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题名广东地区犬瘟热病毒血凝素基因的克隆与序列分析
被引量:5
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作者
林希
刘若寒
郝香琪
郑清栩
陶攀
周沛
李守军
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机构
华南农业大学兽医学院/广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室
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出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期22-28,共7页
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基金
国家重点研发计划(2016YFD0501004)
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文摘
【目的】对广州和东莞市宠物犬感染犬瘟热病毒(CDV)的情况进行病原鉴定和分析,为监测CDV的遗传变异情况和防治犬瘟热(CD)提供数据基础。【方法】从表现CD症状的犬只中鉴定了17份CDV阳性样本,采用RT-PCR的方法克隆得到这些野毒株的血凝素(H)基因序列,采用生物信息学方法进行序列比对分析。【结果】17株CDV的H基因核苷酸与氨基酸序列的相似性分别为97.4%~100.0%和97.5%~100.0%,与Onderstepoort、Lederle和Convac等疫苗株相比,其核苷酸与氨基酸序列相似性分别为90.3%~91.5%和89.4%~90.8%。进化树分析结果显示,17株CDV野毒株均属于AsiaⅠ型,与疫苗株的分支较远;本研究鉴定的野毒株已进化形成9个潜在的N-糖基化位点。【结论】AsiaⅠ型CDV仍为该地区的流行基因型,基因型较稳定,但与疫苗株相比形成了一定的进化距离和出现了大量的变异。因此,继续监控CDV在犬群中的进化,掌握其遗传变异状况具有重要意义。
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关键词
犬瘟热病毒
犬瘟热
血凝素基因
序列分析
变异
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Keywords
canine distemper virus
canine distemper
haemagglutinin gene
sequence analysis
variation
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分类号
S852.65
[农业科学—基础兽医学]
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题名敲低内源性PERK基因对犬细小病毒复制的影响
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作者
李艳超
郝香琪
周沛
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机构
华南农业大学兽医学院
华南农业大学兽医学院
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出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期1149-1155,共7页
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基金
广东省自然科学基金资助项目(2022A1515010733,2023A1515012171)
广州市科技局基础与应用基础专题基金资助项目(一般项目)(SL2022A04J00674)。
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文摘
利用新型CRISPR interference(CRISPRi)技术进行蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)目的基因PERK的敲低。首先,利用慢病毒包装系统经嘌呤霉素筛选后构建稳定表达dCas9-KRAB蛋白的MDCK细胞株。然后,设计靶向PERK转录起始位点(transcription start site, TSS)的特异性小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),向该稳转细胞株转染表达sgRNA的质粒,通过qPCR检测PERK的mRNA表达水平;同时,内质网应激激活剂衣霉素(tunicamycin, Tu)处理该细胞后,通过qPCR检测PERK通路下游GRP78、GRP94、ATF4、GADD34和CHOP等基因mRNA的表达水平。最后,将犬细小病毒2型(canine parvovirus type 2,CPV-2)接种于PERK敲低的MDCK细胞株,通过绝对定量PCR测定不同时间点CPV-2的复制水平。结果表明,敲低PERK基因表达后,CPV-2的复制水平显著下降,说明PERK参与调控CPV-2的复制。以上结果为进一步探究内质网未折叠蛋白反应(endoplasmic reticulum unfolded protein response, UPR^(ER))对CPV-2复制的影响及病毒与宿主相互作用的分子机制研究奠定了基础。
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关键词
PERK
CRISPRi
CPV-2
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Keywords
PERK
CRISPRi
CPV-2
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分类号
S852.2
[农业科学—基础兽医学]
S852.65
[农业科学—基础兽医学]
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