人参皂甙Rg1对体外磷酸二酯酶5活性的影响

目的 :观察人参皂甙Rg1对磷酸二酯酶 5 (PDE5 )酶活性的影响。 方法 :应用12 5I放射免疫法 ,测定不同浓度的人参皂甙Rg1对PDE5活性的影响 ,并以西地那非作为阳性对照。 结果 :人参皂甙Rg1对PDE5有抑制作用 ,从而阻断cGMP的水解 ,能提高cGMP水平。结论 :人参皂甙Rg1能有效抑制PDE5活性 ,其半数有效浓度IC50 为 7 2 4nmoI/L ;西地那非IC50 为 3 4 2nmol/L。

从牛海绵体组织分离纯化磷酸二酯酶5

目的 :纯化磷酸二酯酶 5 (PDE5 )用以研究其抑制剂及临床意义。方法 :利用快速蛋白液相层析系统 ,NaCl线性梯度分离PDE5。结果 :从牛海绵体组织与牛海绵体血管均得到 3个蛋白峰 ,Western印迹实验证实峰 1为PDE5 ,其余二峰可能为PDE2和PDE3。结论 :哺乳类海绵体组织有cGMP特异性PDE5存在 ,在海绵体血管尤为丰富。采用快速蛋白液相系统成功分离PDE5 ,方法简便可靠。

cGMP特异性磷酸二酯酶5活性及其抑制剂的研究

目的研究以cGMP为特异底物的磷酸二酯酶 5 (PDE5 )的水解酶活性及PDE5选择性抑制剂西地那非(sildenafil)的抑制作用。方法以牛阴茎海绵体为原料 ,通过快速蛋白液相系统分离纯化得到PDE同工酶 ,然后以3 H cGMP为底物 ,经纯化的PDE同工酶催化水解为3 H GMP ,进一步在含 5′ 核苷酸酶的蛇毒液作用下 ,脱去 5′ 磷酸生成3 H 鸟苷 ,在闪烁剂激发下测定3 H 鸟苷的变化 ,绘制PDE活性曲线。以不同剂量的PDE5选择性抑制剂西地那非作用于PDE5 ,经DixonPlots法处理结果以观察西地那非的抑制效应。结果由牛阴茎海绵体纯化得到三个PDE同工酶峰 ,其中第三个峰对cGMP水解活性最强 ,且西地那非对第三峰抑制作用明显。结论海绵体中的PDE以cGMP 特异的PDE5为主 ,西地那非是PDE5的选择性抑制剂 ,通过以上实验观察可初步确定第三峰为PDE5 ,其结果与文献报道相符。

EB病毒胸苷激酶基因的克隆

ＥＢ病毒是一种常见的人类疱疹病毒，现已证实ＥＢ病毒与Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤、低分化的鼻咽癌在病原学上有密切的关系［１、２］，本实验构建了两种ＥＢ病毒胸苷激酶（ＴＫ）基因的重组体，为研究ＴＫ在ＥＢ病毒复制和致癌过程中的作用奠定了基础。

小鼠肝损伤模型的建立及HSS对肝的保护作用的初探

从三周龄幼鼠制备了肝细胞再生刺激物质（Ｈｅｐａｔｉｃｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｓｕｂｓｔａｃｅ，ＨＳＳ）研究结果提示：注射ＣＣｌ４导致小鼠血清ＡＬＴ显著升高，ＡＳＴ也明显增高，表明ＣＣｌ４致小鼠急性肝损伤，而ＨＳＳ对肝损伤具有显著保护作用，为深入研究ＨＳＳ对肝保护作用机理、ＨＳＳ用于临床的可行性提供了基础。

骨髓间充质干细胞和部分肿瘤细胞中Nucleostemin基因的表达

以分离的人胚胎和大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,6种肿瘤细胞株 ,裸鼠肿瘤和转移瘤组织为实验材料 ,以大鼠心肌组织和人胎盘组织为对照 ,探讨nucleostemin基因的表达情况 .RT PCR结果显示 ,nucleostemin基因在MSCs、肿瘤细胞和肿瘤组织中均有不同程度的表达 ,而大鼠心肌和人胎盘组织中无表达 .DNA测序结果证明 ,扩增的PCR产物与GenBank提供的DNA序列完全同源 .SCID裸鼠肿瘤动物模型定量PCR结果证实 ,nucleostemin的mRNA在裸鼠肿瘤组织和转移瘤组织中表达较高 .研究结果表明 ,在细胞中nucleostemin基因不同水平的表达可能与MSCs、肿瘤细胞的增殖和肿瘤的发生、发展与转移有关 .

