TIMP-1对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制

构建含人组织金属蛋白酶抑制物TIMP1基因的表达载体 ,以磷酸钙沉淀法转染人肝癌细胞系1 BEL 740 2 ,研究过表达TIMP1对肝癌细胞生长的影响 .本研究首先从正常流产胎儿组织中提取总RNA ,通过RT PCR扩增获得TIMP1基因 ,并克隆到pcDNA6表达载体中 ,经酶切鉴定、序列测定结果正确后 ,转染人肝癌细胞系BEL 740 2 .采用MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 )、细胞生长曲线等方法 ,经数据统计分析发现 :TIMP1过表达能够抑制肝癌细胞BEL 740

高校馆藏外文期刊应用研究

从读者、图书馆和院系资料室建设3个方面分析了制约高校图书馆外文期刊应用的主要因素,提出了提高外文期刊应用的7项改进措施,认为图书馆应主导协调各方面因素,发挥外文期刊最大价值。

高校图书馆与大学生人文素质教育

简要论述了人文素质与人文素质教育的内涵,分析了当前大学生人文素质教育的现状及必要性。指出高校图书馆实施人文素质教育的优势,并提出强化高校图书馆助推大学生人文素质教育的4项策略。

基于阅读的高校图书馆人文素质教育探究

基于对当下大学生阅读状况的分析,指出当前大学生人文素质教育的必要性及现状,指出高校图书馆人文素质教育的优势,并提出高校图书馆应对人文素质教育的策略。

浅谈公共图书馆如何引导青少年信息素质教育

本文阐述了青少年信息素质教育的概念和内容,分析了公共图书馆开展青少年信息素质教育的现状及必要性,提出了公共图书馆对青少年进行信息素质教育的四项措施。

谈提高高校图书馆期刊利用率的对策

本文就高校图书馆的期刊利用问题进行了探讨,指出期刊管理人员的素质与服务水平的优劣、期刊的采购不合理、期刊的装订不及时、读者利用文献能力的强弱程度等是影响期刊利用率的主要因素,并提出了提高期刊利用率的六项改进措施。

携带Egr-1基因调控序列的TK基因的腺病毒载体的构建

目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpssimplexvirusthymidinekinase,TK)的腺病毒载体。方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack/Egr-1;与pET酶切获得TKcDNA相连,构成pAdTrack/Egr-1-TK;用PmeI酶切后与pAdEasy-1混合,应用细菌内同源重组法获得重组表达质粒pAdEgr-1-TK。结果:重组表达质粒pAdEgr-1-TK的酶切鉴定符合预期结果,感染肿瘤细胞可见绿色荧光表达。结论:通过细菌内同源重组成功构建含GFP做标志基因的pAdEgr-1-TK重组表达质粒,为研究Egr-1调控自杀基因及对肿瘤细胞进行灭活打下了基础。

由Egr-1调控TK基因灭活胰腺癌细胞的实验研究

目的:观察对放射敏感的早期生长反应基因-1(early growth response-1,Egr-l)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,TK)基因是否对胰腺癌细胞的杀伤作用有增敏效应。方法:以细菌内同源重组法构建含TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK,转染人胰腺癌细胞株PC-3,60Co-γ射线照射后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析各不同照射剂量组TK基因的mRNA的表达。加入前药丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV),MTT法检测其对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果:经60Co-γ射线照射后,与对照组胰腺癌细胞(0.86±0.11)相比,前药GCV可明显提高对转染pAdEgr-1-TK胰腺癌细胞的杀伤效率(0.08±0.03)(P<0.001)。结论:由Egr-l启动子调控的TK自杀基因在γ射线作用下可以显著提高杀伤胰腺癌细胞的能力。

实验动物生物学特性数据化表达的规范化与数据共享

生物学特性数据化表达是实验动物标准化的内容之一,也是实验动物资源共享平台建设的重要组成部分和实现资源整合与共享的条件之一。制定实验动物资源描述规范和有关规程,对实验动物生物学特性和基本信息进行规范化和标准的整理和描述,可为科技工作者提供深入、详尽的资源信息,推动实验动物资源的建设与共享。

