两株不同致病力H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析

为了找到H9N2亚型禽流感病毒毒株致病力增强的分子线索,对致病力存在明显差异的2株H9N2亚型禽流感病毒进行了全基因组序列测定和分析。遗传进化分析表明,2株H9N2亚型禽流感病毒发生了基因重配,内部基因来源具有多样性。氨基酸序列分析表明,强致病力毒株A/chicken/Shandong/818/2010和A/chicken/Shandong/196/2011在HA受体结合位点、NA唾液酸结合位点和潜在糖基化位点处存在显著差异,SD/818在PA蛋白55位氨基酸和336位氨基酸等重要功能位点处出现了与致病力增强有关的突变,这种致病力增强的分子机制需要进一步探究。

鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因。将其cDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green I染料法,建立标准曲线并分析其溶解曲线。结果表明,这4种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性。此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段。

1998年～2012年鸡源H9N2亚型禽流感病毒NS基因的分子演化规律分析

本研究对1998年～2012年分离自我国的32株H9N2亚型禽流感病毒的NS基因进行了克隆和序列测定,并对这些序列进行了系统分析。进化分析表明,在我国流行的H9N2亚型禽流感病毒的NS基因主要属于等位基因A群的BJ/94分支,而属于G1分支的毒株很少被分离到;我国H9N2流行株不断演化出新的亚分支,2000年之前的毒株主要属于Y280亚分支,2007年之后F/98亚分支的毒株逐渐演化为优势谱系。对毒株氨基酸序列的分析表明,部分H9N2亚型禽流感病毒的NS蛋白具有高致病性毒株的分子特征。

义务教育阶段数学创新性考查要求的实施路径探析

创新能力是贯彻立德树人、全面发展素质教育的重要目标。义务教育阶段,数学创新性考查要求聚焦与创新性高度关联的学科素养和关键能力,融入数学必备知识和数学思维,立足于数学的即用、知用、善用能力发展水平的检测,为实现"五育"并举、评价正确导向教学发挥筑牢着力点与支撑点。

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定

为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank中登录的犬β-防御素基因cBD1(canis familiarisβ-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1的分子质量相一致。Westernblot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单克隆抗体发生反应,显示重组蛋白获得了表达。结果表明,成功表达的cBD1为新型抗菌制剂的研制奠定了试验基础。