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

本文报道用多聚酶链反应方法扩增EB病毒胸苷激酶基因。本研究以Raji细胞和B95-8细胞二种不同细胞株的DNA为模板,引物是根据B95-8细胞的胸苷激酶基因序列设计的,均可得到特异的扩增产物,该产物用内切酶Ncol切割鉴定,酶切片段的长度与预期理论值完全一致。

生物化学与分子生物学教学方法的实践和思考

在生物化学与分子生物学教学实践中,对教学方法改革方面取得一些体会和经验。采用多种教学方法并用,尽量用归纳法讲授,引导学生自己归纳出要领甚至结论,锻炼学生思维能力;为学生创造更多参加设计性和综合性实验的机会,充分调动学生的自觉性和创造性。

人磷酸二酯酶同工酶3A在昆虫杆状病毒系统中的表达

目的利用杆状病毒表达系统探讨人磷酸二酯酶同工酶3A(HPDE3A)在Tn细胞中的表达。方法用重组HPDE3A杆状病毒感染昆虫Tn细胞进行蛋白表达,通过RTPCR,SDSPAGE和Westernblotting技术检测HPDE3A表达情况。结果重组杆状病毒在感染Tn细胞后形态变化明显,获得表达产物,RTPCR扩增结果证实了Tn细胞中HPDE3A的mRNA水平增高,Tn细胞能够表达出与HPDE3A多克隆抗体结合的蛋白,蛋白分子质量约为120kD。结论HPDE3A在昆虫杆状病毒表达系统中可以稳定表达,为进一步研究HPDE3A的生物学活性及筛选HPDE3A抑制剂奠定了基础。

一种快速提取DNA的方法

一种快速提取ＤＮＡ的方法临床生化教研室郝顺祖随着分子生物学研究的迅猛发展，提取ＤＮＡ已成为一项常规实验。用经典方法提取ＤＮＡ［１］，即用蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿抽提，耗时较多，提取液需多次转移，易引起污染和ＤＭＡ丢失。采用快速法抽提［２］，利用硅藻与核...

磷酸二酯酶同工酶PDE5的纯化及性质研究

目的 :为了研究磷酸二酯酶 (phosphodiesterase ,PDE ,EC 3 ,1,4,17)同工酶的性质及其临床意义。方法 :我们采用快速蛋白液相层析系统 (fastproteinliquidchromatography ,FPLC)分离纯化PDE5。结果 :从牛阴茎海绵体组织和海绵体血管中均得到 3个蛋白峰 ,它们分别是PDE5、PDE2和PDE3。PDE5是哺乳类海绵体组织中发现的主要PDE同工酶 ,在海绵体血管含量尤为丰富。结论 :PDE5作为药物治疗阳痿症的靶点日益引人注目。为进一步研究PDE5及其抑制剂作用机制打下了基础。

恶性肿瘤放射治疗前后血清DNA聚合酶及唾液酸指标的观察

恶性肿瘤放射治疗前后血清ＤＮＡ聚合酶及唾液酸指标的观察临床生化教研室韩伟国，杨伟珠，郝顺祖附属医院朱月娥ＤＮＡ聚合酶和唾液酸检测作为恶性肿瘤早期诊断方法已有报道［１～２］，但作为肿瘤治疗疗效和预后指标尚未见详细报道，我们观察了４２例不同类型恶性肿瘤患...

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

ＥＢ病毒（ＥＢＶ）是由Ｅｐｓｔｅｉｎ和Ｂａｒｒ从非洲Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤中发现的一种疮疹样病毒，与低分化的鼻咽癌在病原学上有密切关系。用聚合酶链反应方法扩增ＥＢＶ胸苷激酶基因，实验方法简便可靠，引物设计合理，效果满意，为研究胸苷激酶在ＥＢＶ复制和致癌过程中的作用奠定了基础。