响应面法优化黄精活性成分的提取工艺

目的 运用响应面法优化中药黄精中多糖、皂苷、多酚、黄酮的提取工艺。方法 利用超声提取,苯、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂进行梯度萃取,Design-Expert软件中心组成设计实验,紫外-可见分光光度法含量测定。结果 经单因素筛选,黄精活性成分提取温度范围确定为31~54℃,料液比范围确定为1∶5~1∶15,超声频率范围确定为24.00~32.00k Hz,超声时长范围确定为10~50min。选取影响因素较大的料液比和超声频率进行两因素三水平正交实验,结合黄精多糖、皂苷、黄酮及多酚的提取率,确定优化的超声频率和料液比为24.80k Hz和1∶10.62。结论 响应面法优化黄精提取工艺结果较单因素筛选和未优化前的活性成分提取均有显著提高。表明建立的实验模型稳定可靠,优化结果可以为黄精药材和黄精炮制品的合理开发和利用提供理论支持,同时可为其他中药材提取工艺的优化提供指导性意见。

护肝片中5种木脂素成分的高效液相-荧光检测研究

目的：建立同时测定护肝片中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素含量的HPLC－FLD方法。方法：用Cosmosil C18（4．6mm ×250mm，5μm）色谱柱，甲醇（A）－水（B）（85：15）等度洗脱；流速：0．6mL／min；柱温：35℃；进样量5μL，检测波长：254nm和330nm分别为激发波长和发射波长。结果：5个活性成分分离度良好，各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系（R2≥0．9990）；加样回收率在84．21％～105．04％范围内；RSD值在1．17％～2．18％范围内。结论：本研究建立的方法简单可靠，具有良好的精密度、重现性和稳定性，可用于护肝片中主要活性成分的同时定量分析，为不同产地、不同批次的护肝片的质量评价和质量控制提供了科学有效的依据。

知母呋甾烷醇型皂苷的质谱裂解行为研究

目的:应用UPLC-MS/MS方法研究知母中呋甾烷醇型甾体皂苷质谱裂解规律。方法:采用Waters UPLC HSS T3(2.1 mm×150 mm,1.8μm)色谱柱及HSS T3(2.1 mm×5 mm,1.8μm)预柱。流动相:A相10 mmol/L甲酸铵水溶液;B相乙腈溶液,二者均含有0.1%甲酸。4000-Qtrap检测器,ESI离子源,正离子模式下采集[M+NH_4]^+数据。结果:总结了5个呋甾烷醇型甾体皂苷标准品在正离子模式下的特征碎片离子及其质谱裂解规律。结论:阐明知母呋甾烷醇型甾体皂苷的质谱裂解规律将有助于对知母皂苷类化合物的结构解析。

知母、麦冬和薯蓣中螺甾体皂苷的质谱裂解规律研究

目的:运用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法研究知母、麦冬和薯蓣中螺甾烷醇型甾体皂苷的[M+NH_4]^+离子质谱裂解行为。方法:采用电喷雾离子源,在阳离子模式下运用低、中、高不同碰撞能,研究5种螺甾烷醇型甾体皂苷质谱裂解规律。结果:总结了5种螺甾烷醇型甾体皂苷氨化离子的质谱裂解行为,其特征为螺甾烷醇型甾体皂苷首先失去17 Da,然后由外端至内端依次中性失去C-3上的各个糖基,生成特征性的[苷元+H]^+离子,最后[苷元+H]^+离子E环断裂脱去相应侧链和水分子。结论:阐明了螺甾烷醇型甾体皂苷质谱裂解行为,该研究将有助于知母、麦冬和薯蓣相关甾体皂苷类化合物的结构解析。

续断盐炙前后13种指标性成分的变化研究

目的比较续断盐炙过程中13种指标性成分的含量变化。方法利用超声提取,高效液相色谱法对续断盐炙前后环烯醚萜、三萜皂苷、挥发油和苯丙素,这4类成分中13种指标性成分进行了含量测定。结果续断盐炙后川续断皂苷Ⅵ,马钱苷酸和当药苷的含量均有明显的增加;续断苷A,续断苷B,林生续断苷Ⅰ,5-羟甲基-2-呋喃甲醛,绿原酸,咖啡酸,异绿原酸A,异绿原酸B和异绿原酸C这9种成分的含量均有不同程度的减少。结论阐明续断盐炙过程中化学成分的变化,可以为其作用机制的阐释提供理论依据。

UPLC同时测定不同产地连翘中8种成分

目的:建立不同产地连翘(青翘、老翘)中8种成分的UPLC含量测定方法。方法:采用超高效液相色谱法,BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相甲醇(A)-水(B)(各含0.1%甲酸)梯度洗脱(0~2 min,10%~20%A;2~3 min,20%~30%A;3~6 min,30%~60%A;6~6.01 min,60%~10%A;6.01~9 min,10%A);柱温40℃,流速0.4 m L·min^(-1),检测波长235 nm,进样量2μL。结果:该方法在6 min内实现对连翘中芦丁,连翘酯苷A,(+)松脂素-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷,vlaolinol,(-)-落叶松树脂醇,连翘苷,(+)松脂素,连翘脂素8种成分的完全基线分离,精密度、稳定性和重复性RSD均<3%,各成分的回收率在98.8%~101.4%,RSD 1.0%~1.9%。结论:该方法简便、快捷、准确且灵敏度高,可为连翘的质量评价提供依据。主成分分析结果提示不同产地、采收、加工方法都是影响药材质量的关键因素。

