果蝇肠道免疫的研究进展

果蝇肠道上皮细胞是机体抵抗微生物入侵的第一道防线。双重氧化酶(dual oxidase,DUOX)产生的活性氧(reactiveoxygen species,ROS)与核转录因子NF-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)信号通路产生的抗菌肽(antibacterial peptide,AMP)为肠道提供了广谱抗菌作用。同时,肠道上皮细胞采用多种精确复杂的负调控机制来调节DUOX-ROS与NF-κB-AMP免疫系统,实现对共生菌群的免疫耐受。此外,肠道干细胞能通过增殖与分化来修复由感染引起的肠道损伤。本文对NF-κB信号通路、ROS的免疫调节机制及肠道干细胞分化机制进行了综述。

果蝇jumeaux蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的原核表达及纯化重组果蝇jumeaux(jumu)蛋白,制备大鼠抗果蝇jumu多克隆抗体。方法用RT-PCR方法扩增jumu基因,并将其克隆到原核表达载体pRSETA中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导His-jumu融合蛋白的表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及蛋白表达的特异性后,用Ni-NTA亲和层析柱纯化带有6×His标签的融合蛋白,用纯化后的蛋白免疫SD大鼠制备多克隆抗体。以Western blot、免疫荧光染色法鉴定抗体的特异性,并用制备的抗体检测jumu在果蝇不同器官中的表达情况。结果成功构建了pRSETA-jumu原核表达质粒,jumu融合蛋白在大肠杆菌内高表达并纯化,免疫SD大鼠得到抗jumu多克隆抗体。用Western blot和免疫荧光染色检测发现制备的抗体有较强的特异性,并能检测内源性蛋白。通过免疫荧光染色发现jumu的表达存在组织特异性,且在唾液腺中的表达量最高。结论成功获得了抗jumu蛋白的特异性抗体,为进一步研究jumu蛋白的功能和作用机制奠定了基础。

Simulink仿真模型在药物代谢动力学教学改革中的应用

目的 探究Matlab Simulink仿真模型辅助药理学之药物代谢动力学理论部分的启发式、探究式教学方法,加深学生对该部分知识的掌握程度。方法 引入Matlab Simulink技术编写单次、多次给药下的房室模型,建立药代动力学教改方案,让学生探究式地理解什么是房室模型、稳态血药浓度等专有名词,并解决在教学过程中学生对复杂公式难以理解的问题。教改方案以沈阳医学院2020级麻醉医学专业的学生为研究对象,设立对照组(n=30)与试验组(n=30);两组学生均由同一名授课教师授课。试验组在传统教学的基础上将开发的Simulink模块融入课上教学与第二课堂中;采用问卷调查法了解试验组对教改方案的认可度,并比较两组学生主客观题的阶段测验成绩。结果 问卷调查结果显示,试验组所有学生均认为将Simulink引入药代动力学授课有助于理解学习内容并提高自身的科研思维能力;93%的学生认为该方案可提高学习动力;仅有13%的学生认为Simulink的引入占用太多课余时间。试验组客观题得分为(83.0±9.8),高于对照组的(75.3±16.9)分(P<0.05);试验组主观题得分为(12.7±5.4),高于对照组的(6.2±2.9)分(P<0.01)。结论 将Simulink仿真方法融入药理学教学过程可作为一种新的教学方法在本科教学过程中开展研究。

果蝇信息和种系资源的获得

黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)作为理想的模式生物已被广泛应用于生物学和医学等领域的研究。在国际一体化网络时代的今天,海量的实验数据和信息不断涌现。目前,国际上一些知名的果蝇网站和种系资源中心可提供丰富的在线信息,极大地方便了科研工作者进行相关领域的科研成果查询和获得果蝇种系资源。本文就常用的果蝇网站作一综述,为我国从事果蝇研究的科研工作者提供信息查询参考。

jumu基因缺失对果蝇淋巴腺血细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究jumu基因缺失对果蝇淋巴腺血细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用荧光免疫染色方法检测jumu基因缺失突变体淋巴腺处于M期及S期的血细胞,鬼笔环肽(phalloidin)染色观察细胞形态变化,利用TUNEL及7-AAD染色分别观察淋巴腺血细胞凋亡及死亡情况。结果:与对照组相比,jumu基因缺失导致淋巴腺处于M期及S期的血细胞数量明显增加,淋巴腺血细胞变大且游离血细胞中出现大量淋巴腺前体血细胞,jumu基因突变体淋巴腺中未出现明显的凋亡及死亡细胞。结论:jumu基因缺失可促进淋巴腺血细胞增殖及解离,但未引起细胞凋亡。

敲低piwi基因对黑腹果蝇血细胞增殖及分化的影响

【目的】探究敲低piwi基因对黑腹果蝇Drosophila melanogaster血细胞增殖及分化的影响。【方法】利用黑腹果蝇e33C-Gal4和Hml-Gal4-UAS-2×EGFP品系分别与野生型w^(1118)和UAS-piwi RNAi品系杂交,实现在黑腹果蝇游离血细胞或淋巴腺中降低piwi基因的表达;采用免疫荧光染色方法检测Piwi蛋白在血细胞中的定位及其对黑腹果蝇血细胞增殖与分化的影响。【结果】Piwi蛋白在黑腹果蝇游离血细胞及整个淋巴腺中都表达,且主要定位在细胞质;敲低piwi基因导致游离血细胞数量明显增加,处于有丝分裂M期的细胞数量增加,但未影响游离血细胞中浆细胞及薄层细胞的分化;敲低piwi基因对淋巴腺血细胞增殖无影响,但导致浆细胞过度分化及薄层细胞的产生。【结论】piwi基因在果蝇游离血细胞中的缺失可引起血细胞过度增殖,而在淋巴腺中敲低可引起血细胞的异常分化。