试论高校图书馆员的信息素质教育

论述了信息素质的基本内涵,阐述了高校图书馆员信息素质现状,分析了高校图书馆提高馆员信息素质的资源优势,并提出提高图书馆员信息素质的措施。

辐射诱导性自杀基因对胰腺癌体内治疗效果的实验观察

目的将PC-3胰腺癌细胞种植于balb/c裸小鼠皮下,建立移植瘤模型,观察pAdEgr-1-TK注入后在射线和前药GCV下对胰腺癌的治疗作用。方法PC-3胰腺癌细胞以1×107混以0.1 ml磷酸盐缓冲液(PBS)皮下接种于balb/c裸鼠皮下,每组6只,共4组24只,待肿瘤长至约0.6 cm时,分为4组,以PC-3组作为对照,PC-3/pAdE组注射同量混以PBS的pAdEgr-1,PC-3/pAdET(不放射)和PC-3/pAdET(放射)组将纯化腺病毒pAdEgr-1-TK以1×109 pfu/ml、0.1 ml/只直接注射到治疗组肿瘤体内,1次/d,连续3 d,同时,腹腔内每日注射GCV(25 mg/kg),连续14 d,即分两次间隔48 h行剂量为10 Gy的60Co-γ射线照射,观察各组动物肿瘤生长情况,每3天测量肿瘤体积[(长径×短径2)/2],治疗结束后,处死裸鼠,取瘤体称重,并在光镜下观察肿瘤的病理结果变化。结果4组细胞接种后,balb/c裸小鼠均成瘤,成瘤潜伏期无差异,成瘤率为100%,治疗前(60Co-γ射线照射+GCV),四组动物瘤体大小无差异(P=0.824),治疗后,观察对照组肿瘤生长迅速,治疗组肿瘤生长明显减慢,体积和质量PC-3/pAdET(放射)组均明显小于其他3组(P=0.000)。结论成功建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,体内实验证实Egr-1基因启动子在射线作用下可驱动下游TK自杀基因表达而对胰腺癌起治疗作用。

人回盲肠癌荷瘤裸鼠模型的建立和氟尿嘧啶的治疗作用观察

目的:探讨化疗药物氟尿嘧啶在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用。方法:将人回盲肠癌细胞HCT-8接种到BALB/C雌性裸小鼠腹部皮下,按预期方案用氟尿嘧啶进行化疗。采用免疫组化SP法对瘤组织进行检测。结果:成功建立荷瘤小鼠模型。治疗后肿瘤体积无明显变化,而对照组肿瘤增长明显,且瘤组织中突变型P53蛋白的阳性率有明显下降。结论:化疗药物氟尿嘧啶对人回盲肠癌裸鼠肿瘤的治疗有一定效果,可为人肠道肿瘤的治疗提供依据。

辐射调控性TK基因载体在胃癌细胞中的表达

目的利用放射敏感基因早期生长反应基因1(Egr-l)启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(TK),观察其在胃癌细胞中的表达。方法以细菌内同源重组法构建含TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK,转染人胃癌细胞株MGC-803,分别以0、5、7.5、10、15、20Gy剂量γ射线照射,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析,比较TK基因的mRNA表达。结果转染后的胃癌细胞株经射线照射后其TK mRNA的表达较未照射组(56.4±1.46)%有明显提高,以10Gy最为显著(132.3±2.18)%,(P<0.01)。结论经γ射线照射后,射线激活Egr-l启动子可引起TK基因在胃癌细胞中高效表达,为进一步研究胃癌的放化疗提供了依据。

