豆油对头孢菌素C发酵影响的初步研究

本文主要考察了基础培养基添加豆油以及不同发酵时间流加豆油对头孢菌素C发酵特性的影响。实验结果表明在72h,84h,96h三个时间添加点中,以72h添加豆油为最佳;72h的豆油添加中以0.8%的添加量效果最好,其脂肪酶活比对照平均高出14.8%,放瓶效价提高6.6%。为以后进行的发酵罐实验提供了有参考价值的数据。

葡萄糖酸钙对肌苷发酵中糖代谢途径关键酶酶活力的影响

在肌苷发酵过程中向培养基中添加葡萄糖酸钙,研究其对葡萄糖代谢途径中关键酶酶活力和肌苷合成的影响,结果显示适量的葡萄糖酸钙能提高6-磷酸葡萄糖脱氢酶和葡萄糖激酶的酶活力,促进肌苷的合成。

金属离子对枯草芽孢杆菌合成肌苷的影响

通过向摇瓶中添加Mn^(2+),Zn^(2+),Co^(2+),Mo^(2+),Cu^(2+)5种金属离子,考察各种金属离子对肌苷生产菌的生长、葡萄糖的利用以及肌苷积累的影响。初始培养基中添加Mn^(2+)对产苷有促进作用,而Co^(2+)、Zn^(2+)、Mo^(2+)随着浓度的增加有明显的抑制作用。Cu^(2+)能明显抑制菌体的生长,从而抑制肌苷的生成。针对Mn^(2+)对葡萄糖脱氢酶的活力进行了初步的研究,发现添加Mn^(2+)能促进葡萄糖脱氢酶的活力,葡萄糖在葡萄糖脱氢酶的作用下生成葡萄糖酸,增大了HMP途径的通量,放瓶肌苷含量为14.92 g/L,对照组肌苷含量为11.94 g/L,提高25%。

不同有机氮源对肌苷合成的影响

通过研究不同有机氮源对肌苷合成的影响,结合蛋白、核酸及菌体生长的分析测定,结果显示:国产酵母膏A是肌苷发酵的理想氮源。此外,由于国产酵母膏A部分可溶,其水解出的氨基酸的碳骨架可能作为前体物质直接进入糖酵解和三羧酸途径,使得以国产酵母膏A为氮源时肌苷生产期的呼吸熵(RQ)由1.0降至0.6左右,从而促进了肌苷的合成,糖苷转化率由原来的15%提高至29%。

链霉素抗性突变理性筛选avermectin高产菌株

为提高菌株avermectin的产量 ,本文以链霉素抗性为选择压力 ,对除虫链霉菌Streptomycesavermi tilis进行紫外诱变 (2 53 7nm ,30w ,照射时间 45s) ,得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高 2 5 %以上的 4株突变株 ,其中 2株提高水平达 30 %以上。实验表明了链霉素抗性突变与产抗生素突变之间的密切联系。同时 。

枯草芽胞杆菌肌苷发酵过程参数相关分析

基于参数相关的研究方法已成功地应用于多个发酵产品的过程优化,本文通过对枯草芽胞杆菌肌苷生产过程的尾气变化规律、碳氮源消耗和产物浓度的分析和计算,并根据摄氧率(OUR)、二氧化碳释放率(CER)、呼吸熵(RQ)和产物得率(YP/G)的相关性,在工程尺度将发酵过程分为4个阶段,为其他尺度的研究和过程优化提供了线索。

葡萄糖酸钙对肌苷发酵的影响

在肌苷的摇瓶发酵过程中,10 g/L的葡萄糖酸钙适于肌苷的合成和菌体生长。初始培养基中加入10 g/L的葡萄糖酸钙,能够诱导葡萄糖酸激酶的生成,大幅提高其比活,增大磷酸戊糖(HM P)途径的通量。肌苷的产率由10.76 g/L提高到18.36 g/L。