超高效液相色谱-高分辨质谱法同时测定类叶牡丹中9种三萜皂苷类成分

目的建立超高效液相色谱-高分辨质谱法(UPLC-FT/MS)同时测定类叶牡丹Cauorlhyllum robustum中9种三萜皂苷类成分的方法。方法采用正离子模式;色谱柱:ACE Excel 3 C_(18)(100 mm×2.1 mm,3.0μm);保护柱:ACE Excel 3C_(18)(12.5 mm×4.6 mm,3.0μm);流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)溶液,梯度洗脱,体积流量0.40 m L/min,柱温35℃。结果定量分析的类叶牡丹中三萜皂苷类成分在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.996);加样回收率和RSD分别在98.49%~107.03%和1.00%~3.33%。结论本研究建立的同时测定类叶牡丹中9种三萜皂苷类成分的UPLC-FT/MS定量分析方法灵敏度高、分辨率高、质量稳定并且简便、准确,可为综合评价类叶牡丹的质量提供参考。

3个辽东楤木三萜皂苷同分异构体的电喷雾质谱区分

该研究采用超高效液相色谱串联三重飞行时间质谱（UPLC-Triple-TOF-MS）对3个辽东楤木三萜皂苷同分异构体（Ⅵ,Ⅶ和B）进行质谱区分。通过分析楤木皂苷Ⅵ（1）和楤木皂苷Ⅶ（2）的[M＋Na]＋的二级质谱（CE=90 e V）,二者在m/z981.502 5[Y0α＋Na]＋,819.443 3[Y0α-Glc＋Na]＋,527.157 2[C3β＋Na]＋,509.150 4[B3β＋Na]＋和365.106 5[C3β-Glc＋Na]＋处产生了相同的碎片离子峰,而楤木皂苷B（3）的[M＋Na]＋二级质谱在m/z 671.198 2和689.208 7处产生了2个明显不同的碎裂离子峰,其分别归属于[B4β＋Na]＋和[C4β＋Na]＋。因此,[B4β＋Na]＋和[C4β＋Na]＋可作为化合物3区分其他两个异构体（1和2）的特征性的诊断离子。进一步分析楤木皂苷Ⅵ（1）和楤木皂苷Ⅶ（2）的[M＋NH4]＋或[M＋H]＋的二级谱图（CE=40 e V）,二者在m/z 455.350 7和437.341 2处产生相同的苷元脱水碎片离子峰,其分别归属于[苷元-H2O＋H]＋和[苷元-2H2O＋H]＋。楤木皂苷Ⅵ（1）的苷元类型是刺囊酸,其[苷元-2H2O＋H]＋和[苷元-H2O＋H]＋的离子强度比值〈1,而楤木皂苷Ⅶ（2）的苷元类型是常春藤,其[苷元-2H2O＋H]＋和[苷元-H2O＋H]＋的离子强度比值〉1,基于此可以有效区分楤木皂苷Ⅵ（1）和楤木皂苷Ⅶ（2）。以上研究表明,利用电喷雾二级质谱法可以快速、简便、准确地区分3种楤木皂苷（Ⅵ,Ⅶ和B）异构体。

黄精酒制后活性成分的变化研究

目的寻找黄精炮制过程中起作用的活性成分并比较炮制前后活性成分的变化。方法利用超声提取,连续回流提取法,乙酸乙酯、正丁醇等溶剂萃取等方法,使用紫外-可见分光光度法分别进行含量测定。结果总结了酒黄精中皂苷、黄酮、多糖、蒽醌、多酚以及浸出物、吸湿性等变化情况。结论阐明炮制黄精发挥药理活性的化学成分,可为其作用机制的阐释提供理论依据。

HILIC-UPLC-MS/MS法鉴定知母中皂苷类成分

目的:亲水作用色谱-串联二级质谱法(HILIC-UPLC-MS/MS)鉴定知母中皂苷类成分。方法:采用亲水作用色谱柱Waters ACQUITY UPLC BEH Amide(2.1mm×100mm,1.7μm),保护柱为Waters BEH Amide(2.1mm×5mm,1.7μm),流动相为含10mmoL甲酸铵的0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱(0~5min,95%~90%B;5~20min,90%~80%B;20~30min,80%~50%B)。结果:螺甾烷醇型对照品的保留时间明显小于呋甾烷醇对照品的保留时间,类似正向分配色谱,基于此可区分甾体皂苷的种类。分析CE=8eV的MS/MS谱,根据其中性损失的区别可鉴定该知母呋甾烷醇皂苷元C;位是否连有取代基及取代基的种类;分析CE=15eV的MS/MS谱,可根据其中性损失的区别鉴定该皂苷糖链中的戊糖、甲基戊糖、己糖及其组合,从而确定C;和C;糖链中糖基的种类及连接组成;分析CE=35eV的MS/MS谱,根据其特征裂解途径可确定其皂苷元的化学结构。通过对11个甾体皂苷对照品色谱行为和二级质谱裂解规律的总结,建立了基于HILIC-UPLC-MS/MS的甾体皂苷分析方法,鉴定了35个知母甾体皂苷,包括8个螺甾烷醇型甾体皂苷,27个呋甾烷醇型甾体皂苷,9个皂苷为反向色谱中未检测到的知母皂苷,经过SciFinder数据库查询,确定峰20和25为潜在的新化合物,峰1和13为首次在知母中发现。结论:运用亲水作用色谱串联三重四极杆质谱技术对知母中皂苷类成分进行较全面的分析,建立的分析方法在拓宽知母皂苷成分研究思路的同时,也为知母质量控制与临床应用提供借鉴。