氟尿嘧啶与高能聚焦超声刀的结合在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用

目的探讨化疗和物理治疗的结合在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用。方法人回盲肠癌细胞HCT-8接种到BALB/C雌性裸小鼠腹部皮下,按预期方案进行氟尿嘧啶+高能聚焦超声刀治疗。采用免疫组织化学SP法对瘤组织进行检测。结果成功建立荷瘤小鼠模型。治疗后肿瘤体积无显著变化,局部组织出现焦化,而对照组肿瘤增长明显,无任何外观变化;且治疗后瘤组织中突变型p53蛋白的阳性率有明显下降。结论化疗药物氟尿嘧啶与物理治疗高能聚焦超声刀的有效结合对人回盲肠癌裸鼠肿瘤的治疗有一定效果。

人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响

目的构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响。方法采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE。经测序检测后,用PmeI酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组。经PacI酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒。利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度。用Western blot检测目的基因的表达。采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响。结果成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体。Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达。收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL。转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少。结论hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用。

肝癌细胞BEL-7402中STAT3的组成性活性及对细胞迁移影响的研究

信号转导和转录激活因子(STATs,Signaltransducersandactivatorsoftranscription)是JAK-STATs信号途径中一类重要的DNA结合蛋白,其异常表达和活化与多种肿瘤相关。本文研究发现,在肝癌细胞BEL-7402中STAT3具有组成性活性,能够持续地磷酸化,并转移入细胞核中行使功能。同时,我们成功构建了绿色荧光蛋白(GFP)标记的STAT3野生型(WT)/突变体(CYF)融合质粒,将其转入细胞,以荧光素酶报告系统验证了融合蛋白的活性;通过测定绿色荧光为标记的细胞迁移距离的方法证实,过表达野生型STAT3对肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移有促进作用,而突变体STAT3能够降低癌细胞的迁移。

浅谈如何激发小学生学习数学的兴趣

“兴趣”是最好的老师,在小学数学教学中,要有效的激发学生的学习兴趣。变“要我学”为“我要学”。那么,如何激发学生的学习兴趣,改变学生的学习状态呢?

辐射诱导性自杀基因在胰腺癌细胞中的表达

目的利用辐射敏感的早期生长反应基因1（Egr-1）启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK），观察其在胰腺癌细胞中的表达效果。方法以细菌内同源重组法构建含绿色荧光蛋白（GFP）做标志基因的TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK，转染人胰腺癌细胞系PC-360Co-γ射线照射后，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量分析各不同照射剂量组TK基因的mRNA表达。Western印迹法分析60Co-γ射线照射后转染pAdEgr-1-TK细胞中TK蛋白质的表达量。结果重组腺病毒载体pAdEgr-1-TK转染胰腺癌细胞系PC-3，不同剂量60Co-γ射线照射后，经RT-PCR半定量分析，TKmRNA表达结果分别为0Gy（67．3±2．1）％、5Gy为（89．3±1．0）％、7．5Gy为（114．7±5．7）％、10Gy为（140．5±3．1）％、15Gy为（134．5±4．0）％、20Gy为（117．4±3．4）％，各照射组TKmRNA表达均明显高于对照组0Gy（均P〈0．01），尤以剂量为10．0Gy时最为显著。Western印迹分析结果分别为0Gy为（5．4±0．7）％，5Gy为（7．6±0．9）％，7．5Gy为（21．5±1．5）％，10Gy为（35．7±1．4）％，15Gy为（32．1±1．2）％，20Gy为（28．8±1．5）％，60Co-γ射线照射可明显提高转染pAdEgr-1-TK细胞中TK的蛋白质表达量，且蛋白质表达量与辐射剂量呈正相关性。结论放射敏感性启动子Egr-1基因可驱动TK自杀基因在胰腺癌细胞中高效表达。

辐射调控自杀基因的腺病毒载体在胰腺癌细胞中的表达

早期生长反应基因-1（Egrd）启动子可由电离辐射诱导，使得转导基因的表达可从时间与空间上进行调控，由此驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（TK）在胰腺癌细胞中高效表达，提高杀伤胰腺癌细胞的效率，本研究旨在观察辐射调控下的自杀基因的腺病毒载体在胰腺癌细胞中的表达。