基于参数相关分析的头孢菌素C发酵过程溶氧调控策略

运用多参数检测的生物反应器及其相关计算机软、硬件技术,对头孢菌素C发酵过程中表征细胞代谢的宏观代谢特征参数进行了检测与相关性分析,表明发酵前期菌体形态分化有利于增加溶氧,膨大、断裂菌丝的形成能够启动头孢菌素C合成;发酵中期添加豆油为菌体提供碳源、同时兼作消泡剂,发酵后期添加豆油仅起消泡剂作用。在以上分析的基础上从过程理论上提出了头孢菌素C发酵中溶氧控制的策略。

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2 a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响 ,结果表明 ,当基础料中腺嘌呤含量为 2 0μg/m L,在发酵进行至 1 2 h时再加入 2 0μg/m L腺嘌呤时 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别达到了 7.3× 1 0 6IU/m L及 6 .77× 1 0 7IU/mg。发酵过程中后期补入适量葡萄糖 ,且维持低糖水平 ,有利表达。维持总碳源含量不变 ,使培养基中葡萄糖与蔗糖比例为 1∶ 0 .1 ,结果 IFN- α2 a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上。在发酵进行至 1 2 h时 ,加入 2 g/L谷氨酸 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照提高了 1 .76倍及 1 .94倍 ,而添加 0 .2 5～ 1 .0 g/L赖氨酸也能显著提高表达水平。培养基初始 p H对产物表达有较大影响 ,初始 p H为 6 .5时 ,对表达最有利。利用上述摇瓶培养优化条件 ,在 2 .6 L 生物反应器中进行补料分批培养 ,人 α2 a干扰素生物活性达到了1 .3× 1 0 7IU/m L,为原工艺的 3倍。

酿酒酵母重组人α2a干扰素补料分批培养

在 2 .6L全自动发酵罐中对人 α2 a干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究。结果表明 ,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖 ,并维持低糖浓度 ;在培养 1 0 h～ 2 0 h时 ,恒速流加 2 0 mg/L的腺嘌呤 ,能较大幅度提高表达水平 ,生物活性从原工艺的 3.1× 1 0 9IU/L提高至1 .3× 1 0 10 IU/L。表达期 p H值对生产水平有很大影响 ,宜控制在 5.0～ 5.

红曲色素高产菌株的高通量选育

该文结合24深孔板微型化培养和酶标仪检测,建立了红曲色素高产菌株的高通量筛选方法,此法简单、快速、准确且自动化水平较高。确定最佳培养条件为装液量1.2mL/孔(每孔体积为10mL),接种量9%;找出红曲色素最大吸收峰值,确定酶标仪检测波长为530nm;通过紫外-氯化锂复合诱变处理,经过高通量筛选获得9株正突变株,其中菌株D39微孔板发酵色价达42.7U/mL,比出发菌株提高了46.2%;将D39分离纯化并用摇瓶验证,得到纯菌株D39-4的摇瓶发酵色价为206.5U/mL,比出发菌株提高了51.1%,具有很好的工业应用前景。

金属离子对林可霉素生物合成的影响

采用优化设计方法研究金属离子在林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)林可霉素生物合成中的交互作用,并应用均匀设计法,以最终发酵液的生物效价为目标函数建立模型,通过软件Uniform Design Version 3.00分析得出优化配比:FeSO4.7H2O 0.45g/L,CuSO4.5H2O 1g/L,MnCl21g/L;按优化方案添加金属离子,使发酵液的最终生物效价较原配方提高20%,明显提高了林可霉素的发酵水平。

龟裂链霉菌工业菌中zwf1基因的阻断对土霉素生物合成影响

目的运用代谢工程手段对龟裂链霉菌工业菌(Industrial Streptomyces rimosus,SRI)进行基因改造,提高土霉素(oxytetracycline,OTC)产量。方法利用pKC1139质粒阻断SRI基因组中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase)编码基因zwf1。结果筛选得到一株OTC高产突变株,将突变株与原始菌株进行发酵,发现OTC产量比原始菌株提高了36.2%。结论 SRI基因组中zwf1基因的缺失使细胞合成土霉素的能力增强;龟裂链霉菌中初级代谢关键基因调控会影响次级代谢。

