶Q10+缺氧6 h)及中药低剂量组(0. 25 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h)、中药高剂量组(0. 5 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h),检测各组心肌细胞ATP含量、底物代谢酶脂肪酸转运酶(FAT)、肉碱脂酰转移酶1 (MCPT-1)、中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、葡萄糖转运子4 (GLUT-4)、腺苷酸转运体(ANT)、肌酸激酶(CK)蛋白表达水平;观察各组H_9C_2心肌细胞超微结构的变化。将H_9C_2细胞分为正常组、模型组、中药组(0. 5 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6 h),JC-1染色检测线粒体膜电位变化。结果 0. 5 mg/ml参附益心组及低于此浓度组无细胞毒性,以0. 5 mg/ml参附益心颗粒用于中药组。与正常组比较,模型组H_9C_2细胞ATP含量及FAT、MCPT-1、MCAD、GLUT-4、ANT、CK蛋白含量明显降低,AMPK、PDH蛋白含量明显升高(P <0. 05)。与模型组比较,中药组和辅酶Q10组心肌细胞中ATP含量及FAT、MCPT-1、MCAD、GLUT-4、ANT、CK蛋白含量均明显升高(P <0. 05)。正常组细胞线粒体结构正常,模型组细胞膜破裂,线粒体肿胀,边界模糊不清。与模型组对比,中药组细胞损伤明显减轻,细胞膜完整,线粒体结构清晰。JC-1染色显示中药组可以改善线粒体膜电位的下降。结论参附益心颗粒可能通过升高心肌H_9C_2细胞ATP、GLUT-4、ANT、FAT、MCPT-1、MCAD、CK蛋白表达,降低AMPK、PDH蛋白表达,改善缺氧诱导H_9C_2心肌细胞线粒体膜电位,从而发挥治疗慢性心力衰竭的作用。

加参方对AngⅡ诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的干预作用研究

目的:观察加参方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的干预作用,并探讨其作用机制。方法:H9c2大鼠心肌细胞常规培养,用AngⅡ(1×10-6mol/L)建立心肌细胞凋亡模型,加参方0.3mg/mL干预24h,MTT法检测加参方对细胞活力的影响,DAPI染色镜下观察细胞核形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。荧光定量PCR测定凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2、p53 mRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与模型组比较,加参方能干预AngⅡ诱导心肌细胞发生凋亡,提高心肌细胞活性,降低心肌细胞凋亡率(P<0.05);下调促凋亡因子Caspase-3、Bax、p53 mRNA和蛋白的表达,上调抑凋亡因子Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论:加参方可明显干预AngⅡ诱导H9c2大鼠心肌细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达有关。