活细胞传感仪在嗜酸乳酸杆菌培养过程中的应用

活细胞是嗜酸乳酸杆菌发酵过程的目标产物,但长期以来一直缺乏一种能快速、准确地检测发酵液中活细胞量的方法,本文引入了一种基于电容原理的活细胞量测量新方法,探讨了其在嗜酸乳杆菌培养过程中在线应用的可行性。研究结果表明,活细胞传感仪测定的活细胞数与平板活菌计数法测定的菌体浓度有非常好的线性关系,相关系数达0.9944,在相同的实验条件下,仪器测定数据具有较好的重复性,基于电容值计算出的比生长速率比基于CER、OUR计算出的比生长速率更可信。因此活细胞传感仪为嗜酸乳杆菌培养过程在线监测提供了一种简便、精确的方法。

米曲霉产米黑根毛霉脂肪酶高通量筛选方法的建立

为了快速、高效地筛选出高产米黑根毛霉脂肪酶(RML)的米曲霉菌株,利用常温常压等离子体诱变技术(ARTP)对米曲霉孢子进行诱变,优化了高通量检测RML酶活的双指示剂法,建立了24孔板米曲霉高通量培养体系。通过对诱变后的1200孔(36000~48000个孢子)进行高通量筛选,最终筛选出4株米曲霉高产突变株。经由摇瓶验证,突变株Ⅰ7-D6-7、Ⅱ4-4B-5、Ⅲ3-5C-1、Ⅴ7-6C-3酶活分别达到了265.98、240.90、253.52、293.50 U/mL,比出发菌株的酶活(176.52 U/mL)分别提高了50.68%、36.47%、43.61%、66.27%。

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nestin并具有多分化潜能,还发现NSCs与支持细胞(SCs)共培养时神经元分化比例高达60%(P<5)。研究发现细胞生长因子EGF(20 ng/mL)和bFGF(20ng/mL)能有效促使NSCs在无血清条件下增殖,并且支持细胞促进其向神经元分化。

一株乳酸菌的鉴定、生物学特性与发酵培养基优化研究

对一株饲用乳酸菌菌种SJ2-2进行菌株的16S rDNA分子生物学鉴定及生物学特性研究,进而采用响应面法优化其菌体生长培养基。结果表明,该菌为干酪乳杆菌,能够耐受2.5 g/L的牛胆盐和7%的NaCl,在pH为2.5～4.5的环境中仍然能够生长,且耐热能力较强。响应面优化分析得到的最优培养基组成为:工业葡萄糖36g/L,玉米浆50.4 mL/L,无水乙酸钠10.42 g/L,MgSO4 7H2O为0.2 g/L,MnSO4 H2O为0.01 g/L,FeSO4 7H2O为0.01 g/L,NaCl为0.01 g/L,吐温80为1 mL/L。在此最优条件下,干酪乳杆菌菌体生物量OD600值达到3.686,比优化前提高了81.8%。

基于电容测定的罗汉果细胞超低温保藏快速方法

建立了一种基于活细胞电容值定量测定的植物细胞超低温保藏的快速评价方法,优化了罗汉果细胞超低温保藏方法。通过采用活细胞传感仪测定冻存后细胞的存活率并结合细胞生活力(细胞线粒体活性/TTC)对罗汉果细胞的低温保藏过程进行优化,确定了罗汉果细胞较为适宜的冷冻保护剂组分为基本培养基中添加10%的蔗糖和10%的DMSO。预处理剂的考察实验表明,采用0.2 mol/L蔗糖的预处理剂处理细胞时冻存后细胞存活率和细胞活力较高;采用0.2 mol/L蔗糖预处理剂处理细胞时,随着预处理时间的增加,细胞存活率先增加后降低,预处理时间为9 h时,细胞存活率和细胞活力最高。保藏后的细胞复苏实验结果表明:细胞存活率与采用活细胞电容值得到的细胞存活率具有很好的一致性,同时经过冻存的细胞复苏培养后,仍保留了原始细胞的形态和合成甜苷V的特性,说明该冻存方法适用于罗汉果细胞的超低温保藏。因此基于活细胞传感仪测得的电容值进行细胞冻存过程细胞活性的快速评价方法具有较好的可行性和可靠性。